全 文 ：比色法测定复方虫草颗粒中甘露醇的含量
董钰明 1 ,刘　晖 1 ,张　军 1 ,段生玉 1 ,张经济 2⒇
( 1. 兰州医学院 药物分析教研室 ,甘肃 兰州　 730000;　 2. 甘肃省保健康复中草药研究所 ,甘肃 兰州　 730000)
摘　要: 目的　研究比色法测定复方虫草颗粒中甘露醇的含量 ,建立一种准确、可行的含量测定方法。 方法　在供
试品中依次分别加入氧化剂高碘酸钾、 L -鼠李糖与 Nash试剂 , 53℃水浴加热 15 min使呈色 ,在 412 nm处测定吸
光度 ,用比色法测定其中甘露醇的含量。 结果　在 10～ 50μg /mL范围内对 3种不同批号样品在实验条件下测定 ,
其平均含量为 1. 27% ,本法平均回收率为 100. 3% , RSD为 0. 83% (n= 5)。 结论　可作为复方虫草颗粒中甘露醇
含量测定及有关质量控制的一种简便、准确和快速的方法。
关键词: 复方虫草颗粒 ;甘露醇 ;比色法
中国分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 08 0697 03
Determination of mannitol in FUFANG CHONGCAO KELI
( compound cordyceps granule) by colorimetry
DONG Yu-ming1 , L IU Hui1 , ZHANG Jun1 , DUAN Sheng-yu1 , ZHANG Jing-ji2
　　 ( 1. Depa rtment o f Pha rmaceutical Analy sis, Lanzhou Medica l Co llege, Lanzhou Gansu 730000, China; 2. Institute of
Chinese Materia Medica fo r Health and Recover y in Gansu Prov ince, Lanzhou Gansu 730000, China )
Abstract: Object　 To develop a practical method fo r the assay of manni tol in FU FANG CHONGCAO
KELI ( FCK) by colo rimetry. Methods　 Content o f manni to l in the g ranule was assayed co lorimetrically
by determining its abso rbance at 412 nm, af ter sequential addi tion of potassium periodate, L -rhamnose and
Nash reagent to sample so lutions and w armed a t a ba th temperature o f 53℃ for 15 min. Results　 Samples
f rom three dif ferent batches of FCK were analy zed according to the above analy tical condition. The average
manni to l content in FCK was found to be 1. 27% , when the contents of reference standard mannitol in so-
lution w ere in the range of 10μg to 50μg /mL, the mean recovery w as 100. 3% and RSD= 0. 83% (n= 5) .
Conclusion　 The method may be used as a simple, accurate and rapid w ay to determine the content of
manni to l in FCK as w ell as the quality cont rol fo r the product.
Key words: FUFANG CHONGCAO KELI ( compound co rdyceps g ranule ) ( FCK) ; manni to l; co-
lo rimetry
　　复方虫草颗粒是由冬虫夏草人工发酵菌浸膏、
天然冬虫夏草、枸杞、灵芝和莱菔子等多味中草药组
成的复方制剂 ,具有滋肺、补气血、益肝肾、健脑安神
的功能。主治神经衰弱、长期失眠、头晕、头痛 ,机体
虚弱、抵抗力降低、免疫功能低下等。 冬虫夏草中含
有较大量的甘露醇 ,是虫草的有效成分之一 ,现甘露
醇已作为某些人工发酵虫草的质控指标之一 [ 1]。
甘露醇含量测定有多种方法 ,一般采用容量
法 [2 ] ,该法适用于较纯的甘露醇制剂 ,但对于含有其
它还原性物质 (如单糖等 )的中草药制剂来说 ,因其
含有的其他还原性物质也可被高碘酸氧化 ,结果使
测得的含量偏高 ,且操作较为繁琐。
甘露醇为多元醇化合物。可用比色法测其含量 ,
此法特异性高 ,许多含羟基的物质包括单糖对其无
明显干扰 ,而且方法快速简便。故本文用此法对复方
虫草颗粒中的甘露醇含量进行了测定。
1　仪器与试药
722S分光光度计 (上海精密科学仪器厂 ) , 723
分光光度计 (上海第三分析仪器厂 ) ,甘露醇 (北京化
学试剂公司 ) ,复方虫草颗粒 (甘肃省中草药保健康
复研究所 )。
2　实验方法
2. 1　标准品溶液的制备:精密称取干燥至恒重的甘
露醇标准品 50 mg,加蒸馏水 50 mL配制成浓度 1
mg /mL的甘露醇溶液 ,然后分别精密量取 1. 0,
2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0 mL各置 100 mL容量瓶中 ,加水
·697·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 8期
⒇ 收稿日期: 2000-10-25作者简介:董钰明 ( 1971-) ,男 ,甘肃天水市人。 1994年 7月毕业于兰州医学院药学系 ,硕士研究生 ,讲师。主要从事中药制剂有效成分的含量测定工作。 Tel: 0931-8289517; E-mail: Simondym@ 263. net.
稀释至刻度 ,得到浓度分别为 10, 20, 30, 40, 50μg /
m L的甘露醇标准品溶液。
2. 2　供试品溶液的制备: 取复方虫草颗粒约 2. 5
g ,精密称定 ,加蒸馏水 50 mL,回流 2 h后 ,过滤 ,用
蒸馏水洗残渣 ,将滤液、洗液合并于 50 mL容量瓶
中 ,加蒸馏水至刻度。 精密量取滤液 10. 0 mL置
250 mL量瓶中 ,加蒸馏水至刻度为供试品溶液。
2. 3　线形范围与标准曲线的制作: 取上述浓度为
50, 40, 30, 20, 10μg /mL标准品甘露醇溶液各 1
m L,分置 5个 10 mL刻度试管中 ,分别加入 1 mL
高碘酸钾溶液 ( 0. 015 mol高碘酸钾于 1000 mL
0. 12 mol /L盐酸溶液中 )混匀 ,室温放置 10min,加
2 mL 0. 1% L-鼠李糖溶液以除去过多的高碘酸盐 ,
混合后加 4 mL新鲜配制的 NaSh试剂 ( 150 g醋
酸铵+ 2 mL冰醋酸+ 2 mL乙酰丙酮 ,用蒸馏水稀
释至 1000 mL) , 53℃ 水浴加热 15 min使其呈色 ,
冷却 ,用 722S分光光度计在 412 nm波长处 ,以蒸
馏水代替甘露醇标准溶液 ,用同样方法操作作为空
白 ,分别测定其吸光度。以浓度 C为横坐标 ,吸光度
A为纵坐标 ,得回归方程为: A= 0. 06 8+ 0. 009 3
C , r= 0. 999 0, ( P < 0. 0001)。 结果表明 ,甘露醇在
10～ 50μg /mL范围内呈现良好线形。
2. 4　供试液吸收曲线绘制:取上述供试液 2 mL,依
上标准曲线制备项从 “加入 1 mL高碘钾酸溶液
……”起依法操作。 用 723型分光光度计 ,在 330～
800 nm范围内扫描 ,得以波长λ为横坐标 ,吸光度
A为纵坐标的吸收曲线 ,其最大吸收波长为 412
nm ,与文献报道一致 ,结果见图 1。
图 1　供试液吸收曲线
2. 5　阴性对照试验:按该制剂处方比例 ,将除去人
工冬虫夏草发酵菌浸膏及天然虫草的其他成分 ,按
该制剂生产工艺制成相应的阴性对照品 ,与样品同
时依上标准曲线制备项从“加入 1 m L高碘酸钾溶
液……”起 ,依法操作 ,呈色后在 723型分光光度计
上从 300～ 800 nm进行扫描 ,结果见图 2。
由图 2可见 ,在该制剂处方比例以内 ,阴性对照
品与空白对照品吸收曲线基本上重合 ,吸光度接近
零 ,表明该制剂中的其他药材对样品中甘露醇的测
定无干扰。
另外用一些单糖 (如半乳糖、葡萄糖、甘露糖 )等
图 2　样品、阴性对照品和空白对照吸收曲线
制成 50μg /mL的溶液 ,用上述比色法测其吸光度
值 ,均接近零 ,证明这些单糖对甘露醇的测定无干
扰 ,与文献 [1 ]报道一致。
2. 6　呈色稳定性试验: 为考察显色反应产物稳定
性 ,作呈色稳定性试验。取供试品溶液 1 mL依上标
准曲线制备项 ,从“加入 1 mL高碘酸钾溶液……”
起 ,依法操作 ,在 15, 20, 30 min分别测其吸光度 ,结
果见表 1。
表 1　呈色物放置不同时间后的吸光度
时间 ( min) 吸光度 吸光度平均值
0 0. 201 0. 199 0. 203 0. 201
15 0. 201 0. 199 0. 203 0. 201
20 0. 175 0. 174 0. 175 0. 175
30 0. 159 0. 160 0. 159 0. 159
　　由表 1可见 ,本法呈色物在 15 min内无变化 ,
因此比色测定吸光度应在 15 min内完成。
2. 7　精密度试验:取同一样品 5份 ,依上标准曲线
制备项 ,从“加入 1 mL高碘酸钾溶液……”依法操
作 ,呈色后在 412 nm处分别测其吸光度值 ,结果平
均为 0. 201, RSD= 0. 86%。
2. 8　日内稳定性试验:将样品溶液分别放置 2, 4和
8 h后 ,依同法测定 ,其甘露醇含量无明显变化 ,
RSD (% )为 0. 81。 表明本法重现性较好。
2. 9　样品加样回收率试验: 取浓度为 1. 002 mg /
mL的样品溶液 1 mL 5份 ,分别置 10 mL容量瓶
中 ,各精密加入浓度为 0. 1016 mg /m L的甘露醇标
准品溶液 1. 0, 1. 5, 2. 0, 2. 5和 3. 0 mL,加水释释
至刻度。取混合定容后的溶液 1 mL,依上标准曲线
制备项 ,从“加入 1 mL高碘酸钾溶液……”起依法
操作 ,结果平均回收率为 100. 3% , RSD= 0. 83%。
3　实验结果
分别取批号不同的样品 3批 ,依上述供试品溶
液制备方法操作 ,得 3个供试品溶液。分别取此供试
品溶液 1m L,依上述标准曲线制备项从“加入 1mL
高碘酸钾溶液……”起 ,依法操作 ,测定样品溶液吸
光度。由标准曲线回归方程计算样品中甘露醇的含
量。 结果见表 2。
4　讨论
·698· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 8期
表 2　样品中甘露醇含量测定结果 ( n= 3)
批号 甘露醇含量 (% , g /g) RSD(% )
980302 1. 27 0. 87
990823 1. 31 1. 02
991107 1. 24 1. 21
　　用本法测定复方虫草颗粒中的甘露醇时 ,其它
成分不干扰测定。 但若枸杞和莱菔子的用量超过处
方用量时 ,测定结果会偏高。配制高碘酸钾溶液时 ,
要注意盐酸的用量 ,最适用量为每 0. 015 mol高碘
酸钾用 0. 12 mol /L的盐酸 1000 mL溶解 ,可使呈
色物颜色均匀而稳定。
由于本法测定的结果可排除样品中其他还原性
物质的干扰 ,其测得的结果较容量法更能代表甘露
醇的实际值 ,本法比容量法可靠 ,而且比容量法快速
简便。
本法可以作为复方虫草颗粒质量标准中甘露醇
含量的测定方法 ,也可以作为含有虫草的其他制剂
中甘露醇含量测定的方法。
参考文献:
[1 ]　李雪芹 ,包天桐 ,王　雁 ,等 . 比色法测定冬虫夏草中甘露醇的
含量 [ J] .中草药 , 1999, 30( 1): 19-21.
[2 ]　中国药典 [ S] . 2000年版 .二部 .
HPLC法同时测定黄连上清丸中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量
姚仲青⒇
(南京中医院中医药研究所 ,江苏 南京　 210001)
摘　要: 目的　同时测定了黄连上清丸中 3种蒽醌类成分大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。 方法　采用 HPLC
法 ,以乙腈-0. 1%磷酸水溶液 ( 90∶ 10)为流动相 ,使用 C18柱。 结果　能使样品中的 3种蒽醌类成分得到良好分离 ,
分离度> 2,平均回收率为: 大黄素 98. 71% , RSD= 1. 11% ;大黄酚 98. 83% , RSD= 1. 41% ;大黄素甲醚 99. 25% ,
RSD= 1. 29%。 结论　应用本法能准确测定黄连上清丸中的此 3种有效成分 ,重现性好。
关键词: HPLC法 ;黄连上清丸 ;大黄素 ;大黄酚 ;大黄素甲醚
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 08 0699 02
Determination of emodin, chrysophanol, and physcion in
HUANGLIAN SHANGQING PILL
*
by HPLC
YAO Zhong-qing
　　 ( Institute of TCM , Nanjing Hospital of TCM , Nanjing Jiangsu 210001, China)
Key words: HPLC; HU ANGLIAN SHANGQIN G PILL; emodin; chry sophanol; phy scion
* HUANGLIAN SHANGQ ING PILL is a tradi tional Chinese compound medicine.
　　黄连上清丸为传统的中药制剂 ,收载于《中国药
典》1995年版、 2000年版。有文献报道对其中的小檗
碱 [1 ]、蒽醌类 [2 ]、黄芩苷 [ 3]、栀子苷 [ 4]作了定性或定
量分析 ,但对其质量标准的研究仍不完善。大黄为方
中主药之一 ,占全方的 24. 4% ,蒽醌类成分为其主
要活性成分。对蒽醌类成分的定量分析未见报道。本
文报道采用 HPLC法同时测定黄连上清丸中 3种
蒽醌类成分大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量 ,为
完善黄连上清丸的质量标准提供了依据。
1　仪器与试剂
日本岛津 LC-6A高效液相色谱仪 , SPV -6AV
紫外 -可见检测器 ; C-R3A数据处理器 ; SCL-6A系
统控制器 , RHEODYN E 7125进样阀 , CTO-6A柱
温箱 , Spheriso rb C18柱 ( 4. 6 mm× 300 mm 5μm,大
连依利特公司 )。
大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品 ,购自中国
药品生物制品检定所 ;黄连上清丸 ,市售 ,产地: 河
南 ;乙腈为色谱纯 ,其余试剂为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 流动相: 乙腈 -0. 1磷酸水溶液
( 90∶ 10) ,流速 0. 6 mL /min,检测波长 254 nm ,纸
速 1 mm /min,灵敏度 0. 04AU FS,柱温: 45℃。
2. 2　标准曲线的绘制:精密称取大黄素、大黄酚、大
黄素甲醚对照品 ,以氯仿溶液 ,分别制成 0. 2, 0. 18,
·699·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 8期
⒇ 收稿日期: 2000-09-14