全 文 ：中药石营蒲 、九节曹蒲致畸 、致突变的研究
凯蕊陶王山东中医药大学附属医院 (济南 25 0 0 11) 周晓园 .
山东省劳动卫生职业病防治研究所 高晓奇
赵海霞
王晓芬 陶玉珍
摘 要 通过中药石营蒲 、九节葛蒲致畸 、致突变性实验结果表明 : 当石营蒲剂量为 30 、 60 、 1 2 。。
m g /k g 时 , 对小鼠无致畸作用 ;九节曹蒲各剂量组尤其是 6 0 、 1 2。。m g /k g 时 , 胎鼠畸形率升高 , 孕
鼠吸收胎率升高 , 并有一定的剂量效应关系 。 染色体畸变分析试验 , 九节葺蒲大剂量组与石营蒲
组 、阴性对照组相 比染色体畸变率升高 , 但无统计学意义 ; 小鼠骨髓微核试验表明 , 石营蒲不能诱
发 嗜多染红细胞的微核率显著上升 (尸> 0. 0 5) , 但九节曹蒲 3 .个剂量组的微核百分数均高于石营
蒲及阴性对照组 , 并且随剂量加大微核率随之上升 , 具一定的剂量一效应关系 。
关链词 石昌蒲 九节营蒲 致畸 致突变 剂量一效应关系
石营蒲 、九节营蒲作为常用中药 已有几
千年历史 , 应用非常广泛 。但也有报告石营蒲
挥发油主要成分各细辛醚可引起大鼠十二指
肠恶性肿瘤 〔, , 2〕 , 认为其有致癌性〔3 , , 据 O p -
p d yk e 等报告 , 黄樟醚 能引起大 鼠 恶性肿
瘤 〔4〕, 邵文霞等对我国 6 种石葛蒲挥发油分
析发现 5 种含有黄樟醚成分 , 且含量均在
lo o m g /L 以上 , 其中以湖北恩施地区出产者
含量最高 〔5 , 。 据 T ay fo r 氏报道石营蒲主要成
分 各细辛 醚可以诱发大 鼠十二指肠恶性肿
瘤 〔6〕 , 石曹蒲挥发油中的黄樟醚成分亦能诱
发大 鼠恶性肿瘤 〔, , “〕 , 杨永年等对石营蒲另一
主要成分 a 一细辛醚的致突变研究 中发现 , 剂
量 在 1 85 . 2 m g / k g 时 , 对沙门氏菌 T A o s有致
突作用 , 并提示对大鼠染色体有断裂效应 、对
孕 鼠有一定的毒性和胚胎效应阮 ‘。〕。 以上均
为石葛蒲挥发油中所含的某种单一化学成分
的动物致畸 、致突变 、致癌研究结果 。 九节营
蒲多年来一直作为与石营蒲功效大致相同的
中药应用 , 对其药理 、毒理作用了解甚少 , 一
直未见有关报道 。 营蒲几千年来一直以中药
饮片的形式广泛应用于临床的水煎剂及中成
药制剂中 , 为正确评价临床用药安全性 , 我们
于 1 9 94 一 10 一 1 9 9 5 一06 进行了石营蒲 、九节曹
蒲 乙醇提取物的 3 个剂量组的致畸 、致突变
试验 。
1 致畸试验
1
.
1 材料 : 石营蒲 、九节营蒲经 95 % 乙醇提
取液为 1 9 生药 / m L 。
1
.
2 动物 : 昆明种小鼠 , 由山东医科大学实
验动物室和山东省实验动物中心提供 。
1
.
3 方法 : 选取健康成熟童贞小鼠 40 0 只 ,
体重 25 一 35 9 , 按 2 : 1 雌雄合笼 , 次 日晨检
查雌鼠阴道 , 有阴栓者为受孕 , 并算为妊娠 。
d
, 连续检查 s d , 将孕 鼠随机分为 8 组 , 每组
15 只 。 石营蒲 、九节曹蒲各设 1 2 0 0 、 6 0 0 、 3 0 0
m g /k 9 3 个剂量组 , 其余 2 组为正常及阳性
对照组 。 正常对照组每 日给蒸馏水 1 m L / 只 ,
阳性对照组给维生素 A D 原液 。. 2 m L / 只/
d
, 各组均于妊娠后第 6 ~ 巧 天连续灌胃给
药 。孕鼠分笼饲养 , 于妊娠第 18 天处死 , 剖腹
取胎检查着床数 、活胎数 、吸收胎数 、死胎数
及胎盘重量 ,记录胎鼠体重 、身长 、尾长 、发育
及外观畸形情况 。将 2 /3 活胎鼠骨骼检查 , 另
1 / 3 活胎 鼠切片检查 内脏 。
1
.
4 结果
.
A d d r e
s s : Z ho u X ia o y u a n
,
T he A ffilia t e d H o sP it a l o fS ha n d o n g U n iv e r s ity o f T r a d it io n a lC h 1 n e s e M e d ie in e a n d M a t e r ia
M ed ie a
,
Jn a n
·
周晓园 女 , 从事中医药工作 2 年 , 现任山东中医药大学附属 医院内科副主任医师 , 山东中医药大学中医内科教研室副教授 , 国家中医管理局指定全国血液肿瘤专业著名老中医顾振东教授学术继承人 , 中西医结合内科专业硕士研究生 。 以中西 医结合内科肿瘤血液等疾病临床及实验研究为特长 , 承担国家中医管理局 、山东省科委科研课题六 项 (其中两项已获省科委三等奖 ) , 编写《高粘血症 》等学术著作 6 部 , 发表《急性白血病死亡病例分析》等论著 20 余篇 。
.
1 1 0
·
1
.
4
.
1 一般表现 : 石营蒲 、九节营蒲各剂量
组孕 鼠给药后无不 良反应 , 进食及活动与正
常对照组相 比无差异 , 仅九节营蒲大剂量组
在用药第 9 天时体重增长速度明显缓慢 , 但
经统计学处理 , 营蒲各剂量组与正常对照组
相 比无明显差异 (尸> 0 . 0 5 ) , 阳性对照组与
正常对照组相比 , 体重增长抑制非常显著 (P
< 0
.
01 )
, 表明石营蒲 、九节曹蒲剂量在 30 0 、
60 0
、
1 2 0 0 m g / k g 时对孕鼠体重增长基本无
影响 。
1
.
4
.
2 对小鼠生殖能力的影响 : 石营蒲 3 个
剂量组吸收胎率为 0 . 6 6 % 、 0 . 6 7 % 、 0 . 6 2 % ,
低于正常对照组 1 . 76 % , 九节营蒲 3 个剂量
组吸收胎率为 3 . n % 、 3 . 29 % 4 . 43 % , 明显
高于正常组 。 维生素 A D 对照组 15 只小鼠
中 , 6 只部分吸收胎 , 3 只全部吸收胎 , 吸收胎
率为 41 . 9 % , 活胎率仅 50 . 97 % , 明显高于正
常对照组 , 表明石营蒲各剂量组对母鼠生殖
功能不仅无不 良影响 , 与同条件下试验的正
常对照相比 , 石营蒲对孕 鼠的生殖功能有一
定益处 , 而九节营蒲提示对孕 鼠生殖功能有
一定不 良影响 。
1
.
4
.
3 对胎鼠生长发育的影响 : 营蒲各剂量
组共检查胎鼠 91 0 只 , 其生长发育 、外观 、体
重 、身长 、尾长等均未见任何异常 , 与正常对
照 组比较均无 明显差异 (P > 0 . 0 5 ) , 表明石
葛蒲 、九节营蒲各剂量组对胎鼠生长发育无
不 良影响 。 而阳性对照组胎鼠体重 、身长 、尾
长 、胎盘均较正常组低 , 有非常显著性差异
(P < 0
.
0 1 )
。
1
.
4
.
4 对胎鼠骨骼发育的影响 : 胎鼠骨骼经
茜素红染色后观察 , 营蒲各剂量组及正常对
照组的枕骨 、颈椎 、胸椎 、腰椎等基本无异常 ,
其中石营蒲中剂量组 、九节营蒲大剂量组可
见胸骨缺失 , 畸形率为 5 . 1 % 、 3% , 但无规律
性 , 发生率低 。 同样条件下维生素 A D 滴剂组
的枕骨发育迟缓 、胸骨缺失 、骨化迟缓的阳性
率明显增高 , 畸形率为 60 . 38 % , 与正常对照
组比较差异非常显著 (尸< 0 . 01 ) 。 表明石营
蒲 、九节曹蒲各剂量组对胎鼠骨骼发育无不
《中草药》19 98 年第 29 卷第 2 期
良影响 。
1
.
4
.
5 对胎鼠内脏发育的影响 : 石营蒲 3 个
剂量组 , 九节营蒲小剂 量组与正常对照组内
脏均未发现异常 , 九节营蒲大 、中剂量组各见
颅内出血 1 例 。 阳性对照组受检的 26 只胎鼠
中 , 有 14 例可见颅骨下出血 、脑室扩大 、心脏
扩大 、 肾积水显著性 (尸< 0 . 01 ) , 表明石营蒲
各剂量组及九节营蒲小剂量组对胎鼠无不 良
影响 。
2 致突变试验
2. 1 A m es 试验 : 试验菌株用组氨酸营养缺
陷型 鼠伤寒沙门氏菌 T A g , (移码型突变 )和
T A
I。。
(碱基置换型突变 ) , 经生物学鉴定菌株
符合试验要求 。石曹蒲 、九节葛蒲均设 5 个浓
度 : 5 0 0 0 、 5 0 0 、 5 0 、 5 、 0 . 5 拜g /皿 , 且每个浓度
均设平行样 。 试验重复 2 次 。 结果 : 石营蒲 、
九节营蒲各浓度组的回复突变菌落数均未超
过 自发 回复菌 落数的 2 倍 , 而 同条 件下
ZA F
、正定霉素 、叠氮钠分别超过其自身自发
突变数的 2 倍以上 , 有明显诱变性 。表明石曹
蒲 、九节营蒲各浓度组对 T A g 。、 T A I。。 2 个菌
株无诱变性 。
2
.
2 小鼠骨髓细胞染色体畸变试验 : 小鼠
4 0 只 , 雌雄各半 , 体重 1 8 ~ 2 0 9 , 随机分为 s
组 , 每组 5 只 。 石营蒲 、九节营蒲分别设 3 个
剂量组 : 1 2 0 0 、 6 0 0 、 3 0 0 m g / k g , 以环磷酞胺
70 m g /k g 作为阳性对照 , 阴性对照组不用
药 。 用灌胃法间隔 24 h 分 2 次给药 , 3 h 后活
杀 , 取骨髓 Gi e m s 染色 , 电镜下 观察每组每
只小鼠骨髓的中期分裂细胞 , 进行染色体畸
变分析 , 记录畸变类型和数量 , 用 拌检验作统
计学处理 。 结果 : 从染色体畸变率看 , 九节营
蒲 1 2 0 0 m g / k g 时染色体畸变率为 1 . 3 % ,
高于阴性对照组的 0 . 3 % , 但 尸 > 0 . 01 , 其
余九节营蒲 、石营蒲 5 个剂 量组与阴性对照
组比较 , P > 0 . 01 。 同条件下环磷酞胺组染色
体畸变率为 1 9 . 0 % , 与阴性对照组相比 , 尸<
0
.
01
。 结果表明 : 石营蒲 、九节营蒲在 1 2 0 、
60 0
、
30 0 m g / k g 剂量时 , 无诱发染色体畸变
效应 。
.
1 1 1
.
2
.
3 小 鼠微核试验 : 小鼠 48 只 , 雌雄各半 ,
体重 20 一26 9 , 随机分为 8 组 , 每组 6 只 。 石
营蒲 、九节曹蒲各设 1 20 0 、 6 0 0 、 3 0 0 m g / kg 3
个剂量组 , 阴性对照组给蒸馏水 , 阳性对照组
给予环磷酞胺 30 m g /k g 腹腔注射 。 用灌胃
法间隔 24 h 分 2 次给药 。 活杀 , 取骨髓 , 制
片 , 计算其微核发生率 。 结果 :九节曹蒲 3 个
剂 量 组 微 核 率 分 别 为 1 . 83 % 、 2. 0 % 、
2
.
3 3 %
, 均高于同条件试验的石曹蒲组及 阴
性对照组 。随着九节营蒲剂量加大 , 各组的微
核率亦随之上升 , 有一定的剂量效应关系 。结
果表明石营蒲不能诱发小鼠骨骼嗜多染红细
胞微核率显著上升 , 而同条件下 , 环磷酞胺则
使微核率显著增高 (p < 0 . 01 ) 。
3 讨论
因孕期营养不 良亦可造成仔胎畸形 , 故
试验时供给孕 鼠含充分营养饲料 , 并在同条
件下设不含受试物阴性对照组及阳性致畸物
对照组 。试验在孕鼠胚胎器官形成期给药 , 此
期对药物致畸最敏感 , 可以看出 , 石曹蒲 3 个
剂量 组的孕 鼠 吸 收 胎率 分别 为 0 . “% 、
0. 67 %
、
0. 63 %
, 明 显 低于 正 常 对 照 组 的
1
·
76 %
, 此试验结果与杨永年等对石营蒲挥
发油主要成分 a 一细辛醚致畸试验结果相符 ,
当剂量为 61 . 7 、 20 . 6 m g /k g 时 , 孕 鼠的吸收
胎率为 7 . 1 % 、 O% , 明显 低于 正常对 照组
(13
·
3% )
〔, 。〕 。 结果提示石营蒲可能对孕鼠的
生殖能力有益 。 九节营蒲 3 个剂量组的吸收
胎率分别为 3. 1 1 % 、3 .2 9 % 、 4. 43 % , 高于正 :
常对照组 1 . 76 % , 而且随着九节营蒲剂量的
加大吸收胎率随之上升 , 有一定剂量效应关
系 ; 九节营蒲 1 2 0 0 、 6 0 0 m g / k g 剂量组胎鼠
可见 颅 内 出血及 胸骨缺失 , 畸形率分别为
2. 17 %
、
3 %
, 而 同件试验 的正常对照 组为
o %
, 故不能排除九节营蒲 , 尤其是 120 0 、 60 0
m g /k g 时有胚胎毒及致畸趋向 。
3 个致突变试验表 明 , 石 营蒲剂 量在
3 0 0
、
6 0 0
、
1 2 0 0 m g / kg 时 , 无致突变效应 。 在
同 条件试验下 , 九节营蒲大剂量组 (1 2 0 0
m g / k g )染色体畸变率 (1 . 3 % )为石营蒲
(0
.
3 3 % )及阴性对照组 (0 . 3 3 % )的 4 . 0 3 倍 ,
小 鼠微 核试验的微核率 (1 . 83 % 、 2. 0 % 、
2
.
3 3 % ) 高 于 石 营 蒲 组 ( 1 . 1 7% 、 1 . 3 0 %
1
.
5 0 % )及阴性对照组 (1 . 3 0 % ) , 并随着九节
曹蒲剂量的加大微核率随之上升 , 有一定剂
量效应关系 。提示九节营蒲增大剂量时 , 可能
有致突变效应的倾向 。
九节营蒲与石葛蒲临床上作为具相同功
效的中药应用多年 , 但从其植物科属 、显微组
织结构 、化学成分 、药理作用方面来看 , 则为
2 种完全不同的中药 。 石营蒲为天南星科 A -
co ru
: g ra 舰in e : s ol a n d 植物根茎 , 组织中以
大量油细胞为主 , 为含挥发油较多的中药之
一 , 并含 Q 、p一细辛醚 、黄樟醚等成分 ; 而九节
营蒲则为毛蓖科阿尔泰银莲花 A ne m on o a l-
ta ic a Pi sc h 之根茎 , 组织中含大量石细胞 , 以
淀粉为主成分 , 含唬拍酸 、棕桐酸 、 5一轻基乙
酞丙酸 、银莲花素等 , 但未见有挥发油及其药
理作用的报道 〔, ‘〕 。 本试验结果提示 , 九节营
蒲尤其是大 、中剂量时 ,有胚胎毒及致畸趋向
及致突变效应的作用 , 为了临床用药的安全
性 , 我们认为对九节营蒲毒理作用有进一步
研究的必要 。
参 考 文 献
1 T a ylo r JM
, e t a l
.
T o x 正o l A PPI Pha r m a e a l , 1 9 6 7 , 1 0 : 4 0 5
2 G r o s s M A
, e t a l
.
A m A s s o e C a n e e r R e s
,
1 9 7 0
,
8
:
2 4
3 H a b e r m a n R T
.
P r ije e t P
一
1 5 5
一
7 0 R ePo r t o f the F o o d a n d
D r u g A d m in is t r a tio n
,
1 9 7 1
.
15 5
4 O Pd yk e D L
.
J Fd C o s m e t T o x ie o l
,
1 9 6 7
,
1 3
:
7 9
5 召卜文霞 , 等 . 中成药研究 , 1 9 84 , 1 : 26
6 T a yle r JM
, e t a l
.
T o x ie o l A PPL Ph a r m a c a l
,
1 9 6 7
,
1 0
:
4 0 5
7 O Pd yk e D L
.
J Fd C o s m e n t T o x ie o l
,
1 9 6 7
, 1 3
:
1 2 1
8 H a g a n E C
.
T o x ie o l A PPL Pha r m a e o l
,
1 96 5
,
7
:
18
9 杨永年 , 等 . 南京医学院学报 , 19 86 , 1 (6 ) : 1
1 0 杨永年 , 等 . 南京医学院学报 , 19 5 6 , 4 (6 ) : 2 4 8
1 1 周晓园 , 等 . 1 2东中医学院学报 , 1 99 4 , 4 : 2 70
(1 9 9 6
一0 9
一
1 3 收稿 )
·
1 1 2
·