全 文 ：分光光度法测定马钱子中士的宁含量时
共存组分的干扰考察方法
北京中医药大学 ( 100029)　　张兰珍 　张　辉
摘　要　建立了分光光度法测定药材中单一成分含量时 ,共存组分干扰的考察方法。 考察了药典载马钱子中士的
宁的含量测定方法 ,表明共存物的干扰占其含量的 50%以上。并用薄层层析 -分光光度法和药典法测定了士的宁的
含量 ,结果与考察方法一致。
关键词　分光光度法　马钱子　士的宁　干扰考察方法
　　分光光度法是测定药材及制剂中成分含量的常
用方法之一 ,由于吸光度具加和性 ,共存组分对被测
成分的测定干扰较大。 虽然在制剂中通过配制阴性
液考察干扰情况 ,但经常没有考虑被测药材本身共
存组分的干扰 [1～ 4 ]。即使有些单味药的测定考虑了
本身共存组分的干扰 ,选用了双波长法 ,导数光谱法
等消除干扰 ,但干扰组分的选择经常不能代表其全
部的干扰物 [5～ 6 ]。中国药典 1995年版载马钱子中士
的宁的含量测定方法 ,是以马钱子碱作为干扰成分
建立的双波长测定法 ,并没有考虑除士的宁与马钱
子碱以外的其他许多成分 ,使测定结果偏高。我们建
立了分光光度法测定单味药单一成分含量时 ,共存
组分干扰的考察方法 ,使分光光度法测定药材及制
剂中成分含量时 ,结果更为准确。
1　仪器与试药
紫外 -可见分光光度计:日立 UV-2000(日本 ) ;
马钱 Strychnos nux-vomica L. 经本院鉴定室陈玉
婷同志鉴定 ,由本院炮制室提供 ;硅胶 GF254由青岛
海洋化工厂生产 ;士的宁对照品购自中国药品生物
制品检定所 ;试剂均为分析纯。
2　共存干扰组分的制备及药典测定方法的考察
2. 1　对照品溶液的制备: 精称士的宁对照品 3 mg ,
用甲醇定容至 10 mL。
2. 2　样品液的制备:取马钱子粉约 1. 6 g ,精密称
定 ,加氯仿 20 mL、浓氨水 0. 3 mL于锥形瓶中 ,超
声提取约 40 min,过滤 ,回收氯仿至干 ,无水乙醇转
移定容至 10 mL容量瓶中备用。
2. 3　共存干扰组分的制备及考察方法:取自制硅胶
GF254板 (硅胶 GF254粉 4. 5 g,加水适量 ,铺制成 15
cm× 15 cm的硅胶板 , 105℃活化 30 min。)刮制成
3个相同的 5 cm× 5 cm的楔形板 1、板 2、板 3(图
1)。在板 1的狭部点士的宁对照品 20μL,板 2的狭
部点样品液 100μL,板 3不点样。 在层析缸中用展
开剂 ( S1 ): 乙醚 -甲醇 ( 9∶ 1)上行展开 10 cm ,取出晾
干 ,再用 S2: 乙醚-甲醇 -氨水 ( 7∶ 4∶ 0. 2)上行展开
8 cm,取出 ,挥尽展开剂。在荧光灯下 ,刮取板 2的士
的宁部分硅胶作阳性 a,板 3与士的宁相同位置、相
同面积的硅胶作阳性参比 a′。刮取板 2前沿以下的
剩余硅胶作阴性 b,板 3前沿以下的剩余硅胶作阴
性参比 b′。 用氯仿分别将 4部分硅胶洗脱 3次 ,过
滤 ,滤液浓缩至约 5 mL,置分液漏斗中 ,以 0. 5 mol /
L硫酸萃取 2次 ,每次 4 mL,萃取液均以 0. 5 mol /L
硫酸溶液预先湿润的滤纸滤入 10 mL容量瓶 ,并以
0. 5 mol /L硫酸溶液洗涤滤器 ,洗液并入容量瓶 ,定
容。 在 UV-2000上测阳性 a和阴性 b在 190～ 340
nm的紫外吸收光谱 (图 2)。 由紫外吸收曲线看出 ,
阴性与阳性液曲线几乎重合 ,在药典载双波长 262
nm, 300 nm处测阳性与阴性液的吸光度差 ΔA阳 =
0. 061,ΔA阴 = 0. 031,阴性约占阳性的 50%。
3　 TLC-UV法与药典法含量测定比较
3. 1　样品液的制备:精密称取马钱子粉约 0. 8 g ,共
4份 ,置 100 mL带塞锥形瓶中 ,仿照 2. 2项下制备
样品液。
3. 2　标准曲线的制备: 精密称取士的宁对照品
3. 17 mg ,用无水乙醇溶解 ,定容于 10 mL容量瓶。
精取 0. 05, 0. 1, 0. 2, 0. 4, 0. 6, 0. 8 mL分别置 10
mL容量瓶中 ,用乙醇稀释至刻度 ,在 254 nm处测
吸光度 ,以吸光度为纵坐标 ,对照品浓度 (μg /mL)为
横坐标 ,绘制标准曲线 ,回归方程为:
Y= 0. 0346X - 0. 0028b, r= 0. 9998,线性范围
·301·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 4期
Address: Zh ang Lan zh en , Bei jing Universi ty of Traditi onal Chinese Medicin e and Materia Medica, Bei jing张兰珍　 1986年毕业于北京中医药大学中药学院 ,留中药化学室工作 ,又在本校获硕士学位。 现任副教授。 主持国家自然科学基金、国家新药基金项目 ,教育部 ,中医管理局研究项目 5项 ,主要从事中药和中药制剂质量标准及中药活性成分的研究。
1-士的宁　 2-马钱子　 3-空白
图 1　马钱子的 TLC图
1-士的宁 (阳性液 )　 2-共存组分 (阴性液 )
　图 2　马钱子中士的宁与其共存组分的紫外
吸收图谱
1. 58～ 25. 36μg /mL。
如上法精取 6份不同量士的宁对照品置 10 mL
容量瓶中 ,用 0. 5 mo l /L硫酸溶液稀释至刻度 ,分别
在 262 nm, 300 nm处测吸光度 ,以 Δ A( A262- A300 )
为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,绘制标准曲线 ,回归方程
ΔA= 0. 296 0X - 0. 001 90, r= 0. 999 8,线性范围
1. 58～ 25. 36μg /mL。
3. 3　薄层回收率试验: 精密吸取标准品溶液 400
μL,点在硅胶 GF254板上 ( 5 cm× 15 cm ) ,依 2. 2展
开后挥干 ,刮取士的宁部分硅胶及基线下方相同面
积空白硅胶分别用 10 mL氯仿洗涤 3次 ,过滤 ,挥
干溶剂 ,乙醇溶解定容至 10 m L容量瓶中 ,在 254
nm处测吸光度 ,由回归方程求出士的宁含量 ,结果
平均回收率为 ( 99. 9± 2. 8)% (n= 4)。
3. 4　两种含量测定方法比较: 在硅胶 GF254板
( 5 cm× 15 cm )上 ,点样品液 60μL,按 3. 3方法测
马钱子中士的宁含量 ,结果见表 1。同一批马钱子粉
用药典法测定其含量 ,结果高出 51. 9% (表 1) ,说明
药典法中没有完全消除共存物的干扰 ,与考察结果
一致。
表 1　两种测定方法结果比较 (n= 4)
方法 平均含量 (% ) R SD (% ) 共存物所占比例 (% )
T LC-UV 0. 79 3. 0 0
药典法 1. 20 3. 0 51. 9
4　讨论
4. 1　本实验表明用分光光度法不经分离直接测定
药材中单一成分含量时 ,不能以某单一成分作为干
扰物 ,而应以除去被测成分的其它所有成分作为共
存干扰组分进行测定条件的选择 ,才能使测定结果
更准确。
4. 2　中药本身除被测成分以外的其他共存干扰物
能使马钱子测定误差达到 50% ,所以不经分离用分
光光度法直接测定中药制剂时 ,不能用空白群药进
行测定条件的选择 ,应以除去被测成分或以其为主
的所有其他物作为阴性液 ,包括被测药本身所含的
共存干扰物 ,进行测定条件的考察 ,使测定方法更为
科学。
4. 3　分光光度法中的双波长法、三波长法、导数光
谱法等计算分光光度法 ,要求干扰组分相对稳定 ,测
定结果才能准确 ,而目前所通用的空白群药与被测
制剂的原料药在品种、产地、采收季节、加工方法等
方面存在一定差异 ,所以用空白群药选择出的测定
条件 ,不能代表被测制剂的真实情况。本实验所建立
的共存干扰组分的制备方法 ,用于制剂中就是将被
测制剂用薄层洗脱方法将被测成分或以其为主的成
分除去 ,剩余所有组分作为阴性液 ,使阴性液不仅与
被测制剂的原料药在品种、炮制等方面保持一致 ,并
且在辅料和加工等方面也都一致 ,同时还考虑了被
测药材本身所含的干扰成分 ,比目前的空白群药更
科学、准确。
4. 4　由于本方法是用薄层层析制备的 ,所以薄层效
果好坏直接影响刮取的量是否准确 ,因此建议最好
用不同的层析条件进行展开、比较、测定 ,使共存干
扰组分或阴性液的制备更接近真实情况。
4. 5　有关阴性液不同的制备方法对计算分光光度
法测定制剂的影响 ,我们将继续报道。
参 考 文 献
1　张　玲 ,等 .中草药 , 1997, 28( 2): 86
2　杨　桦 ,等 .中国中药杂志 , 1991, 16( 8): 474
3　龚　青 ,等 .中国中药杂志 , 1997, 22( 8): 483
4　娄红祥 ,等 .中国中药杂志 , 1996, 21( 2): 97
5　龙沛霞 ,等 .中草药 , 1996, 27( 9): 531
6　中华人民共和国卫生部药典委员会 . 中华人民共和国药典 . 一
部 . 1995: 38
( 1999-02-05收稿 )
·302· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 4期