全 文 ：复方黄柏液质量控制方法的研究
河北省药品检验所 (石家庄 05 0 01 ) 徐韧柳 . 戴 敬 韩桂茄
摘要 对复方黄柏液中的主要药味进行了薄层鉴别 , 利用 柱 层一薄层扫描法测定了其中盐酸小桑
碱的含量 。 本方法可用于复方黄柏液的质量控制。
关键饲 复方黄柏液 盐酸小粱碱 薄层色谱 薄层扫描
复方黄柏液是由连翘 、 黄柏 、 金银花等多味药材提取制成的外用制剂 , 具有清热解毒 ,
祛腐生肌 , 消肿止痛的功能 , 用于治疗骨髓炎 , 疮疡溃后 , 外伤感染等 , 疗效显著 。 为控制
产品内在质量建立了连翘 、 黄柏的薄层色谱鉴别方法和盐酸小粟碱的含量测定方法 。
1 仪器和药品
C s一 93 0薄层扫描仪 , 紫外光灯 ( 日本岛津 ) , 定量毛细管 ( 美国 D r u m m o n d ) ; 盐酸
小粟碱 ( 分析纯 ) , 中性氧化铝 ( 层析用 , 10 0~ 2 0 目 , 上海试剂总厂五分厂 ) , 硅 胶 G
( 青岛海洋化工厂 ) , 薄层板 ( 自制板 , 含。 . 5% C M C一 N a ) , 复方黄柏液 ( 河北省新乐骨
髓炎医院 ) 。
2 薄层色谱鉴别
2
.
1 连翘 : 取样品 40 m l , 加入盐酸 l o m l , 氯仿 2 5m l , 水浴上加热回流 l h , 放冷 , 分取氯仿
层 , 蒸千 , 残渣加无水乙醇 l m l使溶解 , 作为供试 品溶液 。 另取连翘对照药材 g2 , 加水 50 m l
煎煮 30 m in , 滤过 , 补充滤液约 至 40 m l, 自 “ 加入盐酸 1 o m l), 起同法操作 , 制成对照 药 材
溶液 。 再取不含连翘的空白样品 , 照供试品项下方法制得阴性对照液。 吸取上述 3种溶液各4
~ 8户, 点于同一硅胶G薄层板上 , 以苯一醋酸乙醋一 甲醇 ( 1 5 : 4 : 工 ) 为 展 开 剂 , 展 开 ,
取出 , 晾千 , 喷以5%香草醛硫酸溶液 。 供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位 置上 , 显
相同的 2个红色斑点 , 而阴性对照液无此斑点 , 见图 1 。
2
.
2 黄柏: 取样品40 m l , 加稀盐酸调节 p H至
2左右 , 用氯仿提取 2次 , 每次 15 m l , 合 并提
取液 , 蒸干 , 残渣加乙醇 l m l使溶解作为供试
品溶液。 另取黄柏对照药材 0 . 19 ,加乙醇 l o m l
水浴回流巧m in , 取上清液作为对照药材溶液 ,
再取盐酸小梁碱加乙醇 制 成 每 l m l 含 0 . l m g
的溶液 , 作为对照品溶液 。 取不含黄柏的空白
样品 , 照供试 品项下操作制得阴性对照液 。 吸
取对照品及对照药材溶液各 2时 , 其他 2种溶液
各5时 , 分别点于同一硅胶 G薄层板上 , 以苯 -
醋酸乙醋一甲醇一异丙醇一氨水 ( 6 : 3 : 1 . 5 : 1 . 5
, 0
.
5 ) 为展开剂 , 置氨蒸气饱和 的 层 析 缸
内 , 展开后 ,取 出 , 晾千 , 置紫外光灯 ( 3 6 5 n m )
下 检 视 , 供 试 品 色谱中在对照药材色谱相
应的位置上显 2个相同的黄色荧光斑点 , 在与对
「一
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图 1 复方黄柏液 T L C图
A
一连翘 卜连翘阴性对照 -2 连翘药
材 3一供试品 B 一黄柏 l 一阴性对照
2 一供试品 3 一黄柏药材 4 一盐酸小案碱
卜含量测定用供试品
.
A d d r e s s : X u R e n l i u
,
H e b o i P r o v i n e i a l I n s t i t u t e f
o r n r u g C o n t r o l
,
S h i j i
a z h u a n g
《 中草药 》 1 9 9 5年第26 卷第 3 期
12 7
照品色谱相应 的位置上显相 同的一个 黄 色荧光斑点 , 而阴性对照 品无此斑点 , 见图 1。
3 含盘测定
3
.
1 对照品溶液和供试品溶液的制备 : 精密称取盐酸小粟碱约 s m g , 置 50 m l量瓶中 , 加乙
醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 即得对照品溶液 。
精密吸取样品溶液 25 m l , 置小蒸发皿 中 , 水浴上蒸干 , 用少量 50 % 乙醇溶解 。 加 入 g1
中性氧化铝 , 拌匀 , 蒸干溶剂 , 使成松散粉末状 , 加在预先填充好的氧化铝柱 ( 内径 约 0 . 6
c m
, 中性氧化侣 5 9 ,干法装住 ) 上面 , 用 脱脂偏团沾无水乙醇少许拭净皿上所沾徉品 。 放入
柱内 , 用无水 乙醇 40 m l洗脱 , 蒸千洗脱液 , 用乙醇溶解并定容为 2 m l , 摇匀 , 作为供试品溶
液。
3
.
2 薄层色谱和扫描条件的选择 : 自制不 含黄柏的缺味样品 , 按供试 品溶液方法制 备 黄柏
空白对照液 。 将盐酸小粟碱对照液 、 供试品溶液 、 黄柏空白对照液点在同一块硅胶 G 薄 层板
沁0。nJ注ēùō认
上 , 用黄柏薄层色谱鉴别项下的展开剂展开后 ,
置 紫 外 光 灯 ( 3 6 5 n m ) 下检视 , 确定斑点位
置。
对盐酸小粟碱对照品斑点 , 供试 品相应斑
点及黄柏空 白对应处分别进行紫外区全波长光
潜臼描 , 结果见 图 2 。 由图谱可知 , 样品及对
照品的吸收曲线一致 ,黄柏空白为一条 吸 收度
近乎是零的直线 。 由于该薄层色谱分离较好 ,
背景无千扰 , 故选择单波长反射法锯齿扫描进
。 t ” 。 。
}皇。一
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· 二二丁_ . _ . _杏口
_
一 一 , — 一-L一一图 2 盐酸小果碱 、
1
一盐酸小粱碱
复方黄柏液样品光诊 扫描图
2
一样品 3 一黄柏空白样品
行测定 , 3 4 0 n m为测定波长 。 狭缝 1 . 2 x 1 . 2 m m , 灵敏度中等 , 线性化参数 S x = 3 。
3
.
3 标准曲线的制备 : 用定量毛细管吸取盐酸小梁碱对照品溶液 ( 0 . l l3 m g / m l ) 1 , 2 ,
4 , 6 , 8 , 1 0 , 1 2时分别点于同一块硅胶 G薄层板上 , 依上述条件展开后扫描测定 , 以 点 样
量为横坐标 , 斑点面积积分值为纵坐标 , 作图得一直线 , 回归方程为Y = 1 08 0 + 2 1 9 9 9 X
r = 0
.
9 9 9 5 6
, 说明点样量在 0 . 1~ 1 . 4协g之间与斑点面积积分值呈线性关系 。
3
.
4 稳定性考察 : 对盐酸小栗碱某一斑点 , 间隔 l h测定 1次 , 共测定 5次 , 其面积积分 值的
变异系数 C V = 1 . 97 % , 说明盐酸小粟碱至少在 4 h 内稳定性 良好 。
3
.
5 精密度考察 : 同板精密度考察 : 吸取相同量的盐酸小栗碱对照品溶液点 于 同一薄
层板上 , 共点 5个斑点 , 按上述方法展开 , 扫描 。 5个斑点的面积积分值 的 变 异 系 数 C V =
1
.
5 8%
。
不同板精密度考察 : 同一供试品溶液同法在 4块薄层板上进行测定 , 含量的变异系数 C V 二
1
.
9 1%
。
3
.
6 回收率试验 : 精密吸取盐酸小粟碱对照品溶液 与 样 品 溶液适量 , 置于同 一 蒸 发 皿
内 , 蒸干后 , 上柱 , 同上法处理 , 分别测定回收率 。 5次加样回收率分别为 9 7 . 1 % , 1。 。 . 0 % ,
9 7
.
05 %
,
1 0 3
.
4 5 %
,
10 2
.
2 1%
, 平均回收率 9 9 , 9 6 % , 变异系数 C V 二 2 . 0 1% 。
3
.
7 样品测定 : 吸取盐酸小粟碱对照品溶液 2时和 4时 , 供试 品溶液 1叩 1交叉点 在 同一块硅
胶G薄层板上 , 依上述方法展开 , 扫描 , 以外标两点法计算含量 。 如果样品中盐酸小粟碱含
量较低 , 对照品溶液可点 l ul 和 3口 。 1 0批样品的含量测定结果见表 。
( 下转 第 1 3 7页 )
12 8
6彭新君 。 湖南中医学院学报 , 1 9 , 2 , 2 2 ( 8 ) :
4 8
6 R a y P
。
J l n d i a n C h e m s o e
, 1 9 4 0
,
1 7 :
6 8 1
7 D e l e z e n n e C
.
A n n l n s t P a s t e u r
, 1 9 1 9
,
3 3
, 6 8
8 F l e e k e n s r e r l i 王l
.
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.
A r e h E x P e r P a t h
U P h a r m a k o l
, 1 9 52
, 2 1 4 : 13 5
9 F l e e k e n s t e n i n
, e t a l
.
A r e h E x P e r P a t h
U P h a r m a k o l
.
z 9 5 2
, 2 1 5 : 1 6 3
1 0 K a y e M A G
.
B i o e ll e m e t B i o P h y s A e t a
,
1 9 5 5 , 18 : 吐5 6
1 1 K
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.
C o n g r I n t e r n B i o e h i m
,
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,
B r u s s e l s
.
1 9 5 5
。
3 6
1 2 A e h y u t h a n K E
, e 之 a l . B i o s e i , 19 3 3 , 6
( l ) : 1
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.
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,
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,
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P r o e S y m P
,
S a l z b u r g A u s t r a
,
2 9`魂 ,
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4
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1 1 3
( 19 9 3
一 1 1一 3 0收稿 )
( 上接第 12 5页 )
讨论
黄柏薄层鉴别中首先将样品酸化或碱化 ,
再用 氯仿萃取均比直接萃取效果好 。
进行含量测定时 , 使用多种有机溶剂均不
能将盐酸小果诚萃取完全 , 故采用全量蒸干后
上柱处理 , 洗脱剂选用无水 乙醉 。 如用 95 % 乙
醇洗脱 (中国药典一部 . 19 90 . 47 4 ) , 杂质洗脱
下来的要多 , 进行薄层扫描时 , 色谱背景有些
干扰 。 用无水乙醇 4 o m l洗脱后继续洗脱 , 所收
集的洗脱液中未检出盐酸小粟碱斑点 。
盐酸小桑碱的含量测定方法 已 有 不 少 报
表 复方黄柏液中盐酸小案碱含且
批 号 含量 ( m g / 1 o o m l ) 平值均
9 1 0 70 1
9 1 0 80 1
9 10 9 0 1
9 0 1 3 G2
孕10 8 0 5
9 1 0 9 0 6
9 2 G1 0 1
9 2 0 6 0 3
9 2 0 7 0谧
9 2 0 9 0 5
0
。
2 1 6
0
。
2 6 1
0
。
2 2 9
0
。
1 7 0
0
。
15 4
0
。
19 2
0
。
1 7 4
0
。
1 7 3
0
。
1 9 3
0
.
15 3
0
。
2 2 7
0
。
25 7
0
。
2 1 7
0
。
1 7 9
0
。
1 4 8
0
。
1 9 2
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。
1 8 1
0
.
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e
.
18 8
0
.
15 3
0
。
2 2 2
0
。
2 5 9
0
.
2 2 3
0
.
1 7 4
0
。
1 5 1
0
。
1 9 2
0 . 1 7 8
0
。
1 7 1
0
。
1 9 0
0
。
1 5 3
道 , 由于本品为滚体制剂且盐酸小粟碱含量较低 ,其他成分千扰大 ,柱层一紫外分光光度法 , 计
算紫外分光光度法等均不适用 。 将样品蒸至近干用氯仿一盐酸 ( 1 0 : l ) 回流提取 〔李同芬 .
中国中药杂志 , 19 8 9 , 14 ( 6 ) : 3 3 〕 , 制备供试品溶液 , 薄层扫描测定结果偏 低 。 经 过反
复试验摸索 , 采用了柱层分离后 , 再用薄层扫描法测定 。 文中所述定性和定量方法简便易行 ,
结果可靠 , 专属性强 , 重现性好 ,可用于监测产品的内在质量 。
( 19 9 3
一 2 0一 1 2收稿 )
《 中草药 》 1 9 9 5年第 2 6卷第 a 助 . 13 7 -
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S t u d ie s o n t 卜e Q u a l i t y o f T r a d i t i o n a l C 全、 i n e s e
M e d i c i n a l H e r b s Q i a n h u G
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加妞 I n s i c q u a l i t y o f t h e r o o t s o f H u a b e i Q i a n h u ( P e “ c e d a ” u 沉 h a r r 少 一 s爪 i r人11 ) , S h a o m a o B e i
《 中草药 》 l , 9 5年第 26 卷第 3 期