全 文 ：3. 4　精密度试验: 以同一混合对照品溶液进样 ,每
次 20μL,重复进样 5次 ,齐墩果酸峰面积的 RSD
为 0. 7% ,熊果酸峰面积 RSD为 0. 6% 。
3. 5　重现性试验: 精密称定同一批样品 ,按供试品
溶液制备的方法分别制备 5份供试品溶液 ,分别测
定 ,结果齐墩果酸含量的 RSD为 2. 2% ,熊果酸含
量的 RSD为 1. 1%。
3. 6　回收率试验: 已知含量的各样品适量 ,加入一
定量的齐墩果酸、熊果酸对照品 ,测定 ,结果山茱萸
药材中齐墩果酸平均回收率为 99. 3% , RSD为
1. 5% (n= 6) ;知柏地黄丸 (浓缩丸 )中齐墩果酸平均
回收率为 97. 4% , RSD为 1. 9% (n= 6)。山茱萸药
材中熊果酸的平均回收率为 101. 0% , RSD 为
1. 4% (n= 6) ;知柏地黄丸 (浓缩丸 )中熊果酸的平均
回收率为 101. 1% , RSD为 1. 3% (n= 6)。
3. 7　样品测定: 吸取各供试品溶液各 10～ 20μL,
分别进样 ,测定齐墩果酸、熊果酸峰面积积分值 ,用
外标法计算含量 ,结果见表 1。
　　表 1　山茱萸药材及知柏地黄丸中
齐墩果酸、熊果酸的含量 (n= 3)
　品　名 产地或生产厂家 批号
齐墩果酸
( mg /g)
熊果酸
( mg /g )
山茱萸 江苏 0. 624 2. 944
江苏 0. 728 3. 102
安徽 0. 612 2. 761
知柏地黄丸 河南宛西制 980802　 0. 059 0. 270
(浓缩丸 ) 药有限公司 980620　 0. 063 0. 345
20000809 0. 054 0. 282
4　讨论
　　齐墩果酸甲醇液λmax为 207 nm ,熊果酸甲醇液
λmax为 206 nm。在此检测波长下 ,流动相中甲醇的紫
外吸收干扰较大 ,基线不稳。故选择 215 nm为检测
波长。
用乙腈 -甲醇 -水-乙酸胺为流动相 ,因乙腈无末
端吸收 ,与单纯使用甲醇 -水为流动相比较 [5 ] ,基线
平稳。加入盐改善了峰形 ,且将两峰的保留时间相对
拉开 ,达到基线分离 ,分离度大于 1. 5。
在进行回收率试验时 ,曾对索氏提取法、回流、
浸泡过夜后超声 3种提取方法进行了比较。 对同样
数量的样品 ,索氏提取法所得齐墩果酸、熊果酸均含
量最高 ,说明采用索氏提取法提取较为完全。
采用 HPLC法测定山茱萸、知柏地黄丸中齐墩
果酸与熊果酸含量 ,精密度优于薄层扫描法 ,勿需显
色 ,结果稳定 ,方法简便。为采用 HPLC法测定杞菊
地黄丸、金匮肾气丸、麦味地黄丸、明目地黄丸及女
贞子、山楂、连翘、栀子中齐墩果酸与熊果酸含量提
供了一种可借鉴的方法。
参考文献:
[ 1 ]　江苏新医学院 . 中药大辞典 [M ] . 上海: 上海人民出版社 ,
1977.
[ 2 ]　阴　健 ,郭力弓 .中药现代研究与临床应用 [M ] .北京:学苑
出版社 , 1993.
[3 ]　吕曙华 ,王　强 ,夏光成 . 中药女贞子中齐墩果酸、熊果酸的高
效液相色谱分析 [ J] .药物分析杂志 , 1993, 13( 5): 291-294.
[ 4 ]　李广勋 . 中药药理与临床 [M ] . 天津:天津科技翻译出版社 ,
1992.
[ 5]　曾庆煜 ,孙　敏 ,林荣禄 .十一批六味地黄丸中熊果酸测定及
其分析探讨 [ J ]. 中成药 , 1989, 11( 11): 17.
RP-HPLC法同时测定蜂胶中槲皮素和山柰酚的含量
杜海燕 ,郑志刚 ,李　婷 ,刘　彤 ,王　岩 ,高　旭
(天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂 ,天津 300142)
　　蜂胶是蜜蜂采集植物上的树脂与蜜蜂自身的分
泌物混合而成的天然物质。 具有显著的抗菌、防腐、
消炎、抑制病毒、镇痛、增进机体免疫功能及促进组
织再生等作用。蜂胶中主要含有黄酮类和萜类物质。
蜂胶活性组分中 ,具有代表性的是黄酮化合物中的
槲皮素。文献报道多采用紫外分光度法对蜂胶总黄
酮成分进行含量测定 [1～ 3 ] ,而高效液相色谱法定量
分析较少报道。本实验进行了这方面的研究 ,采用
RP-HPLC法同时测定蜂胶中槲皮素及山柰酚的含
量 ,并进行了方法学研究。其结果与比色法比较 ,重
现性好、干扰因素少 ,更能反映蜂胶的内在质量 ,使
蜂胶质量标准具有科学性与先进性。
1　仪器与试药
日本岛津 LC-6A高效液相色谱仪 , SPD-6AV
·997·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 11期
收稿日期: 2002-01-10
* 天津中医学院 96级实习生
检测器。
槲皮素 (批号: 0081-9304)、山柰酚 (批号: 0861-
9901)对照品购自中国药品生物制品检定所 (供含量
测定用 )。甲醇为色谱纯。 其他试剂均为分析纯 ,水
为去离子水。 蜂胶样品由天津达仁堂制药厂提供。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: O DS C18 ( 4. 6 mm× 75
mm );流动相: 甲醇 -0. 4%磷酸 -四氢呋喃 ( 5∶ 5∶
1) ;流速: 0. 5 mL /min;波长: 365 nm。该条件下槲皮
素、山柰酚与其他干扰成分能同时得到满意分离。
2. 2　对照品纯度试验:取槲皮素及山柰酚对照品适
量 ,各加甲醇制成 0. 2 mg /mL的对照品溶液。精密
吸取槲皮素及山柰酚对照品溶液各 5μL,按照高效
液相色谱法 (《中华人民共和国药典》 2000年版一部
附录 )测定 ,其纯度分别为 98. 8%和 100% 。
2. 3　标准曲线绘制:取槲皮素及山柰酚对照品适
量、精密称定 ,用甲醇分别制成 0. 004 mg /mL和
0. 005 mg /mL的溶液 ,作为对照品溶液。精密吸取
槲皮素及山柰酚对照品各 4, 8, 12, 16, 20μL进样 ,
测定色谱峰面积。以槲皮素及山柰酚的含量为横坐标 ,
峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线。槲皮素回归方
程为 Y= - 154. 7+ 451 043. 8X , r= 0. 999 9;线性范
围: 16～ 80 ng。 山柰酚回归方程为 Y= - 1 211. 3+
451 535X , r= 0. 999 9;线性范围: 20～ 100 ng。
2. 4　精密度考察:精密吸取槲皮素及山柰酚对照品
溶液 10μL,分别重复进样 5次 ,测定 ,结果槲皮素
峰面积的 RSD= 1. 38% ,山柰酚峰面积的 RSD=
1. 44% 。
2. 5　重现性试验:取同一批样品 ,精密称取 6份 ,按
样品含量测定方法提取、分析 ,结果槲皮素峰面积
RSD= 1. 76% ,山柰酚峰面积的 RSD= 1. 65% 。
2. 6　稳定性试验:将制备好的供试品溶液进行进样
分析 ,以后每 2 h进样 1次 ,测 3次 ,结果槲皮素含
量的 RSD= 1. 67% ,山柰酚含量的 RSD= 1. 36% ,
表明供试品溶液的含量在 6 h内基本无变化。
2. 7　回收率测定: 取同批槲皮素含量为 0. 40% ,山
柰酚含量为 0. 62%的蜂胶样品 ,精密称取 5份 ,每
份 50 mg ,分别精密加入浓度为 0. 04 mg /m L的槲
皮素对照品溶液 5 mL,浓度为 0. 05 mg /mL的山柰
酚对照品溶液 6 mL。 各份均依样品测定方法操作。
结果槲皮素平均回收率为 96. 7% , RSD= 1. 45% ,
山柰酚平均回收率为 99. 02% , RSD= 1. 06% 。
2. 8　样品测定: 取本品 100 mg ,精密称定 ,置 50
m L锥形瓶中 ,加 70%乙醇 20 mL,超声 10 min,溶
液用 0. 5倍量石油醚萃取 2次 ,残渣用甲醇定容至
100 mL容量瓶中 ,用 0. 45μm滤膜过滤 ,滤液作供
试品溶液。
精密吸取槲皮素及山柰酚对照品溶液、供试品
溶液各 10μL,注入高效液相色谱仪 ,测定峰面积 ,
计算结果见表 1。
表 1　蜂胶中槲皮素及山柰酚的含量测定 ( n= 2)
批　号 槲皮素含量 (% ) 山柰酚含量 (% )
1 0. 435 0. 715
2 0. 415 0. 645
3 0. 375 0. 675
4 0. 410 0. 690
5 0. 410 0. 610
3　讨论
3. 1　波长的选择:应用紫外分光光度计 ( UV-2100)
测定槲皮素及山柰酚的紫外吸收光谱 , 365 nm处均
有最大吸收 ,此时检测基线稳定 ,槲皮素及山柰酚前
后杂质干扰小 ,故选择 365 nm为检测波长。
3. 2　提取方法选择:实验曾将 70%乙醇提取液直
接经 HPLC分析 ,样品中槲皮素及山柰酚分离度
差 ,杂峰干扰多 ,且分析时间长达 60 min。经采用石
油醚萃取 ,脱脂 ,除去脂溶性杂质 ,且考察了石油醚
部分 ,在所测定成分处无吸收峰 ,此时样品中槲皮素
及山柰酚峰形对称 ,分离效果最佳 ,分析时间缩短一
半。 在此基础上又摸索用 1倍量的乙酸乙酯萃取两
次 ,经 HPLC分析 ,峰形好 ,分离度好 ,但损失大 ,所
以不宜采用。 故选用 70%乙醇提取 ,石油醚脱脂方
法。 实验结果显示 ,经此处理后测得的结果令人
满意。
3. 3　流动相的选择: 本实验曾选用甲醇 -水 -冰醋酸
( 600∶ 400∶ 0. 5) [4 ]以及甲醇 -0. 4%磷酸 [ 5]为流动
相 ,样品峰形钝且分离度差 ,后加入四氢呋喃 ,并调
整比例 ,经摸索 ,结果以甲醇 -0. 4%磷酸 -四氢呋喃
( 5∶ 5∶ 1)为最佳 ,样品中槲皮素及山柰酚的分离效
果最好。
3. 4　目前国内文献报道蜂胶中黄酮类化合物的含
量测定多采用比色法 ,用芦丁作对照品定量所有峰 ,
此法准确性差 ,专属性不强。 本实验采用 HPLC法
同时测定槲皮素及山柰酚含量相对干扰小、重现性
好 ,更能准确反映其内在质量 ,提高了蜂胶原有的质
量标准。 但蜂胶中的成分极为复杂 ,由于时间所限 ,
其他成分的 HPLC定量方法 ,尚需进一步研究。
参考文献:
[1 ]　高言明 . 贵州蜂胶中总黄酮的含量分析 [ J ]. 贵阳中医学院学
报 , 1998, 20( 3): 62-63.
[2 ]　曹　瑶 ,凌　娅 . 蜂胶中黄酮类化合物含量测定方法的改进
·998· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 11期
[ J ]. 蜜蜂杂志 , 1997, 12( 2): 8-9.
[3 ]　毛丽珍 ,徐世芳 . 蜂胶口服液中黄酮类化合物的测定 [ J ] . 中
草药 , 1998, 29( 4): 231-232.
[4 ]　刘松青 ,唐先哲 ,马文秀 ,等 .高效液相色谱法测定银杏叶制品
中总黄酮 [ J] .中草药 , 1995, 26( 9): 461-462.
[ 5]　蔡定国 ,缪　平 ,顾明娟 .高速逆流色谱法从银杏叶分离异鼠
李素、山柰酚和槲皮素对照品 [ J ] . 中药新药与临床药理 ,
1999, 10( 1): 44-46.
北豆根气雾剂质量标准研究
陈志歆 ,张　怡 ,王爱华
(黑龙江省医药工业研究所 ,黑龙江 哈尔滨　 150040)
　　北豆根气雾剂为北豆根经提取分离制成的中药
制剂 ,具有清咽利喉、消肿止痛之功效。临床用于治
疗急慢性咽炎已 20余年 ,疗效确切 ,毒副作用小。北
豆根总碱为北豆根中主要成分 [1 ] ,北豆根总碱含量
测定方法一直采用酸碱滴定法。 为了有效地控制北
豆根气雾剂的质量 ,我们采用了紫外分光光度法测
定总碱含量 ,克服了酸碱滴定法中终点判定难的缺
点 ,使得北豆根的测定结果更准确 ,同时为北豆根气
雾剂制定了质量控制标准。
1　仪器、试剂与样品
722型光栅分光光度计 (上海第二分析仪器
厂 ) ;蝙蝠葛碱对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;
硅胶 G(青岛海洋化工厂 ) ;试剂均为 AR级。北豆根
气雾剂 (黑龙江省医药工业研究所植化室制备 )。
2　薄层色谱鉴别
1-蝙蝠葛碱
2-北豆根气雾剂
图 1 TLC图谱
2. 1　供试品溶液的制备:取本品 20
m L,加氨水 2 mL,振摇混匀 ,用氯
仿萃取 3次 ( 40, 40, 20 mL) ,分取氯
仿液蒸干 ,用 1 mL甲醇溶解 ,作供
试品溶液。
2. 2　对照品溶液的制备:取蝙蝠葛
碱对照品 ,用甲醇制成 0. 5 mg /mL
的溶液 ,作为对照品溶液。
2. 3　薄层色谱鉴别:吸取上述 2种
溶液各 10μL,分别点于同一硅胶 G
薄层板上 ,以氯仿-甲醇-氨水 ( 8∶
2∶ 0. 2)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾
干。喷以碘化铋钾试剂 [2 ]。供试品色
谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 ,显相同颜色的
斑点 (图 1)。
3　含量测定
3. 1　对照品溶液的制备:精密称取蝙蝠葛碱适量 ,用
甲醇溶解制成 0. 1 mg /mL的溶液 ,作对照品溶液。
3. 2　供试品溶液的制备: 精密吸取北豆根气雾剂
10 mL,加氨水 2 mL,振摇混匀 ,用氯仿萃取 4次
( 20, 20, 20, 10 mL) ,分取氯仿液 ,水浴蒸干 ,残渣用
甲醇溶解并定容至 10 mL,作为供试品溶液。
3. 3　标准曲线的制备:精密吸取蝙蝠葛碱对照品溶
液 0. 1, 0. 2, 0. 3, 0. 4, 0. 5 mL,分别加 0. 1%溴甲酚
绿 0. 2 mL,无水甲醇 5 mL,摇匀 ,用 722型光栅分
光光度计在 620 nm处测吸光度 ,回归方程: A=
10. 9C+ 0. 000 65, r= 0. 999 97。结果表明 ,蝙蝠葛
碱在 0. 2～ 1. 0 mg /mL呈良好线性关系。
3. 4　稳定性试验:精密吸取一定量的供试品溶液 ,
按样品测定项下进行操作 ,每 1 h测定 1次 ,结果表
明 ,供试品在 10 h内稳定 , RSD= 1. 3%。
3. 5　重现性试验:精密吸取一定量的供试品溶液共
5份 ,按样品测定方法测定 ,结果 RSD= 1. 72% ,重
现性良好。
3. 6　回收率试验:采用加样回收法 ,精密吸取已知
含量的北豆根气雾剂 1 mL,准确加入一定量蝙蝠葛
碱对照品溶液 ,按样品测定方法测定 ,测得平均回收
率为 98. 5% , RSD= 1. 97% (n= 5)。
3. 7　样品的测定: 精密吸取供试品溶液 2 mL,蒸
干 ,加 0. 1%溴甲酚绿 0. 2 mL,无水甲醇 5 mL,摇
匀 ,在 620 nm处测吸光度。结果见表 1。
表 1　北豆根气雾剂中北豆根总碱的测定 ( n= 3)
批　号 北豆根总碱量 ( mg /m L) R SD (% )
000416 9. 89 2. 13
000527 10. 07 1. 88
000620 10. 11 2. 59
4　讨论
　　通过反复试验 ,最后确定了薄层色谱鉴别方法 ,
该方法灵敏度高 ,专属性强 ,斑点显色明显 ,结果易
于观察判断。
·999·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 11期
收稿日期: 2002-05-17