全 文 ：· 药剂与工艺 ·
高效液相色谱法测定雪莲细胞培养组织中黄酮含量
中国林科院森林生态环境研究所 北京 王文芝 介
摘 要 提出用反相液相色谱法分离并定量从雪莲细胞培养组织中提取的 ‘ , , 一三经基一 一甲氧
基黄酮和 ’ , , 一三羚基一 , 一二甲氧基黄酮含量 , 并对分离机理进行初步探讨 。
关锐词 雪莲 高效液相色谱 黄酮 含量测定
雪莲为菊科植物绵水母雪莲花
的全草 , 是名贵的中草药 , 具有
补肾壮阳 , 调经止血之功效〔‘一们 。 雪莲中含有
丰富的黄酮贰及黄酮类化合物 , 这又使雪莲
具有强心降血压功能 。 但由于雪莲只在海拨
以上地域生长 , 又是我国三类珍稀植
物 , 所以作为药用受到极大限制 。中科院植物
所赵德修先生通过细胞培养得到雪莲细胞培
养组织 , 为雪莲的药用开辟了前景 。我们利用
高效液相色谱法分离并定量了雪莲细胞培养
组织 中两种黄酮化合物 , 快速 , 准确 , 并对分
离机理进行初步探讨 。
仪器和试剂
型 高效液相色谱仪 ,
泵 , 紫外检测器 , 通用进样器 ,
数据处理机 , 所用试剂均为优级纯 , 水
重蒸 , 经 拌 滤膜过滤 。 两种黄酮对照
品 , 色谱纯 公司 。
样品制备
标准样品 精密称取 , , 一三经基一
甲氧基黄酮和 ‘ , , 一兰握基 一, 一二甲氧基
黄酮各 于 容量瓶中 , 用 甲醇溶
解并定容摇匀备用 。
样品制备 精密称取雪莲细胞培养组织
研细后转入 锥形瓶 , 加入
甲醇回流 , 过滤 , 定容至 ,
滤液经 拌 滤膜过滤后待分析 。
测定
色 谱 条 件 柱 为 一
! , 流动相为 甲醇一 水
用磷酸调其 一 , 流速 , 检
测器 , 。
。 标准曲线绘制 精密吸取两种黄酮标准
液 、 、 、 、 拜 分别进样 图 , 以进
样量为横坐标 , 峰高为纵坐标作标准曲线 , ‘
, 一三经基一 一 甲氧基黄酮回归方程 为
, 一 , ‘ , , 一三经基一 ,
一二 甲氧基黄酮 回归方程为 , 。 一
, , , 二者在 一 拼 范
围内线性关系 良好 。
精密度实验 精密吸取两种黄酮标准品
拌 , 重复进样 次 , 测得峰高值 ’ , , 一三
经基 一 一甲氧基黄酮变异系数 , 标准偏
差 沐 , , , 一三经基一 , 一二甲氧基黄酮
变异系数 , 标准偏差 。
样品测定 精密吸取供试样品溶液
拌 进样分析 , 图 外标法计算两种黄酮
含量 。
· , , , , , ,
王文芝 女 , 年毕业于北京大学化学系有机化学专业 。 现任中国林料院森林生态环境研究所所 长, 高级工程师 。 。年以来一直从事高效液相色谱分析工作 。 在医药 , 农药 , 有机反应历程 , 食品营养成分 , 植物内源激素等方面分析有独道之处 。 年以副主编出版专著《现代实用仪器分析方法》, 主笔第二章“高效液相色谱法” , 文中 个分析方法中有 个为作者首次提出 。 先后在《分析化学》、《色谱》、 《中草药》等杂志上发表论文 二十余篇 。
·
犷一一飞尸一 犷 一亨一 言一丫厂, 之 成
时间 户
图
时 间
样品色谱图
一黄酮标准品 一样品色谱 一 ‘ , , 一三轻基一 一甲氧基黄酮 一 , , 一三经基 一 , 一二甲氧基黄酮
回收率实验 精 密吸取标准对照液
拜 于已精密称量好的雪莲细胞培养组织中 ,
重复样品制备过程 , 得到供试液 。 精密吸取
拌 供试液进样分析 , 计算两种黄酮 回收
率 , 结果 , ’ , , 一三经基 一 一甲氧基黄酮 回收
率 写 , , , , 一三经基 一 , 一二 甲氧基黄酮
回收率 写 。
结果与讨论
色谱条件选择 两个化合物在反相
柱上都会有较强保留值 , 但二者之间相差 一
个甲氧基 , 只要调整好流动相中甲醇比例 , 二
者会很好分离 , 所以首先确定采用反相液相
色谱法 。 在流动相的选择上我们也做了大量
实验 , 首先用 甲醇 水为流动相 , 结
果是 ‘ , , 一三轻基一 一甲氧黄酮 后被
洗脱 , 而 , , 一兰经基 一 , 一二 甲氧基黄酮
不能被洗脱 , 显然是流动相强度不够 , 当流动
相 中甲醇含量高于 , 二者能被洗脱 , 我
们选用 甲醇 水为流动相时 , , , ,
一三经基 一 一 甲氧基黄酮 出峰 ,而 ’ ,
, 一三经基一 , 一二 甲氧基黄酮 出
峰 , 二者分离度大于 。 我们考虑到这两个黄
酮分子中均有三个酚经基 , 有一定酸性 , 所以
流动相用适量磷酸调节 一 , 峰形窄而对
称性好 。 黄酮化合物在紫外 有较强
吸收 , 在这个波长下 , 可避免一些较低波长吸
收物质干扰 , 使定量更准确 , 所以实验中选用
紫外 处检测 。
分离机理探讨 从分子结构上分析 , ,
, 一三羚基一 , 一二甲氧基黄酮 比 ‘ , , 一三
经基一 一 甲氧基黄酮多一个 甲氧基 , 而甲氧基
是吸电子基团 , 所以前者分子极性低 , 而且由
于分子中多一个 甲氧基基团 , 分子空间体积
加大 , 对称性好 , 因而 ‘ , , 一三经基一 , 一二
甲氧基黄酮在 柱上保留值应大于 , ,
三经基 一 一甲氧基黄酮 , 实验证明在选定的色
谱条件下 , ‘ , , 一三经基一 一 甲氧基黄酮出峰
在前 , ’ , , 一三经基一 3 , 6 一二甲氧基黄酮出峰
在后 。
此方法用于雪莲细胞提取液的分离 , 结
果令人满意 。
参 考 文 献
1 北京医学院药理教研室.北京医学院学报 , 1 9 7 6 ( 1 1 ) : 43
2 林秀珍 , 等.药学学报 , 1 9 8 6 , 2 1 ( 4 ) : 2 2 2
3 崔志涛 , 等.中草药 , 1 9 9 5 ( 5 ) : 2 4 7
4 中国林科院分析中心 , 现代实用仪器分析方法 北京 :中
国林业出版社 , 1 9 9 4.
( 1 9 9 7
一
0 3 一 2 8 收稿)
D eter幻。in a t io n o f th e C o n te n t o f F la v o n o id s in T is s u e C u lt u r a l M e d ia o f M e d u s a S a u s s u r e a
( S a u s s u re a m e d u s a ) C e l ls b y R P
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t e r m i n a t i o :1 o f t h e e o n t e n t s o f H i s P i d u l i n a n d J
a e e o s i d e i n e u l t u r a l t i s s u e m e d i a o f S a u s s u re
《中草药 》19 9 7 年第 28 卷第 11 期
服dusa by
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