全 文 ：灵芝菌丝体和发酵液有效成分及含量分析
南京大学生物系 。。 李化兰 。 郑 涛
摘要 研究了南京紫金山 ‘灵芝 此 菌 丝体及 发酵 液的有效成分及 其 含量 。 结
果表明 , 菌丝体中碱提多糖为 , 水提多糖为 写, 发酵液多糖为 。 菌丝体 含 种氨基
酸 , 总量为 , 发酵液含 种氨基酸 , 总量 。 菌丝体含 种微量元 素 , 发酵液含 种
微量元素 。
关键饲 灵芝 灵芝多糖 发酵 含量测定
近年来认为灵芝所含多糖可能是其重要有效成分 。 灵芝多糖能增强小鼠腹腔巨细胞的吞
噬功能 , 促进蛋白质和核酸的形成 。 国外亦报道了灵芝多糖是其抗小鼠 一 肉 瘤 的有效成
分 。 随着中药药理活性物质的深入探讨 , 其中微量元素日益受到人们的重视〔一 〕, 微量元素
与多种疾病的发生与发展有关系 , 故作者对灵芝中微量元素进行了测定 。
灵芝菌丝体与发酵液的充分利用 , 为灵芝开辟了一条新的药用途径 。 我们对南京紫金 山
的灵芝进行了组织分离 , 获纯菌株 , 经鉴定 , 证实分离成功 。
材料和方法
菌种 灵芝 赤芝 二’“。 菌株 , 从南京紫金山栋树林中采集 , 子
实体经组织分离 、 纯化 , 获纯菌株 。
培养墓 母种斜面培养基 一 马铃薯葡葡琼脂培养墓 。
固体培养基 长子实体 甘蔗渣 , 鼓皮 , 蔗糖 , 过磷 酸 钙 , 黄豆
粉 , ‘ · , ‘ · , 石。
液体培养基 豆饼 粉 , 蔗 糖 , ‘ , ‘ · ,
‘ ‘ , 。
多糖提取与测 定
多糖提取 碱提法 灵芝菌丝体加入 , 在 ℃水浴中浸提 ·
过滤 , 滤液加入等体积 乙醇沉淀 , 过滤 , 醇洗沉淀物 次 , 法脱蛋白, 流水透析 ,
得菌丝体多糖 。
水提法 灵芝菌丝体加入适量水 , 沸水浴中提取 一 , 过滤 , 滤液加入 倍体积
乙醇沉淀 , 离心 , 弃去上清液 , 醇洗 , 脱蛋 白, 透析 , 得菌丝体水溶性多糖 。 发酵液用乙醇
直接沉淀 , 离心过滤 , 醇洗 , 脱蛋白, 透析 , 得发酵液多糖 。
多糖含量测定—葱酮法或苯酚一硫酸法 精密配们梯度的葡萄糖标 准溶液 , 用葱酮法在 处测 值 , 用苯酚一硫酸法在 处测 值 , 绘 棍标准 曲线 。
样品多糖含量测定 碱提与水提菌丝体多糖 、发酚液多糖 各 取 , 定容 , 葱酮
法或苯酚一硫酸法测定 , 记录 值 , 重复次 , 所测 值从标准曲线上查得相应的多糖浓度 。
多糖的红外光谱测定 多糖样品用 压片 , 在 ! 一 型红外 光谱 仪上
于中红外区 一 一 ’ 测定吸仅光谱 。
氨基酸测定 ! 一 氨基酸 自动分析仪 , 紫外检测器 , 波长 , 流动相
, , ,
《中草药 》 年第 卷第期
液 液缓冲液进行梯度洗脱 。
微量元素测定 美国一 道真空型电感偶合等离子发射光谱仪 , 配用 一
计算机 。
结果与讨论
灵芝多糖 测定结果表明 , 碱提粗多糖为 菌丝体中含多糖量 , 其中 的 纯
多糖占粗多糖 。 水提粗多糖为 , 纯多糖占 。 碱提得率高于水提 , 碱提 多糖
呈黄色 , 水提多糖呈 白色 。 从工艺上评价 , 碱提需耗用大量 , 还要 调 , 增 加
工艺步序 。 水提无以上缺点 , 但酒精的用量 比碱提多 倍 。
多糖的红外光谱分析 图 显示了多糖特征吸收峰 , 在 一 ’出现一 种 宽 峰
是 一 的伸缩振动 , 在 巧 一 ‘有一强吸收峰为 一 的变角振动 , 在 一 ’的 吸
收峰为一 的变角振动 。
菌丝体与发酵液的氨基酸含量 见表 、 、 。
微量元素含量 见表 。 菌丝体含 种微量元素 , 其中种是必需微量元素 , 以 、 、
的含量较高 。 有毒元素 的含量低于中毒剂量 。 发 酵液含 种微量元 素 , 其 中 种是
衰 员芝 丝休中奴基酸含工分析
氨基酸
天冬氨酸
氨基酸
己,立
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眺氨酸
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丝氨酸 浦
甘氨酸 。。
组氨酸
精氨酸
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赖氨酸
色氨酸
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图 灵芝多粉红外光谱图
表2 灵芝发醉液中橄签雌含t 分析 ( m g/ m ! )
氨基酸 m m O I m g % 氨基酸 In m o l m g %
精氨酸
脯氨酸
1一 甲基组氨酸
3 一甲基组氨酸a 一氨基丁酸
酪氨酸
撷氨酸
蛋氨酸
吮硫酸
半眯氨酸
异亮氨酸
亮氨酸
经赖氨酸 一 1
经赖氨酸 一 2
苯丙氨酸
色氨酸
鸟氨酸
赖氨酸
0 8 9
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天冬氨酸
谷氨酸
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磷酸乙醇胺
丝氨酸
天冬酞胺
甘氨酸
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牛磺酸
组氨酸
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脏氨酸
苏氨酸
丙氨酸
日一氨基异丁酸
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裹3 灵芝, 丝体和发醉液各类奴共吐含t 比较 衰4 员芝, 丝体和发醉液的橄t 元素含l 分析
元素元素测试项目 含量 (% ) 占氨基酸总t (% ) 含趁
( P P m )
发酵液
含最(P P m )
菌丝体 发 酵液
-19naO-L州M侧NNP1笼已d0reu;滋A压Q知V0EKvz氨基酸总量
PbsrTieG
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芳香族氨基酸总量
精氨酸
菌丝体 g /10 09
发酵液 g /10o m l
菌丝休 g / 1009
发酵液 g /10o m l
菌丝体 g / 1009
发酵液 g / 10 0 m l
菌丝体 g/工0 0 9
发酵液 g/ 10 om l
菌丝体 g八009
发酵液 g / 10O m l
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必需 , 以Z n 、 M n 含量较高 。 发酵液中不含
有毒元素C d 、 P b 。
2
.
4 讨论 :灵芝菌丝体中含有高量支链氨基酸和低量芳香族氨基酸 , 这种氨基 酸模 式比 较理
想 , 1 9 7 5年 F is ch er等发现慢性肝功能异常或肝硬化患者 , 其氨基酸代谢发生异常 , 主要是 血
浆支链氨基酸的含量降低和芳香族氨基酸含量升高 , 因进入脑中的色氨酸和5一经色胺是受血
浆中的支链氨基酸调节 的 , 而肝病患者由于血浆中支链氨基酸的降低 , 大量的色氮酸和 5一经
色胺被脑吸收 , 二者在脑内的浓度增加 , 导致肝昏迷 。 鉴于慢性肝病和肝硬化患者均有血浆
氨基酸型式异 常 , 故F isch er 等首先提出输注高支链氮基酸 , 低芳香族氨基酸的葡萄糖 混 合
液 , 使血浆氨基酸水平正常化 , 获得改善精神神经症状 , 缓解病情 。 针对灵芝菌丝体含有高
量支链氨基酸和低量芳香族氨基酸特点 , 可用以临床治疗慢性肝病和肝硬化患者 。 使素乱的
血浆氨基酸水平正常化 。
灵芝菌丝体的精氨酸相当高为1.8 % , ( 1 0 09 千菌丝体的含量 ) , 高于云芝(1.54 % ) 、
猴头 ( 1.10 % ) 、香菇 ( 1.25 % ) 、 金针菇 ( 1.61 % ) 等真菌菌丝体中精氨酸含量 , 特别是金
针菇的精氨酸含量高 , 但低于灵芝的精氨酸含量 。紫金山灵芝菌丝体氨基酸总量 ( 14 .7 % ) 远
远高出于泰山灵芝子实体氨基酸含量 ( 4.57 % ) 〔5〕。
在灵芝的菌丝体和发酵液中 , 磷的含量相当丰富 , 磷具有镇静安神作用 , 灵芝对神经衰
弱和顽固失眠的疗效与磷的作用有着密切关系 。
今 考 文 献
湖南医药工业研究所 . 中草药通讯 , 1 9 7 9 , 10
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:
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今
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L
o w i s
,
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, e t a l
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L
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:
5 5 9
考 文 献
李承珠 , 等 . 中西医结合杂志 , 1 9 名3 , 3 (5 ) : 2 9 7
D
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。
L a n
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1
8 2 1
(
1 9 9 2
一 1 2一0 3收稿 )
《 中草药 》1 9 9 4年第25 卷第1期
仓。o d r e P 全o d u c ib il it y .
( O r岌9 In al a rt宜elo o n p a宫e 12 )
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5 0 士 2 。 3 1 a n d 2 0 . 0 0 士 4 。 2 5 , L P O i n s e r u m w e r e 1 0 。 7 4 士 。。 9 4 a n d
1 1
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8 0 士 1 。 o 6 n m o l / m l r e s P e c t i v e l y 。 B o t h w e r e s i g n i f i c a n t l y d e e r e a s e d a s e o m p a r e d w i t h t h e e o -
n t r o l g r o u P ( 3 牙。 0 0 士 6 。 5 0 , L P O i , . 0 6 士 z 。 z o n m o l / m l ) 。 T h e s e r e s u l t s s i g n i f i e d t h a t t h e a n t i o x i d ·
a n t m e d i e i n a l h e r b s , e s P e c i a l l y i n e o 功P o u n d e d fo rm , m a y P r e v e n t g a s t r i e s t r e s s i n j u r y 。
( o r i g i n a l a
r t i c l e o n p a g e 2 6 )
.
6 4
.