全 文 ：D e t e r m i n a t i o n o f G in s e n o s i d e R e i n S h e n g m a i I n j e e t i o n b y H P L C
W
e n I iy u
,
Y u Y a n g
,
L i B i n g g e n (Y a n g z h o u I n s t it u t e f o r D r u g C o n t r o l
,
Y a n g z h
o u 2 2 5 0 0 1 ) )
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C h
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Z h iq i n g
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H u Y u e ( J ia n g s u S u z h o n g P h a r m a e e u t ie a l F a e t o r y )
A b s t r a c t G i
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e t e r m i n e d b y H P L C
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一
0
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0 5%
p l l o s p h o r ie a e i d ( 1 9
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8 1 ) w
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e m o b il e p h a s e o n C l s e o lu m n
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D e t e e t io n w
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R e s u l t s in d l e a t e d t h a t t h e li n e a r it y o f t h i s m e t h o d w a s w e ll w it h a n a v e r a g e o f 9 7
.
3 8%
, a n d R SD I
.
8 3写
.
T h
e m e t h o d e a n b e u s e d f o r t h e a s s a y a n d q u a l i t y e o n t r o l o f S h e n g m a i l n i
e e t io n
·
K e y W o
r d s H P L C S h
e n g m a i I n j
e e t io n G i n
s e n o s id e R e
冬凌草叶中齐墩果酸的提取分离及含量测定△
河南中医学院中药系 (郑州 4 5 0 。。3) 袁 坷
摘 要 对冬凌草叶中的齐墩果酸进行 了提取分离 , 并以标准品作对照 ,采用薄层扫描法对其进
行含量测定 。 方法简便 ,结果稳定 ,重现性好 , 加样回收率为 97 . 73 % 。
关键词 提取分离 薄层扫描 含量测定 齐墩果酸
冬凌草为唇形科香茶菜属植物 R ab d os ia
r u be s c e n : ( H e nr s l
.
) H a r a
。 冬凌草中的主要有
效成分为菇类化合物 ,三菇中的主要有效成
分为齐墩果酸和熊果酸 。 据文献报道 「`〕 ,齐墩
果酸具有抑菌 、保肝 、 护肝 、 降酶 、 升白细胞 、
增强机体免疫功能等方面 的作用 ,是当前治
疗肝炎的有效药物之一 , 近年又证明有抗癌
活 ·性 [ 2一 : 。
冬凌草是河南省 的一大植物资源 , 且相
当丰富 。 我们对冬凌草叶中的有效成分齐墩
果酸进行了提取分离和含量测定研究 , 为进
一步扩大开发利用提供参考依据 。
1 仪器与试剂
冬凌草叶于 1 9 9 6一 0 9 采自河南省济源太
行山区 , 由本院标本室王中会副教授鉴定 。
齐墩果酸对照品 由中国药品生物制品检
定所提供 。
c s
一 9 3 0 1 双波 长 薄层 扫 描仪旧 本 岛
津 ) , 点样定量毛细管 ( D r u nr m o n d S e ie n t i f i e
c o u s A )
,
P B Q I 型薄层 自动铺板器 , 中草药
破碎提取器 ( 自制 , 已获国家实用新型专利 ) ,
层析柱 (加工定做 ) 。
柱 层析硅胶 ( 1 50 ~ 20 0 目 )及薄层层析
硅胶 G (青岛海洋化工厂生产 ) ;粉状活性炭 、
石油醚 、 乙酸 乙醋 、 氯仿 、 丙酮 、 甲醇均为分析
纯 。 提取用乙醇为 95 %的工业酒精 。
2 提取与分离
2
.
1 提取 : 称取一定量冬凌草叶 ,用 10 倍量
9 5% 乙醇置提取器 中 ,破碎提取 2 m in , 提取
后的药材已完全破碎成了匀浆状 ,抽滤 ,将滤
液真空浓缩至浸膏状 ,待做分离用 。
2
.
2 分离 : 分离冬凌草叶中齐墩果酸的传统
方法 , 即通过硅胶干柱层析法 , 以一定比例的
氯仿一丙酮为洗脱液进行洗脱 ,可得到齐墩果
酸结晶 。该法所用的溶剂毒性较强 , 且极易挥
发 ,价格也较高 。 该法仅适合小量样品制备 ,
不适合大量生产 。 为此作者对该法进行了改
进 , 洗脱液改用 一定 比例的石 油醚一乙酸 乙
醋 , 经实验证明 ,改进后的方法切实可行 。
将由上述方法得到的提取物浸膏用适量
决 A d d r e s s : Y u a n K e , D e p a r t m e n t o f C h in e s e M a t e r i a M e d i e a
,
H e n a n C o ll e g e o f T r a d i t i o n a l C h in e s e M e d i e in e
,
Z h e n g z h o u
△ 河南省科技攻关资助课题
.
2 3 4
.
无水 乙醇溶解 , 加 2 %活性炭 回流脱色处理 。
抽滤 , 除去活性炭后继续减压浓缩至一定量 ,
加适量层析用硅胶吸附 、拌匀 、 蒸干 、研碎成
粉装柱 , 以一定比例的乙酸 乙醋一石 油醚为洗
脱液田 , 1 0一 15 m L /m in 的流速进行洗脱 , 按
每份 2 0 m L 收集 , T L c 检识 , 相 同流份合
并 。 回收溶剂 , 回收后的溶剂可反复使用 。 在
25 一 4 2 流份中可得到齐墩果酸 ,为白色针状
结晶 , m p 2 g s C ~ 3 0 3℃ 。
2
.
3 T L C 分析 : 取齐墩果酸对照品加 甲醇
溶解配成 1 m g /m I J 的溶液作为层析用对照
品溶液 。 另取由上述分离得到的结晶加 甲醇
溶解 , 配成 1 m g /m I J 的溶液作为层析用样品
溶液 。 取一定量对照品溶液及样品溶液点于
自制 的硅胶 G 薄层板上 , 分别以 乙 酸 乙醋 -
石 油醚 ( 1 : 3) 及氯仿 一丙酮 ( 8 : 2) 为展 开剂
展开 , 取出挥去溶剂 , 喷以 20 %硫酸 乙醇溶
液显色后 , 于 1 05 ℃加热 5 m in 至斑点清 晰 。
结果表明 , 在两种不同的展开系统下 ,样品与
齐墩果酸对照品具有相 同的 R f 值 , 并呈现同
样的紫红色斑点 。
3 齐墩果酸的含量测定
3
.
1 薄层层析条件及扫描条件 : 吸 附剂 : 硅
胶 G 一 .0 3% CM C 一N a 搅拌均匀后涂布于玻璃
板 ( 1 0 C m 又 2 0 c m )上 ,厚度为 0 . 5 m m ,置室
温干后 于 1 05 ℃活化 l h , 置干燥器中备用 。
展开剂 : 乙酸乙醋一石油醚 ( 1 : 3 ) , 展开方式 :
上行展开 ,展距 18 c m 。 显色剂 : 20 %硫酸 乙
醇液 , 喷湿 润 , 1 0 ℃一 1 05 C烘烤 5 m in , 至
斑点清晰 , 放凉后 , 在紫外灯 ( 3 6 5 n m ) 下 定
位 , R f 值在 0 . 2 5 左右 。
采用 反射法单波长锯齿扫描法 , 狭缝
O
·
4 m m 又 O · 4 m m , 线性参数 s x = 3 ,灵敏度
中 ,测定波长 入 S 一 3 3 0 n m 。
.3 2 对照品溶液和样品溶液的制备 : 精密称
取齐墩果酸对照品 1 . 09 m g , 置 1 m l J 容量瓶
中 ,加 甲醇溶解并稀释至剂度 。
精密称取经干燥的冬凌草叶 10 9 , 研细
并过 60 目筛后置索氏提取器中 , 以甲醇提取
至近无色 ( 10 h ) ,将提取液浓缩至适量 ,用 甲
《中草药》 1 9 9 8 年第 29 卷第 4 期
醇转移至 10 m 1) 容量瓶中定容至刻度 。
3
.
3 线性化范围试验 : 用定量毛细管吸取上
述对照品溶液 1 . 0 、 2 . 0 、 3 . 0 、 4 . 0 、 5 . 0 拼L 点
于 同一块硅胶 G 薄层板上 , 展开 , 取出晾干 ,
喷以显色剂 , 烘烤至 出现紫红色斑点 , 放置
3 0 m in 后进行扫描测定 。 以齐墩果酸量 (拜L )
为横坐标 , 以斑点峰面积值为纵坐标作图 ,得
一 不 通过原点 的直线 , 求得 回 归方程 Y 生
2 4 2
.
9 8 3 X 一 7 6 . 8 6 5 , r = 0 . 9 9 8 7 ( n = 5 ) , 见表
1
。 结果表 明齐墩果酸在 1 . 09 ~ 5 . 45 拜g 范围
内 ,与其峰面积值呈良好的线性关系 。
表 1 齐墩果酸点样量与峰面积值关系
编号 对照品点样量 (雌 ) 测得峰面积值
1 1
.
09 19 0
.
0 39
2 2
.
18 44 5
.
55 5
3 3
.
27 740
.
59 2
4 4
.
36 950
.
36 6
5 5
.
4 5 12 61
.
8 90
3
.
4 稳定性及精密度试验 : 取齐墩果酸对照
品点样 2 川一 ,展开 ,显色后 ,每隔 30 m in 测定
一次峰面积 , 结果在 Z h 内斑点面积值基本
稳定 。 用定量毛细管取对照品溶液 2 拼L 于同
一块薄层板上点相 同浓度 5 个点 , 展开 , 显
色 ,扫描 ,结果 R S D = 2 . 3 4 % ( n = 5 ) 。
3
.
5 含量测定结果 : 吸取样 品溶液 2 拼L 点
于硅胶 G 薄层板上 , 随行点对照品溶液 1 讨 J
和 3 讨 , , 展开 , 显色 , 扫描 , 用外标两点法计
算出样品中齐墩果酸的含量 ,结果见表 2 。
表 2 样品中齐墩果酸含量测定结果
编号 齐墩果酸含量 (% ) 平均含量 (% ) 变异系数 (写 )
1 0
.
61 2
2 0
.
62 3
3 0
.
61 6 0
.
6 21 1
.
06
4 0
.
62 8
5 0
.
62 5
3
.
6 加样 回收率试验 : 取 2 拜L 对照 品溶液
J点于 硅胶 G 薄层板上 , 共 4 个点 ,在前两个
点上分别加点 2 川一 、 后两个点分别加点 4 越 -
已测定含量的样品溶液 , 另在 同一板上随行
点对照品溶液 2 和 4 拼L ,展开 , 显色 , 扫描 ,
结果 回 收 率 为 9 7 . 7 3 % ( n = 4 ) , R S D =
1
.
5 1%
。
·
2 3 5
·
4 讨论
. 4 1 本法采用室温破碎提取 , 不破坏有效成
分 , 并且仅需 2 m in 提取已基本完全 , 由于提
取快速 、 充分 、 完全 ,所以提出的杂质少 , 色
浅 , 且极易脱色 ,使得分离出的单体纯净 , 易
结晶 。 因此采用破碎提取法可节省大量的时
间 、 溶剂和能源 。
4
.
2 分离方法与传统方法相比有改进 ,新方
法中所用的溶剂为 乙酸乙酷 、 石油醚 ,这些溶
剂与传统法中所用的溶剂相比 ,具有无毒 ,无
污染 、安全 、 价廉 、 易得等优点 ,可供工业化生
产参考 。
4
.
3 采用薄层扫描法测定齐墩果酸的含量 ,
方法简便 ,快速准确 ,结果稳定 ,重现性好 , 回
收率达 97 . 73 % 。
致谢 : 在本研 究中 , 本院 中药来毕业实习
生周小 雷 、 李福 臣 、 敬 林林参加部 分实验工
作 ,在此一 并致谢 。
参 考 文 献
1 孙 燕 ,等 . 中国临床药理学杂志 , 19 8 , 4( 1 ) : 26
2 C A
,
19 6 9
,
7 1
:
28 9 3 3 w
3 C A
,
19 6 9
,
7 1
;
5 8 8 8 6 a
4 C A
,
1 9 7 8
,
8 9
:
I O 2 3 0 3 f
5 马英丽 , 等 . 中草药 , 2 9 9 3 , 2 4 ( 4 ) : 2 5 6
( 1 9 9 7
一
0 6
一
0 6 收稿 )
H P L C 法测定马钱子及伤科七味片中
士的宁和马钱子碱的含量
辽宁中医学院 (沈阳 1 1 0 0 3 2)
沈阳药科大学
张振秋 缺 沙 明 袁 昌鲁
王稚冲
摘 要 采用反相高效液相色谱法 , O D s 柱 , 以 乙睛一甲醇 一水 一冰醋酸 (4 。 : 35 : 25 : 。 . 5) 为流动
相 , 同时测定马钱子药材及伤科七味片中士的宁和马钱子碱的含量 ,数据可靠 ,结果准确 。
关键词 高效液相色谱法 士的宁 马钱子碱
马钱子为常用中药 , 始载于《本草纲 目》 ,
具有通络止痛 ,散结消肿的功效 〔`〕 。 对其有效
成分的含量测定多采用紫外光谱法〔 2〕和薄层
扫描色谱法 〔3〕 , 采用高效液相色谱法测定少
见报道 厂4 , 。 伤科七味片〔 5〕是以马钱子为君药 ,
配以三七 、血竭等七味中药配制而成 , 为有效
地控制产 品质量 , 对其中士的宁和马钱子碱
采用高效液相色谱法进行含量测定 。
1 仪器与试药
日本 岛 津 L C 一 6 A 高 效 液 相 色谱 仪 ,
S P D
一
6 V A 可见紫外检测器 , C 一 R 记录仪 ; 马
钱子药材经辽宁中医学院中药系鉴定 ;伤科
七味片依法自制 ;士的宁和马钱子碱对照品
均由中国药品生物制品检定所提供 , 所用试
剂 乙睛为色谱纯 ,其它均为分析纯 。
2 方法与结果
2
.
1 色 谱 条 件 : O D S 柱 ( 6 . 0 m m 又 1 5 0
m m )
,检测波长 2 5 4 n rn ,保留时间 2 0 m i n ,流
动相流速 1 . 0 m l 、 /m in , 流动相 为乙睛一 甲醇 -
水一冰醋酸 ( 4 0 : 3 5 : 2 5 : 0 . 3 ) 。
2
.
2 标准曲线的绘制 : 取士的宁 、 马钱子碱
对照品精密称定 , 用甲醇分别制成每毫升含
。· 05 、 .0 06 m g 的溶液 ,作为对照品溶液 。
精密吸取马钱子碱和士的宁对照品溶液
1
、
3
、
5
、
7
、
9 拼L 分别进样 , 测定色谱峰面积 ,
以士的宁和 马钱子碱的量为纵坐标 , 色谱峰
面积为横坐标绘制标准 曲线 , 结果在此范围
内均呈 良好的线性关系 , 其回归方程士的宁
来 A d d r e s s : Z h a n g Z h e n q i u , L i a o n i r l g C o l l e g e o f T r a d i t l o n a l C h l n e s e M
e
d l e i n e
.
S h e n y a n g
一
2 3 6
.