全 文 ：中国林蛙卵油中的激素成分及
卵油对血小板聚集和血脂的影响
白求恩医料大学 (长春 3 0 0 1 1 2 )李成 义 ’ 陈光荣 孙文 伟
摘要 中国林蛙卵油 、 卵和哈士膜油中的激素成分 ,及卵油对体外血小板聚集和高脂血症血脂的影
响 。 结果表明 , 卵油中雌二醇含量甚高 , 卵油可明显抑制血小板聚集 ,并具显著降血脂作 用 , 提示
中国林蛙卵油可望成为防治老年动脉粥样硬化及高脂血症的有效药物 。
关键词 中国林蛙 卵油 雌二醇 血小板聚集 血脂
中国林蛙 ( 哈士蟆 ) R a 。 a r e m p o r 。 r i a e h e n s i 。 e o s i : D a v i d 的哈士蟆 油 ( o v i d u e t u s
R a n ae )
、 卵巢等部位的化学成分和药效作用已有报道 〔`一 3 〕 , 但对卵及卵油等其它部位的研
究 , 至今国内外 尚未见报道 。 本研究 以中国林蛙卵为原料 , 从卵中提取卵油 , 研究了卵油的
的激素成分及卵油对血小板聚集和血脂的影响 , 为卵油的药用提供了理论依据 。
1 方法与结果
1
.
1 样品采集 : 哈士蟆 由吉林省辉南县科技开发中心提供 , 系当年初冬捕获 , 由 吉 林省生
物研究所动物研究室马常夫研究员和吉林省辉南县科委高级农艺师李广文鉴定 。 在剥取哈士
蟆油 的同时取卵 。
将卵 自然晾千 , 去除杂质 , 用乙醚冷浸 3次 , 过滤醚液 , 减 压回收 乙醚 , 再 经放置 , 挥
去残存的溶剂 , 即得浅黄棕色液体卵油 , 得率约 25 % 。
l
·
2 中国林蛙卵油 : 卵 、 哈士蟆油中雌二醇 ( e s t r a d i o l , E Z ) 、 孕酮 ( p r e g n e n d i o n e , p )
水平的测定 。
1
.
2
.
1 样品处理 : 量取卵油 l m l和称取卵 、 哈士蟆油各 19 , 分别加入 0 . 05 m ol / L 磷酸盐缓冲
液 Z m l 。 l o m i n 后用玻璃匀浆器制成匀浆 , 并移到 l o m l玻璃提取管中 , 加入 o . l m o l / L N a 0 H
o
.
Z m l
, 混匀 , 加 s m l 乙醚 , 盖 上用玻璃纸包被的胶塞 , 水平振荡 s m i n , 离心 s m i n ( 2 0 0 0 r /
m in )
。 用玻璃滴管吸出下层水相 , 加 2 m l双蒸馏水 , 盖上胶塞 , 振荡 、 离心 、 去下层水相 ,
重复 2次 。 将 乙醚提取液全部转移至玻璃测定管中 , 用液氮吹千备用 。
1
.
2
.
2 R I A 分析 : 采用美国 D P c 公司生产的 E : 、 P试剂 。 检测时 , 先将提取液用 l m lo 标准
血清溶解稀释 , 按 R I A 操作程序〔 ` 〕操作。
1
.
2
.
3 计算与结果 : 计算机直接打印出的 表 1 样品 E : 和 p的含皿
结果 x s , 即得 E : 和 p 的含量 , 见表 1。 - 一森藻) 后i石而6介元i 奋i五m o l / L )
此外 , 3种样品中还都检出了肇酮 ( T ) 口鑫毓而履厂一万万一一一丽万一一
和垂体泌乳素 ( P R L ) , 卵油中 还 检出了 哈士蟆卵 1 0 ` .4 。 . 。
卵胞激素 ( sF )H
, 其定量结果均略 。 哈士蟆卵油 . 10 24 0 .0 20 .0
1
.
3 卵油对体外免血小板聚集的影响
1
.
3
.
1 仪器 与材料 : 血小板聚集仪 , 北京生化仪器厂 B s 6 31 型 ; 二磷酸腺营 ( A D P ) , 西
德 B M G公司产品 ; 实验动物 , 健康大耳白兔 , 由白求恩医大实验动物部提供 ; 中 国林蛙卵
油 , 临用前 以磷酸缓 冲液 ( p H S . 2 ) 制成乳悬液 ; 月见草油 , 由白求恩医大制药厂提供 。
.
A d d
r e s s : L i C h e n g y i
,
N o r m a n B e t h u n e U n i v e r s i t y o f M e d i e a l S e i e n e e s
,
C h a n g e h u n
5 8 4
1
.
3
.
2方法与结果 :兔耳缘静脉采血 , 以 3 . 8 %构椽酸钠水溶液抗凝 ( 9 : 1 、 一八 ) , 全血经
室温离心制取富血小板 血 浆 ( P R P , x 0 0 0 r / m i n , l o m i n ) , 及 贫 血 小 板 血浆 ( P P P ,
3 0 0 0 r / m i n
, 18m i n )
。 血 小 板 数为 3~ 3 . 5 x 10 ’ / m m , 。 5一 5卜 l供试样品或 等 容 量的对
照液 , 分别加入 P R P中 , 于 3 7℃恒温搅拌下加入 A D P (终浓度 5协m o l / L )诱导聚集 , 按 B o r n
法〔 5 〕测定血小 板聚集率 。 由给 药 管 的 最 ` 表2 供试品对 A O p引起体外血小板
大透光率与空 白管的最大透光率之比 , 分别
算出不同浓度卵油的血小板聚集抑制率 , 同
时与月见草油进行比较 。 结果表明 , 随着卵
油浓度的增加 , 血小板聚集抑制 率 明 显 增
强 , 效果优于月见草油 。 数据经 统 计 学 处
理 , 见表 o2
1
.
4 卵油对血脂的影响
浪集的影晌
供试品
供试品 的最终
浓度 ( 协 l / m l )
抑聚率
( % )
实验
次数
空白液
哈士蟆卵油
哈士蟆卵油
哈士蟆卵油
月见草油
0 0
。
9 2 6 3 6
。
0土 1 。
。
8 5 2 5 6
。
1土 6 。
一
7 5 0 8 6
。
8 士 3 。
。
6 2 0 2 8
。
8士 8 。
1
.
4
.
1 动物模型复制及给药方法 : 健康雄性 日本大耳白兔由本校动物室纯种繁殖 , 体重 1 . 5
~ 2
.
s k g
, 兔龄 4 ~ 6个月 , 喂词含微量元素及多种维生素的基本饲料 。 饲养 1周后 , 取耳血测
给药前 T C 、 T G 、 H D L 、 L D L , 根据兔血脂高低 随机分为空 白组 、 模型组 、 阳性 对照组和
3个剂量 的治疗组 。 空 白组仅给予正常饲料。 模型组加饲胆固醇 ( 北京 化 工 厂 产 品 , 化学
纯 ) , 每只 0 . 59 / d , 每 日拌入晨食中喂饲。 治疗组除给予胆固醇外 , 还给予卵油 , 每日 1次 ,
拌于午后饲料中喂饲 。 阳性对照组给予多烯康 4 20 m g / k g 。 实验全程为 4周 。
1
.
4
.
2 血脂测定结果 : 实验前各组动物总胆固醇、 甘油三醋 、 低密度脂蛋白一胆固醇 、 高密
度脂蛋白一胆固醇值基本一致 , 组间没有显著差异 。 实验开始 1个月后 , 各组的各项指标都发
生了不同变化 , 治疗组的高密度脂蛋白一胆固醇显著升高 , 总胆固醇 、 甘油三醋 、 低密度脂
蛋白一胆固醇都明显降低 ( 见表 3 ) 。
表 3 血脂的比较 ( 4周 ) ( 万士 SD )
组别
T C
( m位 0 1/ L )
T G
( m也 0 1 / L )
H D L
·
C
( m m o l / L )
L D L
·
C
( m m o l / L )
治疗组 ( m l/ k g)
6
。
2 0士 3 。 0 4
2
。
3 7士 1 。 4 3电
4
。
2 2士 2 。 9 0
3
。
4 4士 1。 9 9
5
。
4 3士 2。 4 5
0
。
2 1士 0。 0 4
0
。
2 8士 0 。 0 8
0
。
3 1士 0 。 1 4
0
。
4 1士 0 。 1 3
0
。
5 1土 0 。 3 2
。
7 3士 0 . 2 8 .
.
8 3士 0 . 3 0二
.
7 6 士 0 。 18 * .
。
8 8士 0 . 17
。
4 6 土 0 。 1 3
3 0 6 士 0 。 3 7
阳性对照组
模 型 组 。 9 1 4土 0 。 3 1 7
.
P < 0
.
0 5
. 今
P < 0
.
0 1
2 小结 与讨论
2
.
1 本实验测得哈士蟆卵油 中 的 激 素含量均比哈士蟆油和卵中的高 , 尤其是雌二醇含量 。
从表 2可 以看出 , 卵油体外抑制血小板聚集活性明显高于月见草油 , 其剂量为月见草油的 1/ 3 ,
而抑聚率却是它的 3倍 。 卵油如此强的抑制血小板聚集活性可能 与其中的多量雌二醇有关〔 6 〕。
2
.
2 有文献报道雌二醇有保护内皮正常功能和抑制因高胆固醇血症所致的内皮通 透 性增强
的作用 , 可减 少粥样硬化的病变范围和严重程度〔 7 〕。 哈士蟆卵油可明显降低血清甘油三酪 ,
升高高密度脂蛋白 , 除与其中的不饱和脂肪酸有关外 , 可能也是高含量 的雌二醇改善了动粥
病变的程度 。 ( 下转第 5 98 页 )
《 中草药 》 19 94 年第 25 卷第 1 1期 · 5 8 5 .
作荧光检识液 、 各 1时 , 点于制备的同一硅胶 G薄层板上 , 以石油醚一苯 ( 1 : l) 为展开剂展开 ,
展距 1c0 m , 取出晾干 , 喷以 1%营香醛溶液 ,在 105 ℃烘 5~ 10 m in ,置紫外光 ( 3 6 50 n m )波长
下观察荧光色斑 , 结果见表 3 。
3 讨论
砂仁 、 豆笼 、 益智 、 草豆落种子虽来源于姜科植物 , 但不同属 ,砂仁 、 豆落同属不同种 ,
益智 、 草豆落不同属 , 不同种 。 药用部位 , 砂仁为成熟果实 , 种子 ; 豆落 、 益 智 为 成熟果
实 ; 草豆落为成熟种子团 。 显微特征种皮横切面的表皮细胞砂仁脊状隆起 , 而混淆品无此特
征 , 可以区别正伪品 。 砂仁色素层细胞间无油细胞散在 , 而益智 、 草豆盆色素层有油包散
在 。 混淆品豆落 、 益智 、 草豆范挥发油含量及薄层层析所显色斑与砂仁明显不同 , 砂仁在色谱
中与乙酸龙脑醋在相对应位置上均显紫红色斑点 , 白菠亦是紫红色斑 , 但模糊不清 , 益智 、
草豆落均为灰蓝色斑点 ; 在与按油精相对应位置上 , 豆落 、 益智显粉红色斑点〔的 , 砂仁 、草豆落
无显色斑 ,在与山姜素小豆盖混合液色谱中草豆落在对应位置上均显褐色斑点〔 1〕 ,而砂仁 , 豆
范 、 益智无色斑 , 斑点荧光检识亦有明显区别 , 不可混用 。 在药材商品 (种子 )鉴别中可以辨其
真伪 。 砂仁 、 豆落 、 益智 、 草豆落应各按其名入药 , 方能确保用药安全有效 。
致谢 : 承内江市药品检验所魏绍 乾所长 、 主任药师审核 , 李开棱副主任 药师用红外光语
法核时海南砂等样品 。
今 考 文 献
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( 上接第 5 5 5页 )
2
.
3 由于中国林蛙卵资源丰富 , 卵油易得 , 并具有很强的抑制血小板聚集活性和 降 低血脂
的作用 , 因此卵油有希望成为防治动脉粥样硬化 、 杭血栓的有效药物 。
今 考 文 献
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·
5 9 8
.
份 e r e r e l i ab l二
( o r i gi n al r ar ic l 。 。往 P a启e 573 )
On t h e O pt i mi z at i o n o f E x t r ac t io n Co n di t i o n so f T e t r an dr i n e n a d
o e me t h ylt e t r an dr ln e f r o m Fo u r st a me n S t e P h an i a( S t
e P h an ` at e t r an dr a )
Z h . n P an
,
C h o n P e i
r o n g - . t a l
S o v e r
a l f a c t o r s i n f l u e n c i n g t h . o x t r a c t i o n o f t e t r a n d r i n e ` n d d e m e t h y l t e t r a n d r i n o f r o m
C h i n e s e m . d i c i n a l h e r b s
,
S *
e P人a ” i a t e t r a 移 d r a 5 . M o o r e w . r e s t u d i o d b y m e a n s o f o r t o g o n a l
m e t h o d
.
T h . o P t i m u m C o n d i t i o n w a s o i g h t h o u r s s t e e P i n g
,
i n 3 3
。
3% a m m o n i a i n a b s o l u t e a lc
-
o h o l f o r f o u r h o u r s u n d e r u l t r a s o n i c a g i t a t i o n
.
T e t r a n d r i n e a n d d e m e t h y l t . t r a n d r i n o w e r 。
d . t e c t . d b y H P L C
.
T h e c o n t e n t s w e r e o
。
6 7 8%
a n d 0
.
6 26沁 , t h e d o t e c t i o n l i m i t s w o r o s 。 8 7 x l o一
a n d o
。 ` a x l o一 m m o l / L r e s P e c t i v e l y 。
( o r i g i n a l a r t i c l e o n P a g e 5 7 5 )
T h e H o r m o n e ! n g r e d i e n t i n t h e E g g 一 0 11 o f C h i n e s e W o o d f r o g
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,
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,
S u n W
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·
0 11
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1 5 D a v i d 下 c r o s t u d i e d a s w . l l a 一 t h . e f f o c t o f e g g 一 0 1 1 o n P la t o l . t a g g r o g a t i o n a n d b l o o d l i P -
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。
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10 让 一l y i n h ib i t b l o o d P l a t . l e t a g g r e g a t i o n a n d . h o w e d a n h y P o l i P e m i a a c t i v i t y 。 I t i 一 。 x P e c t c d ·
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一 0 1 1 o f R
。
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( o r i g i n a l a r t i c l e o n P a g e 5 8 ` )
P r o t e c t i v e E f f e c t s o f P o l y s a c c h a r id e o f M e m b r a n o u s
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L u w . n w o i
,
L . i C h u n li
,
C h e n Y u
, e t a l
S o v . n t e e n P h y s i o l o g i c a l
,
b i
o c h e m i c a l a n d m o r P h o l o g i c a l i n d e x e s c o n s i s t e n t l y s h o 可 e d t h a t A一
t r a g a l u s P o l y s a c c h a r i d e
m y o c a r d i a l i n f a r e t i o n
,
w a s a b l
e t o e n h a n c拼 t h e m y o c a r d i a c o n t r a c t i l i t y , a t t e n u a t e t h e a r e a o f
a n d r e d u c e t h e d e g r e e o f m y o e a r d i a l d a m a g e
d o g h e a r t i n v i v o
.
T h e m e c h a n i s m m i g h t b e r o l a t e d t o t h e i n h i b i t i o n
& t h
e a n t i
一
f
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一
d a m
a g e a e t i o n
.
o f m y o c a r d i a l l y i n f a r c t e d
o
f N a
+ 一
K
r 今
A T P a s e a c t i v i t y
( 0 r i g i n a l a r t i e l e o n p a g e 5 8 6 )
《 中草药 》 1 9 , 4年第 2 5卷第 1 1期 · 6 1 5 .