全 文 ：用 ` SC a 研究红花对大鼠胸主动脉C a ’ 十内流的影响△
四川联合大学原子核科学技术研究所 ( 成都 6 1 00 6 4 )
成都中医学 院
莫尚武. 陈恒留 刘 宁
金建南 张淑 渊 李文学
陈治 恒 刘开明
摘婆 用 “ C a 跨膜流动测定结果 : 红花提取物浓度为5 、 50 、 5 00 卜g /m l时 ,不影响大鼠主动脉静息
状态下C a ’ + 内流 ,对去甲肾上腺素 ( N E : 1 . 2 x 10一 m o l / L ) 和高钾溶液 ( K C I : i o o m m o l / L )引
起的 C a : 十内流 , 则具有不同程度的阻滞作用 , 并具有剂量白致应关系 ( 即红花提取物浓度增高 ,
C a
’ `内流相应减少 ) 。 红花与钙拮抗剂v er a p a m il 的作用规律相似。 说明能阻滞血 管平 滑肌细
胞膜上的受体操纵钙通道 ( R O C ) 和电压依赖钙通道 ( P D C ) ,是红花治疗冠心病的机 理之一 。
关键词 放射性同位素 ` “ C a 维拉帕米 红花 钙离子通道
红花为菊科植物 C a r t h a 。 。 s t窟。 e t o r `u s L . 红花的干燥花 。 该药辛温 , 归心 、 肝 经 , 能
活血通经 , 散瘤止痛 〔 l 〕。 近年研究表明 : 红花能降低冠脉阻力 , 增加冠脉流量 , 能 降低 血
压 , 对心肌缺血有保护作用 2t 一 5〕 ,临床上可用于冠心病的治疗 。 红花是否具有 C a ` 十 拮 抗 作
用 , 目前尚未见报道 。 为了阐明红花治疗冠心病的机理 , 本实验用 ` “ C a跨膜流动测定技术 ,
研究了红花提取液对大鼠胸主动脉平滑肌细膜上 3种钙通道 C a “ + 内流的阻滞作用 , 并与 治 疗
心血管病的常用钙拮坑剂药物维拉帕米 ( v e r a p a m i l) 的作用特点进行 了比较 。
1 实验材料
4 “ C a C I: 中国原 几能研究院产品 , 放射性比活度 l s Z o M B q / g e a ; v e r a P a m i l购自德 国
K n o l l公司 , W i s t a r大鼠 , 体重 2 10 士 3 0 9 。
2 药物来源
红花千品购于成都中医学院并经该院陈治恒教授鉴定 。 红花溶液制备过程如下 : 红花
( 干品 ) 分别用 95 % 、 70 % 、 35 %乙醇浸泡 , 加热回流 hl , 过滤 。 合并 3次滤液 ,回收乙醇 ,
蒸干水分 , 获红花提取物干燥固体 , 实验时用重蒸水将提取物配制成一定浓度溶液供使用 。
3
4 ”
C a跨膜流动测定方法
3
.
1 测定原理 : “ C a跨膜流动测定是核技术与生物技术相合 , 近年来发展起来的新方法 , 其
基本原理是 : 放射性 ` S C a 〔半衰期 T z / 2 = 1 6 s d ,能氢 o . 2 5 7M e V ( 日) 〕 , 与生物组织中的
C a
’ + 具有完全相 同的化学性质及生物学特性 。 但 ` “ C a能衰变释放出 p射线 , 可 以用液闪计数
器探测 。 这就是杯 C a跨膜流动测量的基础〔 6〕。 ` “ C a是由细胞膜钙通道进入细胞内的 , 测 定
细胞内` “ C a 的含量 , 即可计算出C a 名 + 内流量 。 欲测细胞内` . C a的量 , 必须除去组织间 隙中
存在 的 ` “ C a , 因为 90 % C a Z + 是非特异结合在细胞膜外和组织间隙内 , 否则测定结果 无 法代
表细胞内 C a “ 十的变化 , 在除去细胞外 C a “ + 过程中同时必须保证已进入细胞内的毛` C a不跨 膜
向外流失 , 这就是跨膜测定 的关键技术 。 本实验是采用 E G T A 的冷生理液络合法 〔7〕。
3
.
2 测定步骤〔的 : 击昏大鼠 , 迅速取出胸主动脉 , 仔绷除去表面结缔组织 ,剪成 5~ 6m m动脉
环 , 置于连续通 0 2 , 3 7℃的 P S S生理液中平衡 6 o m i n 〔 P S S生理液组成 ( m m o l / L ) : N a C I
*
A d d r e s s
:
M o S h a n g w
: ,
I n s t i t
L` t e o f N
、
c l e a r S e i e n c e a n d T e e h n o l o g y
,
S i e h
、 , a n U n i o n
U n i v e r s i t y
,
C h e n g d
l
△核工业科学基金资助课题
5 3 2
·
1 3 ,l
,
C a e l: 1
.
5 , M g e l
么 x
.
o , K C I 0
.
6 , H e p e a 2 0
, 葡萄糖 10 , p H 7 . 4 〕 , 然后将动
脉环移入含 “ C a ( 37 K B q / m l) 的 P s S溶液中预处理 3 m i n , 之后 , 动脉环 或 继 续 留在 原
液中 s m i n , 供研究溢流 ( le a k ,静息状态下的“ C a 内流 ) , 或转入含去甲肾上腺素 ( N E :
1
.
2协m o l / L ) 或 高钾 ( K C I : l o o m m o l / L 的 4 s C a 一 P SS液中处理 s m i n ( 供 研 究 R O C 或
P D C 的毛` C a 内流 ) 。 取出动脉环置于 。~ 2℃ E G T A溶液中 6 o m i n ,洗去细胞间隙中的 名` C a
E G T A溶液组成 ( m m o l / L ) ; E G T A r o , N a C I 1 3 7 , M g C I 2 . 0 , K C I 4 . 6 , H E P E S
1 0 , 葡萄糖 1 0 , p H 7 . 4 ) ; 滤纸吸干动脉环 ; 称重 , 消化 ; 加入甲 苯闪烁液 , 用 F J一 2 1 o P型
液体闪烁计数器测定 ` 6 C a计数率 ( c p m ) 。
被测药物在动脉环平衡 15 m in 后加入 P S S液中 , ` S C a 一 P S S 液中也加入了等量 的同 一 药
物 。 药物加入后反复搅动 , 使药物和动脉环均匀接触 。
C a
Z + 内流量由下列公式计算 :
C a
’ + 内流量 ( 协m o l / k g ) 二 动脉环
4 ` C a 活度 ( d p m ) . `一落丽诉面董孙落厂 X 溶液
C a
“ ` 浓度 ( 协 m o l / m l )
溶液 4 6 C a活度 ( d Pm / m l
上式中 , ` S C a 活度 ( d P m ) = 计数率 ( e P m )探测效率
采用外标准道比法 ( E S C R ) 对样品进行淬灭校正 。
溶液中C a Z + 浓度用二 甲酚橙一嗅化十六烷基毗吮分光光度法测定〔” 〕 。
4 实验结果
4
.
1 红花对静息 C a “ ’ 内流作用不明显 , 见表 1 . 对照组钙内流为 87 士 9协m ol / k g , 、 “ r “ p a -
m il 用 3个不 同浓度进行处理后 , 静息钙内流各组与对照组之间差异不明显 . 说 明 v e r “ p a m il
不影响 C a “ + 内流 。 红花提取物浓度 5 0 0协g / m l时 , 测得的 C a “ 十内流量为 84 士协m ol / k g , 与
对照组差异也不显著 。 说明红花对静息状态下 C a Z + 内流无阻滞作用 。
4
.
2 红花对 R O C C a “ 十内流有阻滞作用 : 见美 表 2 红花 、 v o r却 a m “对受体操纵钙通
2
。 在 N E ( 1 . 2 又 1 0一 ” m o l / L )作用下 ,对照组 道 ( R o c ) c a , + 内流的影响
表 1 红花 、 v er a p a m il对静息 c扩 ` 内流的影响 药物名称 药物浓度 C a Z+ 内流量 (卜m o l / k g )
(云士 S )
药物名称 药物浓度(卜m o l / L )
C a
. + 内流量邻 m o l / k g )
( 恋 土 S )
对 照 v e r a P a m i l
v e r a P a m i l
红 花
0
0
。
0 1 1
0
。
1 1
1
。
0 0
5 0 0卜g / m l
8 7土 9 ( n = 1 0 )
8 5 士 1 5 ( n = 5 ) .
8 3 士 8 ( n = 6 ) *
8 6土 7 ( n = 5 〕.
8 4 土 1 0 ( n = 6 ) 申
0
.
o x l 终m o l / L
0
。
1 1 0协。 0 1 / L
1
.
1 0 0 林工n o l / L
5 一` g / m l
5 0 尽g /m l
5 0 0 0召 g / m l
11 5士 1 3 ( n = 1 8 )
1 1 2 士 18 ( n = 6 ) .
1 0 4 士 1 0 ( n = 5 ) *
9 7士 1 6 ( n = 6 ) 今 中
1 0 7 土 g n = 6 ) .
1 0 4 士 9 ( n = 6 )
1 0 8 士 9 ( n 二 6 ) . 今
与对照组比较 . 尸 > 。 . 0 5 与对照组 . 尸> 。 . 05 , ” 尸< 。 . 05 . 中 . 尸 < 。 . Ol( 下同 )
C a
Z 小内流为 一15 士 1 3林m o l / k g ( n 二 15 ) , 说明 N E促进了 R O C钙通过开放 。 在不同浓度的 v e r -
a p a m i l和红花作用下 , R O C的钙内流量呈减少趋势 , 当 v e r a p a m i l自扮浓度为 1 . 1 0协m o l / L ,
红花提取物的浓度为 5 0。林g / m l时 , 钙内流量与对照组差异明显 , 说明 、 e r a p “ m il , 红 花 对
通过 R o C的 c a Z + 内流有阻滞作用 , I C 。。分别为 : 0 . 5 1 ; m o l / L , 6 2 9 . 5 ; m o l / m l 。
4
.
3 红花 P D C 有较强的阻滞作用 : 见表 3 ,在高钾溶液 ( K C I 10 m m ol / L )液中 ,对照组 C a Z呼
内流为 14 3士 1 9 ( 林m ol / k g ) , 比 静 流 和 N E引起的 C a “ 十内流量都高 , 说明 高钾 促 进 了
P D C 钙通道的开放 。 v e r a p a m i l浓 度 为 0 . 1 2协m o l / L 和 1 . 1 0件m o l八 J ) , 红花浓度为 5 0 和
《 中草药》 1 9 9 5年第 26 卷第 10 期 。 5 3 3 .
5 0 0 件g / m l日寸, C a Z子内流量与对照组差异分另! 1
达到显著和极 显著 , I C , 。分别为 0 . 2 4卜m ol /
L
, 5 0 9
.
7卜 g / m l 。
5 讨论
5一 v e r a p a m i l对动脉平滑肌细胞膜 C a “ + 通
道的阻滞特点是不影响静流 ; 对比 R O C和 P
D c 的 C a , + 内流有阻滞作用并有量一效关系 ,
对 P D C 的作 用大于 R O C 。 本结果与国外文
献一致〔 8〕 。 红花提取液对大鼠胸主动脉 C a “ +
表 3 红花 、 v er 印 a m il对电压依赖钙通
道 ( P口 C ) C a “ 内流的影响
药物名称 药物浓度 C
a , 十 内流量 ( 林m o l / k g )
( ` 士 S )
一 `一… ~ 叫一 .一一 ~一一 - 一一一一一
, e r a P a m i l
0
.
0 1 1件m o l / L
0
.
1 1卜`m o l / L
l
。
1 0卜m o l / L
5件g / m l
5 0卜g / m l
5 0 0 林g / m l
1 4 3士 1 9 ( n = 2 4 )
1 2 5士 2 7 ( n = 6 ) 甲
1 1 8 士 1 9 ( n = 6 ) 冲二
1 1 0 土 1 5 ( n 二 6 ) 心 . 申
1 3 7 土 1 8 ( n = 5 ) 甲
1 2 6 士 1 4 ( n = 6 )才 中
1飞5 泣 2 0 ( 一l = 6 )今 中 .
内流 阻滞特性与丫 “ r a p a m il 相似 。 提示 : 红花具有钙拮抗作用 , 阻滞 R O C 、 P D C C a Z十的
内流可能是红花治疗心血管疾病的机理之一 。
5
·
2 红花对 R o C 、 p D C 的 c a , + 内 流 阻 滞 l / 2所 需要 的 浓 度 ( I C 。 。 ) 分 别 是 , 6 2 9 · 5 和
0 5 9
.
7 0 9 / m l
, v e r a p a m i l则分别为 0 . 3 1和 o . 2 4 o m o l / L 。 说明对 e a , ’ 内流要达到同样 的阻
滞效果 , 红花的用药量要 比 v er a p a m i l用药量高。 反过来 , 说明红花的阻滞作用比 v “ r a p “ -
m i l弱 。 v er a p a m il 是化学合成的钙拮抗剂 , 红花提取物含量复杂 ,主要含有红花酿 贰 ,新红花
贰 ,红花贰 ,有机酸 , 蛋白质等几十种成分 。 其有效成分有待于深入研究 。 从红花中分离 、 浓
缩有效成分 , 开发新药 , 进一步提高对冠心病的疗效 , 很有应用前景和科学价值 。
5
.
3 ` , C a跨膜流动测定技术 , 是核技术与生物技术相结合发展起来的 新 ·技 术 , 、目前 已 广
泛用于钙拮抗作用研究 , 此法较其它方法直 观 、 准确 , 能在细胞膜通道水平上阐明其药理 ,
也能用于中药钙拮抗剂的快速筛选和鉴定 。 但中药成分复杂 , 有效成分含量相对较低 , 因此
在实验中 , 中药提取物未经分离 , 精制 , 则其浓度要适当提高 , 以防假阴性结果 ; 但用药浓
度也不宜太高 , 否则对组织产生毒害 , 一般 5~ 5 0 :、 g / m l为宜 。
参 考 文 献
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V a n B r e m a n C
, e t a l
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C a l e i u m B i o e k e r s
B a l t i m
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5 4
G o d f r a i ll d T
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( ] 9 9 4
一 0 5一 0 5收稿 )
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5 3 4
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n a n d l i f e s p a n o f t h e w a t o r f l e a
.
( 0 r i g i n a l a r t i e l e o n P a g e 5 2 7 )
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X u H u i q i
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J 1n y i n g z i 15 t h e d r y r i P : f r u i r o f 尸 。 ; a l 召 J v g ; t J 从 i e h x 二 I t e o n t a i n s m a i n l y t a n n i e a c -
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,
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, v i t a 盯 i n C a n d s a P o n i n s 。 I t s e f f e c t o n u r i n a r y s y s t e m w a s s t -
u d i e d o n m o u s e p o l l a k i u r i a m o d e l b y s e v e r i n g h y P o g a s t r i e n e r v e
.
R e s u l t s s h o w e d t h a t t h e
w a t e r e x t r a e r o f 尸 . l a e 口 s g a 才a c a n d e e r e a s e t h e f r o q u e n e y a n d P r o l o n g r h e i n t e r v a l o f u r i -
n a r i o n a n d i n e r e a s e 〔 h e q u 压 n r i 上y o f e 飞 : 恤 u r i d i t i 〕 几 . T 连己 5 1 11 弓 瓜 之厂毛 了 乙 e 飞 几 i n h i b i r t h e a u t -
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a t i e ` o n t r a e r io n o f i s o l a t e d r a bb i t j e j u n a l s m o o t h m u s c le a n d a n t a g o n i z e t h e s p a s m o d i c
c o n t r a c , i o n a r o u s e d b y a c e t y l c h o l i n e a n d b a r i u m e h l o r i d e o f i s o l a t e d r a b b i t j
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, a n d i s o l a t e d v e s i e a l s m o o t h m u s c l e o f m o u s e
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r a c t i l i t y a r o u s e d b y n o r a d r e n a l i n o n i s o l a t e d t h o r a e i c a o r t a s t r i p s o f r a bb i t
.
A l l o f t h e t h e
t h r e e i n h i b i t i
o n s o f s m o o t h m
u s e l e c o n t r a e t i o n s h o w e d s i g n i e a n t d o s e
一 r e s P o n s e e u r v e
.
( 0 r i g i n a l a r l i e l e P a g e 5 2 9 )
i n f l u e n e e o f S a f f l o w ” : ( C a r t h a nt u s t ` n e t o r `u s )
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M o S h a n g w u
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5 0
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C a i n f l u x i n r a t a o r t a r i n g w a s n o t a l r e r e d b y C
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2 义 1 0 一 ’ m o l / L ) a n d K c l s o l u t i o n ( 1 0 o m m o l / L ) w a s i n h i b i t e d i n a c o n e e n
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c l e c o u l d b e b l o e k e d b y C
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3工n g / L Z T
, i m g / L N A A
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3 m g / L G A
, t h r e o t i m o M S o r g a n i e s a n d y 圣t a m i n s , 6落 s u c r o s e a n d s q o m g / L L H a n d t h r e e t i m e
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( o r i g i n a l a r t i c l e o n p a 吕e 5 3 7 )
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