全 文 ：利于生根 ,增加光照强度 ,能刺激植株产生通过光合
作用而进行自养的能力 [8 ]。因此 ,需要 3 000 lx的光
强 ,并且日照时间为 16 h /d有利于炼苗。移栽之前 ,
要进行预栽培 ,要保持一定的温度、光照和湿度。这
样能提高成活率。 成活率可达 85%以上。
3　小结
从当前的趋势来看 ,组织培养应用于制药主要
有两个领域: ( 1) 生产天然的植物成分 ; ( 2)外供化
合物的生物转化。 我们现已建立了粉花绣线菊的组
织培养系统 ,下一步是借助它 ,通过饲喂前体 ,弄清
二萜生物碱的生物合成途径。从而达到大量生产的
目的。同时 ,粉花绣线菊的变异性强 ,品质不稳定 ,我
们建立的快繁技术可帮助大量生产。另外 ,我们还可
以利用愈伤组织诱导生成体细胞胚 ,进行种质保存。
相关的进一步研究工作正在进行之中。
参考文献:
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良种银杏幼苗叶质量分析 (Ⅰ )
杨义芳 ,王　晖 ,夏野鹰
⒇
(江西省药物研究所 ,江西 南昌　 330029)
摘　要: 目的　进行良种银杏幼苗叶质量分析。方法　采用 HPLC方法测定银杏叶总黄酮含量。结果　实生苗 6月
份含量明显高于 8月份与 11月份 ,极显著地高于嫁接苗 ; 2岁树龄实生苗总黄酮含量是 50年树龄的 2. 5～ 3. 8倍。
嫁接苗 6月份高于 8月份 ,雌性高于雄性。 结论　活性成分含量与生长季节、树龄、培育方式、生长环境、基地条件
等诸因素有关。
关键词: 良种银杏幼苗叶 ;银杏黄酮 ;高效液相色谱 ;质量分析
中图分类号: R282. 2　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 11 1033 04
Analysis on quality of leaves of improvedGinkgo biloba seedling sproutⅠ
YAN G Yi-fang , WANG Hui, X IA Ye-ying
　　 ( Jiangxi Institute o f Mate ria M edica , Nanchang Jiangxi 330029, China)
Abstract: Object　 To examine the quality of leav es from the improved Ginkgo biloba L. seedling
sprout. Methods　 Total f lav onoids in the leaves w ere determined by HPLC. Results　 Flavonoids in the
leaves o f seedling sprout were apparent ly higher in June than in August and November, and w ere much
higher than g raf ting seedling sprout which was also higher in June than in August. 2-year-old t ree con-
tained 2. 5 to 3. 8 times mo re flavonoids than 50-year-o ld tree. The content of female trees w ere higher
than tha t of male. Conclusion　 The content o f active f lav onoids w ere rela ted to the season, ag e, breeding,
envi ronment and geog raphic condi tions, etc. .
Key words: leav es f rom improved Ginkgo biloba L. seedling sprout; flavonoids; HPLC; quali ty analy-
sis
　　银杏叶 Ginkgo biloba L. 产品风靡全球 ,在我 国就有数十种之多 ,银杏叶提取物干浸膏生产企业
·1033·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
⒇收稿日期: 2000-06-23
有二百余家 ,对银杏叶的需求量日益增多。为了缓解
银杏叶紧缺 ,扩大药物资源 ,全国各地纷纷进行大面
积速生丰产银杏种植 ,但其银杏叶质量分析未见报
道。本文就江西 3个县 8地银杏良种壮苗基地及江
西农大等采穗圃银杏叶活性成分含量进行测定与分
析 ,以便评价不同银杏育苗基地条件类型、不同生长
期、生长量、雌雄银杏幼苗叶的质量。 现报道如下:
1　材料与方法
1. 1　仪器: Waters公司高效液相色谱仪 , 510泵、
680控制仪、 481紫外检测器。
1. 2　试药:甲醇为色谱纯试剂 ,其它均为分析纯试
剂。银杏叶分别于 1997年 6, 8, 11月采集于江西农
大、安义、靖安、奉新等 3县 9个不同良种基地或采
穗圃 (种源均系同一批从山东郯城调入 ,定株 2年 )
及南昌八一公园 (树龄约 50年 )。采集方式:每采样
点面积约为 10 m2 ,在同采样点典型采集生长量最
大、居中、最小的苗木 ,从样株不同方位和部位均匀
采取各约 200 g叶 ,经 60℃烘干 ,粉碎 ,过 60目筛 ,
备用。 对照品:槲皮素 (中国药品生物制品检定所 ) ,
山萘酚与异鼠李素 ( SIGMA公司 )。
1. 3　色谱条件: 流动相为甲醇 -水 ( 50: 50) ,磷酸调
至 pH2. 5,流速 1. 0 mL /min,色谱柱 Hypersil ODS
C18柱 ( 4. 6 mm× 300 mm ,粒径 5μm) ,室温 ,检测波
长 360 nm ,灵敏度 0. 05 AU FS。
1. 4　样品处理: 取样品约 2 g ,精密称定 ,置磨口锥
形瓶中 ,精密加 70%乙醇 25 mL,塞紧 ,超声处理 30
min,冷却 ,滤过 ,弃初滤液 ,精密吸取续滤液 10
m L,置圆底烧瓶中 ,加乙醇 10 mL和 5. 5%盐酸 20
m L,水浴回流 2 h,冷却 ,定量转移至 50 mL量瓶
中 ,并用乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,用 0. 8μm的微孔
滤膜滤过 ,弃去初滤液 ,取续滤液作为供试品溶液。
2　结果与分析
2. 1　标准曲线:对照品槲皮素含量为 9. 52μg /mL,
山萘酚为 9. 64μg /m L,异鼠李素为 9. 98μg /mL,分
别注入 2. 5, 5. 0, 10. 0, 20. 0, 40. 0, 60. 0μL于色谱
仪 ,记录色谱图 ,以进样量 (μg )对峰面积回归。 3种
对照品线性范围、回归方程及相关系数分别为:槲皮
素 0. 024～ 0. 57μg ,C= 3. 850 6× 10- 5 A- 6. 008×
10- 5 , r = 0. 999 8;山萘酚 0. 024～ 0. 58μg , C =
3. 411 6× 10- 5 A- 3. 715 3× 10- 3 , r= 0. 999 6;异
鼠李素 0. 025～ 0. 60μg , C= 3. 969 1× 10- 5 A -
5. 468 1× 10- 3 , r= 0. 999 4。
2. 2　精密度: RSD% (n= 5)分别为:槲皮素 2. 2,山
萘酚 1. 4,异鼠李素 3. 0,总黄酮苷元 1. 4。
2. 3　重现性: RSD% (n= 7)分别为:槲皮素 1. 9,山
萘酚 1. 7,异鼠李素 2. 6,总黄酮苷元 1. 2。
2. 4　稳定性考察: 6 h内测定总黄酮含量下降不到
1%。
2. 5　槲皮素的加样回收率: 平均回收率为 98. 7% ,
RSD= 4. 0% (n= 5)。
2. 6　样品测定:分别吸取对照品甲醇溶液 (每 1 mL
含槲皮素 0. 032 mg)与供试品溶液各 20μL,注入液
相色谱仪 ,记录色谱图 ,槲皮素色谱峰之后的二个主
要峰依次为山萘酚与异鼠李素色谱峰 ;银杏叶总黄
酮含量按各苷元峰面积×转换因子 (槲皮素 2. 51,
山萘酚 2. 64,异鼠李素 2. 39)之和 ,以槲皮素计
算 [1 ] ,即得。
2. 6. 1　实生苗银杏叶总黄酮测定见表 1, 2。
表 1　 6, 8月采收的实生苗银杏叶总黄酮含量 %　　
编号 产地 生长茂盛含量
6-14　　　 8-15
生长中等含量
6-14　　　 8-15
生长矮小含量
6-14　　　 8-15
各采样点平均含量
6-14　　 8-15
每县平均含量
6-14　　 8-15
1～ 3 安义县太平乡 2. 43　　　 1. 79 2. 48　　　 1. 83 2. 54　　　 1. 02 2. 48　　 1. 55
4～ 6 安义县桃花 -1 2. 53　　　 1. 48 2. 64　　　 1. 01 2. 38　　　 1. 06 2. 52　　 1. 18
7～ 9 安义县桃花 -2 1. 89　　　 0. 84 2. 31　　　 1. 26 2. 33　　　 1. 01 2. 18　　 1. 04 2. 39　　 1. 26
10～ 12 靖安县乡田艺场 2. 12　　　 1. 64 2. 16　　　 1. 49 1. 88　　　 1. 56 2. 05　　 1. 56
13～ 15 靖安县园艺场 2. 03　　　 1. 39 1. 86　　　 1. 36 2. 08　　　 1. 38 1. 99　　 1. 38 2. 02　　 1. 47
20～ 22 奉新县山东 2. 46　　　 2. 12 2. 44　　　 1. 72 2. 58　　　 1. 69 2. 49　　 1. 84
23～ 25 奉新县坪上增家 2. 53　　　 1. 60 2. 61　　　 1. 36 2. 43　　　 1. 60 2. 52　　 1. 52
26～ 28 奉新县港下村 2. 34　　　 1. 65 2. 51　　　 1. 42 2. 15　　　 1. 33 2. 33　　 1. 47 2. 45　　 1. 61
不同生长状态的平均含量 (x± s) 2. 29± 0. 25 1. 56± 0. 37 2. 38± 0. 26 1. 43± 0. 26 2. 30± 0. 24 1. 33± 0. 27
24个样品的总平均含量 (x± s) 2. 32± 0. 23 1. 44± 0. 30
　　　　注:表中的结果系 2次测定的平均值 (下表均同 )
　　由不同生长状态的平均含量比较说明: 6月份
中等 ( 2. 38% )> 矮小 ( 2. 30% ) > 茂盛 ( 2. 29% ) ,但
差异 不太明显 ; 8月份 茂盛 ( 1. 56% ) > 中等
( 1. 43% )> 矮小 ( 1. 33% )。表 2可见 , 11月份采集
同一种植地 ,黄叶明显高于绿叶。由表 1, 2说明不同
生长地 ,尽管在同一县内含量亦有明显差异。不同生
长期含量差异尤为明显 , 6月份高出 8月份 61% , 11
月份略高于 8月份。
·1034· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
2. 6. 2　嫁接苗银杏叶总黄酮测定:见表 3。
结果表明 6月份高于 8月份 ,雌性高于雄性。不
同来源与生长地含量也存在差异。
2. 6. 3　测定结果的比较:见表 4。
表 2　 11月 15日采收实生苗银杏叶
总黄酮含量测定结果 　　　　　%
编号 产　　地 含量
7～ 9 安义县桃花 -2 1. 64
10～ 12 靖安县乡田园艺场 1. 68
13～ 15 靖安县园艺场 1. 56
靖安县平均值 1. 62
23～ 5 奉新坪上增家 (黄叶 ) 1. 69
23～ 25 奉新坪上增家 (绿叶 ) 1. 43
26～ 28 奉新港下村 (黄叶 ) 2. 05
26～ 28 奉新港下村 (绿叶 ) 1. 76
奉新县平均值 1. 73
3县 7个样品平均值 (x± s) 1. 69± 0. 19
　　结果表明 ,实生苗显著高于嫁接苗 ,尤其 6月份
采集的高 1倍多。 良种银杏幼苗叶高于公园种植银
杏叶数倍之多。 Q∶ K∶ I的比值不尽相同 ,其中实
生苗 I比公园种植低 1倍多 ,嫁接苗则相近似 ,但嫁
接苗 K比公园种植及实生苗低 1倍左右。
　　　表 3　嫁接苗银杏叶总黄酮含量测定结果　　%　
编号 嫁接地 来源 性别 含量
6-14 8-15
16 靖安县园艺场 波阳 雌 1. 08 1. 06
17 靖安县园艺场 波阳 雄 1. 35 1. 17
18 靖安县园艺场 万载 雌 1. 16 1. 15
19 靖安县园艺场 万载 雄 1. 13 -
靖安县平均值 1. 18 1. 13
29 江西农大 南康 雌 1. 14 1. 03
32 江西农大 南康 雄 0. 82 0. 87
30 江西农大 信丰 雌 1. 28 0. 87
31 江西农大 信丰 雄 0. 74 0. 74
33 江西农大 铅山 雄 0. 86 0. 66
34 江西农大 铅山 雌 0. 51 0. 68
农大均值 0. 89 0. 81
雌性均值 1. 03 0. 96
雄性均值 0. 98 0. 86
总均值 (x± s) 1. 01± 0. 26 0. 91± 0. 20
表 4　不同采收期及类型银杏叶总黄酮含量测定结果的总结
类别
06-14采收
平均含
量 (% ) Q∶ K∶ I
*
08-15采收
平均含
量 (% ) Q∶ K∶ I
*
11-15采收
平均含
量 (% ) Q∶ K∶ I
*
实生苗 2. 32 1∶ ( 0. 76± 0. 13)∶ ( 0. 08± 0. 012) 1. 44 1∶ ( 0. 79± 0. 18)∶ ( 0. 08± 0. 012) 1. 69 1∶ ( 0. 86±0. 16)∶ ( 0. 08± 0. 007)
嫁接苗 1. 01 1∶ ( 0. 43± 0. 17)∶ ( 0. 17± 0. 04) 0. 91 1∶ ( 0. 51± 0. 11)∶ ( 0. 17± 0. 04) - -
公园种植
(树龄约 50年 ) 0. 61 1∶ 0. 85∶ 0. 22 0. 57 1∶ 1. 13∶ 0. 22 0. 58 1∶ 0. 94∶ 0. 21
　　　　* Q:槲皮素 ; K:山萘酚 ; I:异鼠李素 ; Q∶ K∶ I为各苷元的峰面积积分值比值 (x± s ) ,下同。
2. 6. 4　测定结果的分析:见图 1～ 3。
1-实生苗　 2-嫁接苗　 3-公园种植
图 1　实生苗、嫁接苗和公园种植 (约 50
年树龄 )银杏叶总黄酮含量比较
3　小结与讨论
3. 1　银杏良种壮苗基地定植 2年银杏叶总黄酮含
量高出公园生长约 50年银杏树数倍。我们曾对江西
省等 3省收购银杏叶 12个样品同法进行了测定 ,其
平均含量为 0. 58% [2 ] ,似乎提示经过良种优选的品
种 ,定植 2年即可获得高含量活性成分的银杏叶。最
近仲英 [3 ]报道了不同树龄与月份总黄酮含量 , 30余
1-雌性树　 2-雄性树
图 2　嫁接苗雌雄总黄酮含量比较
年与 10余 年树 龄分 别为 , 6月份: 0. 469% ,
0. 755% ; 8月份: 0. 424% , 0. 707%。 上述良种银杏
幼苗叶总黄酮含量毫无疑问与树龄有关 ,但是否完
全取决于此 ,有待研究。 银杏良种壮苗基地 6月至
10月份为叶生长旺盛期 ,就总黄酮含量而言宜 6月
份采收 ,尽管文献报道 4月份叶含量最高 [3 ] ,但此时
并非叶生长旺盛期。 嫁接苗总黄酮含量明显低于实
生苗 ,所以发展速生丰产银杏叶不宜采用嫁接方法 ,
这可能亦与树龄有关。
3. 2　银杏叶制剂黄酮中 3个主要苷元槲皮素、山萘
·1035·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
1-实生苗　 2-嫁接苗　 3-公园种植　 4-国内制
剂 [4 ]　 5-国外制剂 [7 ]　 6-国外提取物 [5]
注:实生苗及嫁接苗均采用 06-14采集的数据 ,
公园种植采用 08-15采集的数据。
图 3　不同类型银杏叶及不同来源制剂
黄酮苷元 Q∶K∶ I比值的比较
酚、异鼠李素含量之比 1∶ ( 0. 98± 0. 16)∶ ( 0. 38±
0. 07 ) [4 ]和 1∶ ( 1. 06± 0. 23)∶ ( 0. 29± 0. 02) [ 5] ,国
内学者认为二者比值与质量有一定关系。 瑞士学者
Hasler和 Sticher早已注意到此 ,银杏叶黄酮苷元
比值为 1∶ 2∶ 0. 75,银杏提取物为 1∶ ( 0. 94±
0. 32)∶ ( 0. 24± 0. 03) [6 ] , 3个不同生产厂家银杏叶
制剂 1∶ ( 1. 21± 0. 10): ( 0. 43± 0. 02) [7 ] ,与我国学
者及我们 [2 ]以前分析结果较一致。本次实验结果实
生苗 I值低于文献 3倍 ,嫁接苗 K值低 1倍 ,是否与
栽培期过短 ,还是与类型有关 ,尚待探讨。
3. 3　综上所述 ,良种银杏幼苗叶总黄酮含量与生长
季节、树龄、培育方式、生态环境和产地条件等诸因
素有关。 8月份银杏生长量似乎与含量有一定关联。
参考文献:
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天师栗茎芽组织培养研究
郑小江 ,刘金龙
⒇
(湖北民族学院资源与环境科学系 ,湖北 恩施　 445000)
摘　要: 目的　研究其组培技术 ,为工厂化育苗提供依据。 方法　采用不同浓度的 MS无机盐 ,不同浓度的 MS有
机成分 ,对其进行生根和生茎芽、叶的效果研究。 结果　 1 /2改良 M S无机盐+ 肌醇 100 mg / L+ 烟酸 0. 5 mg / L+
盐酸吡哆醇 0. 5 mg /L+ 盐酸硫胺素 0. 1 mg / L+ 6-BA 1 mg / L+ 甘氨酸 2 mg / L+ IBA0. 5 mg /L+ 蔗糖 2% + 琼脂
0. 8% + V C 0. 1 mg /L对愈伤组织形成及茎芽分化生长效果显著 ; 1 /8改良 M S无机盐+ 肌醇 100 mg / L+ 烟酸
0. 5 mg /L+ 盐酸吡哆醇 0. 5 mg / L+ 盐酸硫胺素 0. 1 mg /L+ 甘氨酸 2 mg /L+ 蔗糖 1% + 琼脂 0. 7% + 活性碳 600
mg / L+ IBA0. 5 mg /L+ V C 0. 1 mg /L+ 6-BA 0. 2 mg /L对生根效果显著。结论　以上结果分别为天师栗茎芽组培
中愈伤组织形成与茎芽生长和生根的适宜培养基配方 ;愈伤组织形成与茎芽生长和生根的生长素浓度与细胞分裂
素浓度比为 0. 5∶ 1 mg /L和 0. 5∶ 0. 2 mg /L较合适 ;高无机盐浓度抑制生根 , 1 /8 M S改良无机盐浓度生根最佳 ;
V c可消除组培中因茎芽分泌的酚类氧化物在培养基中过量积累 ,而对茎芽和根生长的不良影响 ;茎芽和根的分化
在微酸至中性培养基中效果较好。
关键词: 开师栗 ;茎芽 ;组织培养
中图分类号: R282. 13　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 11 1035 04
Studies on tissue culture for bud of stem in Aesculus wilsonii
ZHENG Xiao-jiang , L IU Jin-long
　　 ( Depa rtment o f Resource and Envir onment Science, Hubei Institute fo r Nationalities, Enshi Hubei 445000, China)
Key words: Aesculus wilsonii Rehd. ; bud o f stem; tissue cultur e
　　天师栗 Aesculus wilsonii Rehd落叶乔木 ,湖北 省保护树种 [1 ]。湖北恩施州木林子、星斗山保护区有
·1036· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
⒇收稿日期: 2001-04-25作者简介:郑小江 ( 1958-) ,男 ,山东淄博人 ,湖北民族学院资源与环境科学系 (原林学系 )副教授 ,中国林学会高级会员 ,硕士生导师。 研究方向:野生植物资源开发利用。 地址:湖北省恩施市三孔桥路 29号。 Tel: 0718-8430564