全 文 ：[ 8]　钱存柔 . 微生物学实验[ M ] . 北京:北京大学出版社, 1985.
[ 9]　范青山,马振亚 . 防腐抑菌中药的微量快速筛选法研究及其应
用[ J ] . 微生物通报, 1991, ( 18: 114-118.
海星总皂苷抗肿瘤作用的实验研究
王　兵1,郑意端2X
( 1. 深圳海王生物工程股份有限公司,广东 深圳　518054;　2. 深圳源政药业有限公司,广东 深圳　518057)
摘　要: 目的　对从南海海星 Crasp id astet hesp erus Muller et tr oschel中分离提取的总皂苷进行抗肿瘤活性研究。
方法　采用体外肿瘤细胞培养和体内抗肿瘤实验方法,测定海星总皂苷的体外和体内抗肿瘤作用。结果　海星总
皂苷对体外培养的小鼠移植性肿瘤肉瘤 S 180、肝癌 H22细胞有直接的细胞毒作用; 能明显的抑制小鼠移植性肉瘤
S180的生长, 延长 H22腹水小鼠的生存时间。结论　海星总皂苷具有明显的抗肿瘤活性, 可望用于恶性肿瘤的治疗。
关键词: 海星总皂苷;抗肿瘤; 细胞毒
中图分类号: R979. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 03 0244 02
Study of astersaponin on antitumor effects
WANG Bing1, ZHENG Yi-duan2
　　( 1. Nept unus Bio eng ineer ing, Co . L td. , Shenzhen Guangdong 518054, China; 2. Shenzhen Yuanzheng Pharmaceutical
Co. Lt d. , Shenzhen Guangdong 518057, China)
Key words : astersaponin; ant itumor ef fects; cytotox icity
　　皂苷在自然界中分布很广, 具有增强免疫功能、
抗幅射、抑制肿瘤生长、抗炎、降血糖等广泛的生物
学活性[ 1] ,近年越来越受到人们的普遍关注。我国海
域辽阔,海洋生物资源十分丰富,海洋生物中的生理
活性物质是研究和发展新化学成分,开发新药的天
然宝库。海星属棘皮动物门海星纲,是海洋中常见的
无脊椎动物之一。我们对从南海海星 Cr asp idastet
hesp er us Muller et t roschel中提取的总皂苷进行了
体外和体内抗肿瘤实验研究。
1　实验材料
1. 1　动物与瘤株: NIH 纯系小鼠, 体重( 20±2) g,
雌雄各半,由广东省卫生厅医学实验动物中心提供。
腹水型肉瘤( S180)和腹水型肝癌( H22 )小鼠由广州中
山医科大学肿瘤研究中心提供。
1. 2　药品与试剂: 四甲基偶氮唑盐( 3-4, 5-die-
methy lthiazo1-2, 5-dipheny l tet razolium bromide,
M TT ) , Sigma 公司产品, 溶于 Hanks 液, 4 ℃短期
存放。RPM I-1640购自 Gibco 公司。
2　实验方法
2. 1　海星总皂苷的提取: 海星用石油醚脱脂,然后
用 95%乙醇回流提取 3 次, 减压浓缩至一定体积,
加水溶解, 水溶液用正丁醇提取, 抽得液经减压浓
缩, 残留物溶于少量乙醇, 加大量丙酮即析出沉淀
物,加乙醇溶解,加丙酮沉淀, 反复处理 3次, 取沉淀
干燥,得浅棕色粉末。取少量浅棕色粉末,经浓硫酸
显色反应和溶血反应证明其为总皂苷 [ 2]。临用时以
生理盐水配成一定浓度备用。
2. 2　细胞培养:实验时分别无菌抽取 6 d 龄 S180和
H 22小鼠腹腔内瘤细胞,以 Hanks液洗涤 2遍,以含
100 U/ mL 青霉素和链霉素, 20%小牛血清 RPMI-
1640培养液调整成一定浓度的细胞悬液, 置 CO2 培
养箱内, 在 5%CO 2、37℃、充分湿化条件下培养 24
h 备用。
2. 3　体外抑瘤实验:依据文献[ 3, 4] , 生长良好的 S180
细胞和 H22细胞( 1. 0×109 cfu/ L )分别接种于 96孔
培养板,每孔 180. 0 LL, 再加入一定浓度的海星总
皂苷 20. 0 LL,以生理盐水为空白对照组, 每组做 4
个平行孔,然后于 5%CO 2、37 ℃、充分湿化条件下
培养 48 h后,每孔加入 50. 0 LL MTT , 继续培养 4
h 后小心去除上清液,加入二甲亚砜( DM SO ) 150. 0
·244· 中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2001 年第 32卷第 3期
X 收稿日期: 2000-07-11作者简介:王　兵,男,中山大学药学系硕士毕业,现在深圳海王生物工程股份有限公司从事新药研究开发工作。T el : 0755-6405410
LL,轻轻振荡混匀,然后用全自动酶标仪( Bio-Rad,
3550型)测各孔吸光度( A ) ,检测波长为 550 nm ,参
比波长为 690 nm, 以每组测得的 A 值作为药物效
应值。
2. 4　体内抑瘤实验: 参照移植性肿瘤研究方法[ 5]
进行。
2. 4. 1　对小鼠移植性肉瘤 S180的作用: 取小鼠 60
只, 于小鼠右腋下皮下接种肉瘤 S180细胞悬液
( 1. 0×107 cfu/ mL) 0. 2 mL, 接种次日随机分为 6
组,实验组于接种 24 h 后每鼠 ip 海星总皂苷 0. 2
mL, 对照组在同样条件下 ip 生理盐水 0. 2 mL, 连
续 10 d,停药次日处死动物,称量体重、胸腺及脾脏
重量,按下式计算抑瘤率,实验重复 3次。
抑瘤率( %) = ( 1- 给药组平均瘤重/对照组平
均瘤重)×100%
2. 4. 2　对 H22腹水小鼠生存期的影响: 取小鼠 50
只,于小鼠腹腔内接种 H22细胞悬液( 1. 0×107 cfu/
mL ) 0. 2 mL, 接种次日随机分为 5组,给受试样品
量同 2. 4. 1,连续 10 d, 记录腹水小鼠自然死亡的天
数,按下式计算其生命延长率,实验重复 3 次。
生命延长率( %) = (实验组平均生存天数/对照
组平均生存天数- 1)×100%。
3　实验结果
3. 1　海星总皂苷对体外培养的 S180和 H22细胞的影
响:结果如表 1所示。各浓度组的海星总皂苷与S180
和 H 22瘤细胞孵育 48 h, 对瘤细胞的生长均有明显
的剂量依赖性抑制作用,提示其有直接的细胞毒抑
瘤作用。
表 1　海星总皂苷对体外培养的 S180和 H22
细胞的影响( x±s, n= 4)
组　别 浓　度
( Lg/ mL)
吸光度( A)
H22 S180
空白对照 — 　0. 769±0. 055 　0. 860±0. 054
海星总皂苷 1 0. 696±0. 038* 0. 738±0. 045* *
10 0. 432±0. 046* * 0. 512±0. 092* *
100 0. 108±0. 033* * 0. 166±0. 075* *
　　与空白对照组比: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
3. 2　海星总皂苷对小鼠移植性肉瘤 S180的抑制作
用:结果如表 2所示。海星总皂苷 1～100 mg/ kg 连
续应用 10 d,对 S180肉瘤有显著的剂量依赖性抑制
作用, 其低剂量组抑瘤率为 21. 8% ,与对照组比较
差异有显著意义( P< 0. 05) , 中及高剂量组抑瘤率
分别为 42. 2%和 71. 1% ,瘤重与对照组相比差异有
极显著意义( P< 0. 01)。
表 2　海星总皂苷对小鼠移植性肉瘤 S180的
抑制作用( x±s, n= 4)
组　别 剂　量
( mg/ kg )
瘤重　
( g )　
抑瘤率
( % )
体重变化
( g)
空白对照　 - 　1. 66±0. 37 — + 4. 7
海星总皂苷 1 1. 30±0. 39* 21. 8 + 3. 8
10 0. 96±0. 35* * 42. 2 + 2. 9
100 0. 48±0. 29* * 71. 1 + 1. 7
　　与空白对照组比: * P< 0. 05　* * P< 0. 01
3. 3　海星总皂苷对 H22腹水小鼠生存期的影响: 结
果如表 3所示。海星总皂苷组的 H22腹水小鼠的生
存时间有剂量依赖性的延长, 10 mg/ kg 组生存期与
空白组比,差异有显著意义( P< 0. 05)。100 mg / kg
组的海星总皂苷与空白组比较,差异有极显著意义
( P< 0. 01)。
表 3　海星总皂苷对 H22腹水小鼠生存期的影响
( x±s, n= 10)
组　别 剂　量
( mg/ kg )
生存天数
( d)
生命延长率
( % )
空白对照 — 　　11. 3±3. 6 —
海星总皂苷 1 13. 3±4. 0 17. 7
10 16. 4±5. 0* 45. 1
100 19. 0±5. 6* * 68. 1
　　与空白对照组比: * P< 0. 05　* * P< 0. 01
4　讨论
实验结果表明,海星总皂苷不仅对体外培养的
肿瘤细胞有直接的细胞毒作用,明显地抑制肿瘤细
胞的生长,而且能显著地抑制 S180肉瘤的生长,延长
H 22小鼠的生存时间, 有明显的体内抗肿瘤作用, 提
示海星总皂苷具有明显的抗肿瘤活性, 对肿瘤的治
疗可具有重要的意义。其具体的作用机制有待于进
一步的研究。
参考文献:
[1]　刘美正,郭忠武,惠永正 . 皂苷研究新进展[ J ] . 天然产物研究
与开发, 1997, 9( 2) : 81-83.
[ 2] 　中国科学院上海药物研究所 . 中草药有效成分提取与分离
[ M ] . 第二版 . 上海:上海科技出版社, 1983.
[ 3] 　王　楠, 汤仲明 . MT T 方法测定培养细胞抗药水平的评价
[ J ] .中国药理学通报, 1996, 9( 1) : 78-81.
[4]　Carmichael J, DeGraf f W G. Gazder A F, et al . Tetr azol ium-
based as seys for cellu lar viabilit y: a crit ical exam ization of se-
lected paraneters af fectin g formazan product ion [ J ] . Cancer
Res , 1987, 47( 4) : 936-941.
[ 5]　徐叔云,卞如濂,陈　修 . 药理实验方法学[ M ] . 第 2版 . 北
京:人民卫生出版社, 1994.
·245·中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2001 年第 32卷第 3期