全 文 ：FL -1 多功能吸附树脂对沙棘叶总黄酮的分离纯化
欧来良1, 李家政2, 孔德欣1, 王瑞芳1, 史作清1Ξ
(11 南开大学 生物活性材料教育部重点实验室 分子生物学研究所, 天津　300071;
21 天津大学 高分子材料研究所, 天津　300072)
摘　要: 目的　考察 FL 21 多功能吸附树脂对沙棘叶中总黄酮的分离纯化方法。方法　根据沙棘叶黄酮的结构特
征, 考察了 FL 21 树脂的吸附性能, 并采用高效液相色谱法对沙棘叶总黄酮进行了定量分析。结果　FL 21 树脂对沙
棘叶总黄酮具有较高的吸附选择性, 70% 乙醇作为脱附剂, 产品中总黄酮含量为 4012%。结论　FL 21 树脂用于沙
棘叶总黄酮的分离纯化简便有效。
关键词: 沙棘叶; 总黄酮; 吸附树脂 FL 21; 高效液相色谱
中图分类号: R 28412; R 286102　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 12 1349 03
Separa tion and pur if ica tion of tota l f lavono ids from H ipp op hae rham noides leaves
w ith FL -1 m ultifunctiona l resin
OU L ai2liang1, L I J ia2zheng2, KON G D e2x in1, W AN G R u i2fang1, SH I Zuo2qing1
(11 T he Key L abo rato ry of B ioactive M ateria ls, M in istry of Education, Inst itu te of M o lecu lar B io logy, N ankaiU niversity,
T ian jin 300071, Ch ina; 21 Inst itu te of Po lym er M ateria ls, T ian jin U niversity, T ian jin 300072, Ch ina)
Abstract: Object　To study the m ethod fo r separa t ing and pu rifying the to ta l f lavono ids in H ipp op hae
rham noid es leaves (T FH ) w ith m u lt ifunct ional resin FL 211M ethods　A cco rding to st ructu ra l characteris2
t ic of the flavone, FL 21 resin w as system at ica lly studied fo r its adso rp t ion capab ility1 H PL C w as u sed to
m easu re the con ten t of T FH 1 Results　FL 21 resin can be u sed to p roduce the T FH w ith h igh quality1 T he
pu rity of the T FH is 4012% in the dried part of 70% ethano lic elu t ion1 Conclusion 　 It is a simp le and eff i2
cien t m ethod to separa te the T FH from H 1 rham noid es leaves w ith FL 21 resin1
Key words: H ipp op hae rham noid es L 1 leaves; to ta l f lavono ides; m u lt ifunct ional resin FL 21; H PL C
　　沙棘又名醋柳 (sea buck tho rn) , 是我国藏医、蒙
医常用药物, 具有祛痰、利肺、养胃、健脾、活血祛瘀
的药理功效。现代药理研究表明, 沙棘黄酮是其发挥
药效的主要活性成分, 具有调脂、降压、改善心肌缺
血、抗肿瘤、抗辐射等功效。目前对沙棘研究的重点
主要集中于沙棘果的开发利用, 有关沙棘叶的开发
尚处于起步阶段。从沙棘叶中制备较高纯度的黄酮
类化合物虽也有一定的文献报道, 但利用聚酰胺柱
色谱、硅胶柱色谱、纸色谱实现的沙棘黄酮的分离,
都只局限于定性鉴别, 并未真正用于提取物的制
备[1～ 4 ]。本实验通过多功能吸附树脂 FL 21 对沙棘黄
酮的分离纯化, 确定了仅通过“吸附2脱附”即可得到
较高纯度沙棘黄酮的生产工艺, 并采用高效液相色
谱法对提取物中的总黄酮进行了定量分析。
1　仪器与材料
高效液相色谱仪 (W aters 公司) , BSE—100 自
动部分收集器, HL —2 恒流泵, BU CHR—144 型旋
转蒸发仪; 甲醇为色谱级, 其余试剂均为分析纯; 多
功能吸附树脂 FL 21 (自制) ; 槲皮素、山柰酚、异鼠李
素对照品 (中国药品生物制品检定所提供, 批号分别
为: 008129914, 008129306, 008129905) ; 沙棘叶采摘
自广西, 经国家水利部鉴定部门鉴定, 属胡颓子科沙
棘属植物沙棘H ipp op hae rham noid es L. 的叶。
2　方法与结果
211　树脂的预处理及再生: 取一定量的 FL 21 树
脂, 装柱后用工业乙醇洗至加水不浑浊, 然后用蒸馏
水洗至无醇味, 再用 3～ 4 倍床体积的 5% N aOH 处
理, 水洗至中性, 备用。用 3～ 4 倍床体积 5% N aOH
即可再生。
212　沙棘叶上样溶液的制备: 称取沙棘叶 (粉碎为
直径 3 mm 左右) 100 g, 75% 乙醇回流提取 2 次, 每
次 2 h, 溶媒量分别为 10、6 倍。滤过后合并滤液, 减
压回收乙醇, 滤去不溶物, 加水至 1 000 mL , 即得。
213　水解液的制备: 定量移取相当于 110 g 沙棘叶
·9431·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004202217
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (29974015)
作者简介: 欧来良 (1972—) , 男, 博士。T el: (022) 23500660　E2m ail: ouyll001@eyou1com
的提取液于 50 mL 锥形瓶中, 依次加入 30 mL 甲醇
和 5 mL 25% 盐酸, 于沸水浴中加热水解 1 h, 冷却
至室温后转入 50 mL 量瓶中, 用甲醇洗涤 3 次, 洗
涤液转入量瓶, 加甲醇至刻度。
214　色谱条件: 色谱柱: K rom asil C18 (150 mm ×
416 mm , 5 Λm ) ; 流动相: 甲醇2水2磷酸缓冲液 (55∶
45∶013) ; 体积流量: 018 mL öm in; 检测波长: 254
nm ; 柱温: 常温。
215　标准曲线的绘制: 精确称取槲皮素对照品 25
m g, 置 25 mL 量瓶中, 用甲醇溶解并加至刻度。分别
移取该溶液 012、015、1、2、5 mL 置 10 mL 量瓶中,
加甲醇至刻度, 分别进样 20 ΛL。结果槲皮素在 20～
500 ΛgömL 与峰面积线性关系良好, 以峰面积对浓
度作图得标准方程为: Y = 679 856+ 8 485 544 X ,
r= 01999 4。
216　沙棘总黄酮纯度和产率的计算: 沙棘黄酮中几
类苷元的分子在结构上极为相似, 只是少数非强生
色基团不同, 而且相对分子质量也相差不多。因而它
们对槲皮素的响应因子都应该接近 1, 即只用槲皮
素作为对照, 产生的误差是可以忽略的, 其转换因子
可平均为 1163。计算方程式如下:
　　沙棘总黄酮苷纯度= 槲皮素含量×1163
　　沙棘提取物产率= 沙棘提取物量ö沙棘原料投放量×
100%。
217　不同洗脱溶剂对沙棘总黄酮纯度的影响: 对几
种常用的溶剂吡啶、甲醇、乙醇、醋酸乙酯进行了考
察, 发现乙醇是一种较为理想的洗脱溶剂, 结果见
表 1。
表 1　不同洗脱剂对沙棘总黄酮纯度的影响
Table 1　Effect of d ifferen t eluen ts on TFH pur ity
洗脱剂 纯度ö% 产率ö%
吡啶　　 1412 5129
甲醇　　 2917 2146
乙醇　　 3018 2120
丙酮　　 2811 2112
醋酸乙酯 2210 1181
218　沙棘黄酮在 FL 21 树脂上的动态吸附与洗脱:
精确量取 10 mL 上述经预处理的树脂, 装入交换柱
(30 cm ×110 cm ) , 通入样品溶液足量, 控制吸附流
速为 1 BV öh, 分步收集流出液, 采用比色法测定流
出液中总黄酮的量[5 ] , 树脂对总黄酮的吸附量 (m gö
mL )按下式计算。
吸附量= (原液质量浓度- 流出液质量浓度)×吸附体积树脂体积
　　吸附饱和后的树脂用纯水淋洗至中性, 70% 乙
醇解吸 (控制流速 1 BV öh) , 分步收集解吸液, 依次
测定总黄酮质量浓度, 分别绘制吸附曲线和解吸曲
线。见图 1、2。可以看出, 吸附或洗脱流速为 1 BV ö
h 时, 10 mL FL 21 树脂可以处理 50 mL 的上柱液,
即相当于 5 g 沙棘叶而不致泄露。70% 乙醇为洗脱
剂时, 4 BV 即可完全洗脱。
图 1　沙棘总黄酮在 FL -1 树脂上的动态吸附曲线
F ig11　D ynam ic adsorption curve of TFH on FL -1 resin
图 2　70% 乙醇洗脱 FL -1 树脂上沙棘总黄酮
的动态洗脱曲线
F ig12　D ynam ic adesorption curve of TFH eluted
by 70 % ethanol on FL -1 resin
219　洗脱剂浓度的选择: 取上述经预处理的树脂各
20 mL 分别装入 3 支交换柱, 分别取样品溶液各
100 mL 通入, 控制流速 1 BV öh, 吸附完毕后, 用蒸
馏水洗至中性, 然后分别用 90%、70%、50% 乙醇脱
附, 得洗脱液, 浓缩、真空干燥、粉碎得浅黄色粉末。
结果见表 2、图 3。结果显示, 随着乙醇体积分数的提
高, 纯度相应降低, 50% 乙醇作为洗脱剂虽然得到了
较高纯度的产品, 但却大大牺牲了产率。综上看出
70% 乙醇是较为理想的洗脱剂。
表 2　洗脱剂不同体积分数对纯度和产率的影响
Table 2　Effect of eluen t concen tration
on pur ity and y ield of TFH
洗脱剂 纯度ö% 产率ö%
50% 乙醇 4115 1102
70% 乙醇 3711 1168
90% 乙醇 3017 2106
3　讨论
　　研究结果表明, FL 21 树脂对沙棘叶中黄酮类化
合物具有良好的分离纯化效果, 原因主要有以下几
点: 第一, 从黄酮类的结构来看, 它具有极性的糖基
·0531· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
12槲皮素　22山柰酚　32异鼠李素
12quercetin　22kaempfero l　32iso rham netin
图 3　混合对照品 (A)和沙棘叶提取物
水解液 (B)的 HPLC 图谱
F ig1 3　HPLC chromatogram s of m ixed reference
substances (A) and TFH hydrolysate (B)
和非极性的黄酮母核, 使其总体显示弱极性, 但其又
具有酚羟基结构, 可以作为一个良好的氢键供体。而
FL 21 树脂是具有一定胺基和羰基含量的中极性高
比表面积吸附树脂, 酚羟基与羰基之间、与胺基均可
以形成专一性较高的氢键作用, 表面吸附的存在更
加强了这种作用, 正是由于这种多点协同吸附作用
导致了所得沙棘叶总黄酮的纯度大大提高。第二, 合
适洗脱剂的选择是其中另一个重要的原因, 树脂对
不同的物质的吸附作用力大小不同, 通过洗脱剂的
筛选将能够使吸附力不同的物质分开, 就 FL 21 树
脂对沙棘叶总黄酮的吸附而言, 具有弱碱性的吡啶
所得产物纯度最低, 产率最高, 说明吡啶对黄酮和杂
质均具有较高的洗脱率, 洗脱选择性较差; 醋酸乙酯
极性较小, 对黄酮和杂质成分的洗脱效果均较差; 甲
醇、乙醇和丙酮的极性较大, 在有效破坏氢键的同
时, 也能有效破坏黄酮苷元与树脂之间的物理吸附
力, 而对非极性的杂质洗脱效果较差, 从而起到选择
性洗脱的效果。考虑到经济和安全, 选择乙醇作为洗
脱剂最为理想。
　　从 FL 21 树脂对沙棘黄酮的吸附性能研究可以
看出, 每次处理沙棘叶质量与树脂的体积比为1∶2
较为理想, 70% 乙醇作为洗脱剂, 4 倍床体积则可以
基本完全洗脱。这也说明 FL 21 树脂对沙棘黄酮具
有良好的吸附洗脱性能。
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22 (2) : 972991
补肾活血煎的絮凝工艺研究
沈　霞, 张文清, 夏　玮Ξ
(华东理工大学 化学系, 上海　200237)
摘　要: 目的　探讨壳聚糖絮凝法代替醇沉法用于补肾活血煎澄清工艺的可行性。方法　壳聚糖用于补肾活血煎
的澄清, 通过对总固形物、淫羊藿苷含量的测定, 对壳聚糖的用量、药液浓缩比进行了优选, 并与醇沉工艺进行了比
较。结果　壳聚糖絮凝法与醇沉法同样能使药液澄清, 在有效成分的保留上, 前者优于后者。结论　壳聚糖絮凝法
能代替醇沉法用于补肾活血煎的澄清工艺。
关键词: 补肾活血煎; 壳聚糖; 淫羊藿苷; 絮凝工艺
中图分类号: R 28412; R 286102　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 12 1351 04
Floccula tion procedure on Bushenhuoxue D ecoction
SH EN X ia, ZHAN G W en2qing, X IA W ei
(D epartm ent of Chem istry, East Ch ina U niversity of Science and T echno logy, Shanghai 200237, Ch ina)
Abstract: Object　To study the feasib ility of f loccu la t ion p rocedu re on Bu shenhuoxue D ecoct ion, u s2
ing ch ito san in stead of a lcoho l1M ethods　U sing ch ito san clarif ier to the floccu la t ion p rocedu re of Bu shen2
·1531·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004202222
基金项目: 上海市教育基金会资助项目 (033)
作者简介: 沈　霞 (1980—) , 女, 上海人, 2002 年毕业于上海中医药大学中药学专业, 现就读于华东理工大学分析化学专业硕士研究生,
研究方向为中药制剂、中药质量标准的研究。T el: (021) 64253221　E2m ail: jo ice_ sx@ho tm ail1com