全 文 ：·药剂与工艺·
HPLC法测定远志中去羟基远志皂苷元含量
刘友平 1 ,万德光 1 ,宋　英 2⒇
( 1. 成都中医药大学药学院 ,四川 成都　 610075;　 2. 成都中医药大学附属医院 药剂科 ,四川 成都　 610075)
摘　要: 目的　建立远志药材的质量控制方法。 方法　采用 HPLC法对远志中去羟基远志皂苷元进行含量测定 ,
ODS Hyper sil色谱柱 ( 5μm, 125 mm× 4 mm) ;流动相:甲醇 -0. 05%磷酸溶液 ( 74∶ 26);检测波长 210 nm;结果　
去羟基远志皂苷元在 0. 585～ 11. 7μg范围内与峰面积呈良好的线性关系 , r= 0. 999 99;平均回收率为 99. 21% ( n
= 5) ,精密度的 R SD为 0. 25% (n= 5)。 结论　该方法简便、准确、重现性好 ,可作为远志药材及其复方制剂质量控
制标准。
关键词: 远志 ;去羟基远志皂苷元 ;高效液相色谱法
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 09 0786 02
Determination of dehydroxypresenegenin inPolygalae tenuifolia by HPLC
L IU You-ping1 , WAN De-guang1 , SONG Ying2
　　 ( 1. Co llege o f Pharmacy, Chengdu Univ ersity of TCM , Chengdu Sichuan 610075, China; 2. Depa rtment o f Pha rmacy ,
Affiliated Hospital of Chengdu Univ e rsity of TCM , Chengdu Sichuan 610075, China)
Abstract: Object　 To establish an HPLC method fo r the determination of dehydroxypresenegenin fo r
the quali ty cont rol of Polygalae tenuifol ia Willd. Methods　 Dehydroxypresenegenin w as separated by ODS
column ( 125 mm× 4 mm , 5μm) wi th a mobi le phase o f methanol-0. 05% phospho ric acid ( 74∶ 26) and
detected a t a w aveleng th of 210 nm. Results　 The calibration curv e w as linea r in the range of 0. 585～ 11. 7
μg , wi th a co rrela tion coefficient o f 0. 999 99. The average recovery w as 99. 21% (n = 5) , and RSD=
0. 25% (n= 5) . Conclusion　 Th e method is simple and accurate, wi th good repeatabi li ty and can be used
fo r the quali ty cont rol of Polygalae tenuifol ia Willd and compound preparations of Radix Polygalae.
Key words: Polygalae tenui folia Willd. ; dehydroxypresenegenin; HPLC
　　远志为一常用中药 ,《中国药典》 2000年版一部
收载其来源为远志科 Polygalaceae植物远志 Poly-
gala tenuifol ia Willd.或卵叶远志 P . sibiria L.的
干燥根。关于远志药材质量标准 , 2000年版药典一
部远志项下收载了以远志药材为对照的薄层色谱鉴
别 [1 ] ,未见对药材有效成分进行定性、定量质量控
制。 据文献报道 ,远志总皂苷为镇静、祛痰有效部
位 [2 ] ,我们进行的药效学研究结果与此一致。本研究
从远志总皂苷中分离鉴定了一齐墩果烷型三萜类化
合物去羟基远志皂苷元 ,并对其结构进行了鉴定 (结
果另文报道 )。以所分离的去羟基远志皂苷元为对
照 ,采用 HPLC法测定了药材中去羟基远志皂苷元
含量 ,方法简便 ,灵敏度高 ,重现性好 ,可作为远志药
材及制剂质量控制方法。
1　仪器和药品
　　 HP-1100高效液相色谱仪测定系统 (惠普公
司 ): ODS Hypersil色谱柱 ( 5 μm, 125 mm× 4
mm)。甲醇 (色谱纯 ) ,蒸馏水 (重蒸 ) ,所用试剂均为
分析纯。
去羟基远志皂苷元由作者自远志 P . tenui folia
的根中分离 ,并经 mp, UV , IR, 1 HNMR, 13 CNM R,
DEPT及 MS鉴定 (鉴定结果另文报道 )。
所测样品均为作者采集或收集自产区 ,均经本
校药用植物教研室万德光教授鉴定为 Polygala
tenui folia Willd。
2　方法与结果
2. 1　液相色谱条件: ODS Hypersil色谱柱 ( 5μm,
125 mm× 4 mm)柱 ,预柱 ( 2. 1 mm× 20 mm , 30
·786· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 9期
⒇ 收稿日期: 2000-12-24基金项目: “九· 五”国家重点科技攻关资助项目 ( No. 95-903-04)作者简介:刘友平 ,女 , 36岁 ,副研究员 ,硕士生导师。现在太极集团博士后工作站从事博士后研究。主要研究方向:中药质量标准化及中药新药研究。目前承担国家自然科学基金、“九· 五”国家重点科技攻关、新药研究基金、国家中医管理局青年基金及省级科研项目
25项 ,发表科研论文 26篇 ,参与编写著作 2部。 获四川省科技进步奖二等奖 2项 ,三等奖 2项。
μm);流动相:甲醇 -0. 05%磷酸溶液 ( 74∶ 26) ;检测
波长 210 nm;流速 1 mL /min;柱温 25℃。理论塔板
数按羟基远志皂苷元计算应不低于 1 800。
2. 2　对照品的纯度检查:按中药新药质量标准用对
照品研究的技术要求 [3 ] ,对所分离的去羟基远志皂
苷元的纯度进行了检查 ,按峰面积归一化法计算 ,所
分离对照品的纯度为 98. 63% ,达到了含量测定用
对照品的纯度要求。
2. 3　对照品溶液的制备:精密称取去羟基远志皂苷
元对照品 5 mg ,置 10 mL容量瓶中 ,加甲醇溶解并
定容至刻度 ,摇匀 ,即得 (每 1 mL含去羟基远志皂
苷元 0. 5 mg )。
2. 4　供试样品溶液的制备方法: 考察了甲醇提取
法、正丁醇提取法、正丁醇大孔树脂法、正丁醇超声
提取法提取皂苷对 HPLC色谱及测定结果的影响 ,
水解方法同 2. 5项下。 结果甲醇提取法提取皂苷制
备的供试液 , HPLC色谱图显示所提成分较多 ,被测
成分所受干扰较大 ;正丁醇法提取皂苷并以大孔树
脂分离纯化皂苷制备的供试液 , HPLC色谱图显示
分离度较好 ,但由于上柱皂苷损失过多 ,致使测定结
果偏低 ;而采用正丁醇提取法和正丁醇超声提取法
方法制备的供试液中测定结果接近 ,以正丁醇超声
提取更为简便、快捷、提取更完全 , HPLC色谱图显
示其分离度较好 ,故确定正丁醇超声提取法为供试
品溶液制备方法。
2. 5　供试品溶液的制备:取远志药材粗粉 2 g ,精密
称定 ,置索氏提取器中 ,加乙醚回流脱脂 2 h,取出
滤纸筒 ,挥尽乙醚 ,将药渣连同滤纸筒转移至 150
m L具塞锥形瓶中 ,精密加入水饱和正丁醇 50 mL,
密塞 ,放置过夜 ,超声处理 (功率 250 W,频率 50
Hz) 30 min,滤过 ,弃去初滤液 ,精密量取续滤液 10
m L,减压回收正丁醇 ,于残渣中加入 10% HCl 40
m L,置水浴中水解 2 h ,滤过 ,沉淀以蒸馏水洗至中
性。将沉淀以甲醇溶解并转移至 4 mL量瓶中 ,漏斗
及抽滤瓶以少量甲醇洗涤数次并入容量瓶 ,加甲醇
至刻度 ,摇匀 ,即得供试品溶液。
2. 6　标准曲线的制备:自动进样器分别取对照品溶
液进样 0. 5, 1. 0, 2. 0, 5. 0,和 10. 0μL,进行分析测
定。以对照品的质量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘
制标准曲线 ,经回归处理 ,得回归方程 , Y= 601. 66
C- 14. 68, r = 0. 999 99,去羟基远志皂苷元在
0. 585～ 11. 7μg与峰面积呈良好的线性关系。
2. 7　精密度试验: 精密吸取同一远志供试品溶液 ,
连续进样 5次 ,每次 2μL,测定峰面积 , RSD为
0. 25% (n= 5)。
2. 8　稳定性试验:取同一远志药材供试液 ,每隔 2
h进样 1次 ,每次 2μL,测定其峰面积 ,共考察 8 h,
RSD为 0. 31% (n= 5)。
2. 9　重现性试验:精密称取同一样品 5份 ,分别按
供试品溶液制备方法制得供试品溶液 ,依法测定去
羟基远志皂苷元含量 , RSD为 4. 45%。
2. 10　加样回收率试验: 精密称取已知含量的远志
药材粗粉各 200 mg ,共 5份 ,精密加入去羟基远志
皂苷元对照品溶液 (浓度为 0. 5 mg /mL) 3 mL,按供
试品溶液制备方法制得供试液 ,依法测定其中去羟
基远志皂苷元的含量 ,计算回收率 ,结果平均回收率
为 99. 21% , RSD= 2. 19%。
2. 11　样品测定:按 2. 3项下方法制备各供试液 ,自
动进样 ,依法测定 ,测定结果见表 1。 HPLC色谱图
见图 1。
A-对照品　 B-远志药材　 a-去羟基远志皂苷元
图 1　药材 HPLC图
表 1　远志样品中含量测定结果 (% )
样品编号 产地 品种 含量
(n= 3)
1 陕西合阳　 远志 1. 44
2 陕西蒲城　 远志 0. 82
3 山西汾县　 远志 1. 28
4 山西洪洞　 远志 1. 09
5 山西太谷　 远志 1. 29
6 吉林长春　 远志 0. 82
7 内蒙　　　 远志 1. 22
8 甘肃东乡县 远志 1. 09
9 甘肃临夏　 卵叶远志 1. 20
10 四川南坪　 远志 1. 43
3　结果与讨论
3. 1　远志药材富含脂肪油 ,故药材以乙醚脱脂处
理 ,除去脂溶性杂质对测定结果的影响。从测定结果
看 ,以去羟基远志皂苷为指标控制药材质量 ,样品中
含量均在 0. 70%以上 ,可用于药材质量控制。
3. 2　采用 HPLC法测定远志药材中三萜皂苷元含
量 ,该方法简便、准确、重现性好 ,可作为远志药材及
其复方制剂质量控制标准。
参考文献:
[1 ]　中国药典 [ S] .一部 . 2000.
[ 2 ]　徐国钧 ,何宏贤 ,徐珞珊 ,等 . 中国药材学 [M ] . 北京: 中国医
药科技出版社 , 1996.
[3 ]　国家药品监督管理局 . 中药新药研究的技术要求 [ S ]. 1999.
·787·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 9期