全 文 ：3　讨论
液相色谱 -质谱联用技术 ( LC-M S)在近 10年中
发展很快 ,由于它可分析难以挥发的化合物、热不稳
定化合物和大分子化合物 (如多肽、蛋白、多糖和多
聚物 ) ,分析范围广 ,因而极受分析工作者重视。液相
色谱 -质谱 -质谱联用技术 ( LC-M S /M S)具有比 LC-
M S更优越的性能 ,通过 LC分离 ,应用 M S /M S可
分析在有大量杂质的混合物中分析待测物质 ,提高
分析的特异性和灵敏性 ,可以获得更多的化学结构
信息。
在研究者关注的 LC-M S /M S的发展中 ,接口
技术的发展为研究应用提供了更广泛应用的可能
性 ,其中 APCI、 SSI和 ESI离子化技术为我们提供
了多种离子化方式 ,可满足多种分析的需要 [2～ 4 ]。
ESI对不同极性和稳定性的化合物的使用范围能完
全被 SSI所覆盖 ,同时还能覆盖部分 APCI的使用
范围。
参 考 文 献
1　江纪武 ,肖庆祥 . 植物药有效成分手册 . 北京:人民卫生出版社 ,
1986: 888
2　 Hirabayashi A, Sanokai ri M and Koizumi H. Anal Chem, 1994, 65
( 2): 4557
3　 Hirabayashi A, Hirabayash i Y, Sanokai ri M , et al . Rapid Commu-
nications in Mass Spect romet ry, 1996, 10: 1703
4　 Hirabayashi Y, Hirabayashi A, Takada Y, Sanokairi M and
Koizumi H. Anal Chem, 1995, 67( 17): 2878
( 2000-04-05收稿 )
黄芩素的化学发光测定
汕头大学医学院化学教研室 ( 515031)　　方　冶 　张鲁勉　何小英　梁友竹
摘　要　以黄芩素进行试验 ,建立了黄芩素的化学发光测定法 ,并应用于市售制剂中有效成分的检测 , RSD =
0. 65% ( n = 10) ,回收率为 ( 98± 3)% ( n = 6) ;本法可用于其它多羟基黄酮化合物的检测 ,检测结果从本质上反
映多羟基黄酮化合物生物活性和药理作用的强弱。
关键词　多羟基黄酮　黄芩素　化学发光法
Detection of Scutellarein Derivative by Chemiluminescent Analysis
　　Depar tment of Chemistr y , Medica l Colleg e of Shantou Univ ersity ( Shantou 515031)　 Fang Ye, Zhang Lumian, He Xi-
aoying and Liang Youzhu
Abstract　　 A chemiluminescent analysis ( CLA) fo r the detection o f scutellarein deriv ativ es was es-
tablished. Results show ed tha t the RSD = 0. 65% (n = 10) , the average rate o f recovery was ( 98± 3)%
(n = 6) . The CLA method may be applicable to other poly-hydroxy f lav ones, and to predict their biologi-
cal and pharmaco logical potentia ls.
Key words　　 po ly-hydroxy f lav one　 scutellarein　 chemiluminescent analysis
　　多羟基黄酮化合物是植物界分布最广泛的黄酮
类化合物 ,具有多种生物活性和药理作用 ;如槲皮素
是抗癌成分之一 [1 ]。传统上多羟基黄酮化合物用比
色法检测 [2 ] ;该法基于酚羟基的颜色反应 ,特异性
差 ,干扰因素多 ,且多羟基黄酮化合物的多种生物活
性和药理作用与其抗自由基氧化的作用密切相
关 [1, 3, 4 ] ,比色法根本无法揭示这一作用的强弱。化
学发光法因其灵敏度高 ,准确性好 ,重现性强 ,操作
简便 ,近年来已在生物样品的检测中有较广泛的应
用。本文以黄芩素进行试验 ,提出多羟基黄酮化合物
的化学发光检测法 ,测定样品抗自由基氧化作用的
能力 ,测定结果在本质上反映样品的生物活性和药
理作用的强弱。
1　材料和方法
1. 1　仪器和试剂: HF-1化学发光仪 ;黄嘌呤氧化
酶 ( XOD,东风公司 , 1. 938 U /mL, 0. 313 U /mL) ,
超氧化物歧化酶 ( SO D,华东理工大学 , 6 000 U /
mg ) ,次黄嘌呤 ( HX, Fluka ) ,鲁米诺 ( Luminol,
M erck-Schuchardt ) ,黄芩素 ( SD,从市售黄芩中提
取 ,重结晶法纯化后为黄褐色粉末 ) ,其它试剂均为
·580· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 8期
Address: Fang Ye, M edical College of Shantou University, Shantou
AR级。
XOD、 HX和 Luminol分别用 pH 10. 2含 0. 1
mmol /L EDT A的 0. 05 mol /L碳酸盐缓冲液稀
释 ; SOD和 SD分别以 pH 7. 8含 0. 1 mmo l /L ED-
T A的 0. 05 mol /L磷酸盐缓冲液稀释。
1. 2　实验方法:采用 XOD-HX-Luminol化学发光
体系 [ 5] ,用化学发光法进行检测。步骤: 于 HF-1化
学发光仪的发光腔内 ,先加入 0. 1 mL XOD ( 0. 1
g /L ) ,再加入 HX与 Luminon1的混合液 ( 10- 4
mol /L, 9∶ 1混合 ) 1. 90 mL启动反应 ,最终反应体
积为 2. 00 mL。 测量发光峰值进行计算。
2　结果与讨论
2. 1　 SD活力的测定: SOD是生物体内清除 O÷2的
特异酶 , O÷2其它清除剂的活力 ,可折算为 SOD的活
力单位来表示。
图 1　 SOD对超氧阴离
子自由基的抑制
曲线
2. 1. 1　 SOD的活力测定:
先加入一定的 SOD溶液
( 0. 01 g /L ) ,按 1. 2所述步
骤和用量加入各试剂 ,测量
发光峰值 ( H, 3次取平均 ) ,
以不加 SOD时的发光值为
100% 发光值计算 SOD的
抑制率: I% = [ H( 100% ) -
H(样品 ) ] H( 100% )。 结果
见图 1。从图 1得出 C50为 21. 5μg /L。
图 2　黄芩素诱导体对
超氧阴离子自由
基抑制曲线
2. 1. 2　 SD活力的测定: 以
一定量的 SD溶液 ( 0. 1 g /
L )代替上述的 SOD,按同法
测定发光峰值并计算相应的
抑制率。结果见图 2。从图 2
得出 C50为 0. 31 mg /L。
2. 1. 3　 SD活力的表示: 根
据上述测得的 C50, SOD、 C50, SD
和 SOD对照品的活力 ,可算
出相应实验条件下 ,被测样品用 SOD活力单位表
示的活力大小。 本文实验条件下 C50, SOD= 0. 0215
mg /L, C50, S D= 0. 31 mg /L,已知 SOD对照品的活
力为 6 000 U /mg,因此 , SD的活力为: ( C50, SOD /
C50, SD )× 6 000= 416 U /mg( U为 SOD活力单位 )。
以其它多羟基黄酮化合物的溶液代替 SD溶液
进行测定 ,即可得出该化合物以 SOD活力单位表
示的活力大小。
2. 2　化学发光法测定 SD的动力学公式: 用 HX-
XOD-Lumino l化学发光体系测定 SO D的动力学公
式为 [6 ]: V /VL= 1+ k( SOD) ,其中 V L为 O÷2与 Lu-
mino l反应的速度 , V为 O÷2的总反应速度 , k为比
例常数 , V /V L= 100 /( 100-抑制百分数 )。 该式表
明 , V /V L与 SO D线性相关。由于 SD与 SOD有类
似的清除 O÷2的性能 ,故推断以 HX-XOD-Luminol
化学发光体系测定 SD的动力学公式为: V /VL=
1+ k ( SD) ,即 V /V L与 SD成线性关系。 实验结果
(表 1,图 3)证实了上述推断。
表 1　 V /VL与黄芩素的浓度 ( SD)的关系
SD( mg /L) 抑制率 (% ) ( V /VL )
0 0 1
0. 125 27. 5 1. 40
0. 25 42. 7 1. 40
0. 50 66. 3 2. 97
0. 75 78. 0 4. 20
图 3　 V /VL和 SD浓度的
关系
2. 3　化学发光法测定样
品中 SD的浓度: 依 2. 1
中所述方法 ,测得不同浓
度 SD对发光的抑制百分
数 ,按公式 V /VL = 100 /
( 100- 抑制百分数 )算出
V /V L ,以 V /V L对 SD作
图 ,可得线性关系的工作
曲线 ,测出样品的 V /V L即可从工作曲线得出样品
中有效成分的浓度。
我们用上述方法对市售含 SD的制剂中的有效
成分进行了测定 ,结果如表 2所示。其它试样中有效
成分的浓度可参照上述方法进行测定。
表 2　市售制剂中 SD的测定
制剂名称 厂家名称 SD含量
( mg /m L, n = 3 )
茵栀黄注射注 山西太行制药 18. 15± 0. 12
茵栀黄注射注 江苏武进制药厂 16. 32± 0. 11
2. 4　可靠性和回收率试验: 本法所测得的数据稳
定 ,批内 RSD = 0. 65% ( n = 10) ,批间 RSD也只
有 2. 1% (n = 8) ,测验的回收率为 ( 98± 3)%
(n = 6)。
3　小结
综上所述 ,化学发光法不仅可对多羟基黄酮化
合物进行抗自由基氧化的活力测定 ,而且能够进行
对样品中有效成分的浓度测定。用本法对多羟基黄
酮的检测 ,不仅秉承了化学发光法快、准、灵的优点 ,
而且提供了能在本质上对多羟基黄酮化合物生物活
性和药理作用的强弱进行评价的数据。
致谢:在试验过程中得到沈文英教授的大力支
持。
·581·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 8期
参 考 文 献
1　刘诗平 ,陈尚猛 ,朱卫东 .中草药 , 1991, 22( 4): 182
2　中国医科院药物研究所编 .中草药有效成分的研究 . 北京:人民
卫生出版社 , 1972: 330
3　丁维功编 . 中国医学化学进展 .上海:百家出版社 , 1996: 72
4　方　冶 .中草药 , 1999, 30( 7): 526
5　李益新 ,方允中 . 生物化学与生物物理进展 , 1983( 2): 59
6　方允中 ,刘智峰 ,李益新 ,等 . 科学通报 , 1986, 31( 5): 356
( 2000-01-18收稿 )
HPLC-ELSD法在注射用七叶皂苷钠质量控制中的应用
浙江省医药管理局 (杭州 310012)　　李　菁
中国药科大学　　　　　　　　 　　叶文才
摘　要　 HPLC测定七叶皂苷钠 ,并用蒸发光检测器 ( ELSD)检测 ,得到 HPLC-ELSD指纹图谱。对不同注射用七
叶皂苷钠样品的比较研究表明 , HPLC-ELSD指纹图谱准确的显示了样品的质量 ,结果直观 ,可靠。
关键词　高效液相色谱　蒸发光检测　指纹图谱　七叶皂苷钠
Application of HPLC-ELSD on Quality Control of Aescin for Injection
　　 Pha rmaceutical Administ ration of Zhe jiang ( Hang zhou 310012)　 Li Jing
　　China Pharmaceutical Univ er sity　 Ye Wencai
Abstract　　 A finger print of HPLC based on evapo ration light-scat tering detection ( ELSD ) fo r
Aescin has been described. The HPLC-ELSD finger print can intui tiv ely suggest the quali ty info rmation of
Aescin and may be of practical v alue for the quali ty cont rol o f samples of sodium aescina te for injection.
Key words　　 HPLC　 evapo ra tion light-sca t tering detection ( ELSD)　 finger print　 sodium aescinate
　　七叶皂苷钠是从中国药典收载的娑罗子中药中
提取所得的总皂苷 ,主要有效成分为七叶皂苷 A,
B, C和 D(见图 1) ,根据德国 DAC的 定义七叶皂
苷 A, B称为 β-七叶皂苷 ,七叶皂苷 C和 D称为 α-
七叶皂苷。
R1 R2 R3
七叶皂苷钠 A(β ) -巴豆酰基 -COCH3 -4H
七叶皂苷钠 B(β ) -当归酰基 -COCH3 -4H
七叶皂苷钠 C(α) -巴豆酰基 -H -COCH3
七叶皂苷钠 D(α) -当归酰基 -H -COCH3
图 1　七叶皂苷钠结构示意图
目前测定七叶皂苷钠总皂苷的方法主要有三氯化铁
比色法 [1 ]和酸碱滴定法 [2 ] ,用于注射用七叶皂苷钠
的含量测定。研究表明 ,目前上市的注射用产品除主
要含有七叶皂苷钠 A, B, C和 D外 ,还含有少量的
糖元、苷元、脱乙酰基的降解产物和其它杂质。由于
比色法和滴定法专属性差 ,因而测定结果偏高 ,不能
反映产品的真实质量。本文提出了用 HPLC分离、
蒸发光检测器 ( ELSD)检测注射用七叶皂苷钠 ,并
将得到的色谱图定义为七叶皂苷钠 HPLC-ELSD
指纹谱图。指纹图谱简单明了 ,在质量标准中引入指
纹图谱可以提高制剂的质量控制水平。方法可靠 ,实
用。
1　仪器与材料
美国 Tsp的 Specta System P1000泵 ,进样器 ,
Alltech 500型蒸发光检测器 ( ELSD) 和 Anasta r
色谱工作站 ;乙腈: 色谱纯 (天津四友生物医学技术
有限公司 ) ,三氟乙酸为 Acros试剂 ,注射用七叶皂
苷钠样品 1～ 7分别来自武汉爱民 ( 971210)、烟台
绿叶制药有限公司 ( 990528)、德国 M ADAUS
( 806974 )、 武 汉 生 化 ( 990523 )、 南 京 大 学
( 9904204)、长春天诚 ( 990601)、无锡生化 ( 980513)
·582· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 8期
Address: Li Jin , Zh ejiang Pharmaceutical Adiminis t ration, Hang zh ou