全 文 ：花鹿茸、 马鹿茸碱基成分的日定量分析和其
活性抑制作用
北京医科大学药学院
摘要 采用高效液相色谱法对花鹿茸和马鹿茸中的次黄嚷吟、
研究了它们对单胺氧化酶活性的抑制作用。
关健词 花鹿茸 马鹿茸 单胺氧化酶
杨 秀伟
尿普 、 尿啥睫进行含量分 析 , 比较
鹿茸系鹿科动物梅花 鹿 ‘ 和 马鹿 “ 未 角 化或稍角
化的幼角。 前者谓花鹿茸 , 后者称马鹿茸。 系抗老 , 防衰 , 滋补 , 强壮的要药之一 。 在系列
的研究里 , 我们报道了花 鹿茸〔〕、 马鹿茸〔幻化学成分的研究 和 花鹿茸水提物的乙醇溶性部
分对单胺氧化酶 一 活性的抑制作用 , 次黄漂吟是其活性成分之一〔〕。 嗣后 , 我们
又研究了其对抗癌药阿霉素所致心肌细胞拍动异常的改善 , 促使低 引起心肌拍动振幅低
下的回复等〔们的研究 。 今报道花鹿茸和马鹿茸碱 基 成分的 定量分析和它们对 活
性的抑制作用 。
仪器与条件
岛津 一 型高效液相色谱仪 , 联机 一 检测 , 紫外检 测 波 长 , 检出感
度 。 柱 小 流动相为 ‘一
缓冲液 , 流速为 。
材料
花鹿茸和马鹿茸系吉林省市场品 , 经作者鉴定无误 。 尿嗜吮 、 尿音、 次黄嗦吟对照品购
自日本和光纯药株式会社 。
供试液的制备
叉 和 乙醇提取物的制备 分别精密称取花鹿茸和马鹿茸粗粉 , 用 和
乙醇回流提取 , 。 滤取提取液 , 减压回 收溶媒 , 分 别 得 花鹿 茸 的 和
乙醇提取物的残渣 收率 , 马鹿茸的 场 和 乙 醇
提取物的残渣 , 。
水提取物的制备 分别精密称取花鹿茸和马鹿茸粗粉 , 用水煮沸提取 ,
。 滤取提取液 , 减压浓缩至 , 然后加入 乙醇。 去其沉淀 , 减压 回收
溶媒 , 分别得花鹿茸残渣 和马鹿茸残渣 。
分别取一定量 、 、 、 、 和残渣 , 用 一
缓冲液溶解 , 并定容至一定体积 , 供定量分析用。
定量分析
标准曲线的绘制 分别精密称量尿喀 咤、 尿 昔 、 次 黄 缥 吟 , 用
一 ” 缓 冲液溶解 。 然后 , 分别精密抽出每种溶液 一定量 , 组 成 系 列
浓度梯度 , 做为标准溶液 。 取各标准溶液 时 , 分别注入 , 峰 高 和绝对进
样量间呈良好的线性关系 。 标准直线方程 , 尿喀吮为 二 一 , 。 尿昔
为 一 , 次黄嚓吟为 一 , 。
二 , , ,
《中草药 》 年第 卷第 期 ·
样品测定 分别取 、 、 、 、 和供试液一定量 , 进样 , 测定结果如表 。
表 不同溶荆的提取物收皿、 收率和尿啥咤、 尿普 、 次黄嗦吟的含且
名
称
提取物
收量
收率
尿 嗦 吮
收率
尿 营
收率
次黄嗦吟
收率
! ∀ # ∃ #
% ∀ & 。 5 7 。 3 5 2 。 8 ( 0 。 3 6 ) 3 8 。 5 ( 0 。 2 7 ) 3 1 。 7 ( 0 . 2 2
C 1 5
。
0 7
.
5 遴5 .6 ( 0 .3 0 ) 3 9 .7 ( 0 .2 6 ) 3 9 。 0 ( 0 . 2 6 )
D 1 3
。 5 6
.
9 8 1
.
2 ( 0
.
5 9 ) 2 0
. 。(0 . 2 2 ) 6 5 .1 ( 0 .4 7 )
E 4 8 。 4 2 4 . 2 4 8 。 I L 0 。 1 0 ) 9 。 6 ( 0 。 0 2 ) 3 4 。 6 ( 0 。 0 7 )
F 4 2
。
4 2 1
.
2 9 7
。
1 ( 0
。
2 3 ) 2 9
。
4 ( 0
。
0 7 ) 6 6
。
0 ( 0
。
1 6 )
A
、 B 、 E 分别为花鹿茸 的50 % 乙醇 、 70 % 乙醇和水提物 , C 、 D 、 F 分别 为马鹿茸的50 % 、 70 % :乙 醇 的 水 的 提取
物 。 a ) 根据H P L C 峰高计算3成分的含量 ( n = 3 ) , b ) 2 。。g 生药相应提取物 的重量, c ) 括号内的数值为收率
2 c
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时间 t (nl in )
圈1 提取物 H 尸L C
A 、 B 、 C 为花鹿茸水、 70 % 、 50 % 乙醇提取物 1一 尿嚓淀 2 一尿昔 3 一次黄嘿吟
4 .3 回收率: 分别精密称取上述 A 、 B 、 C 、 D 、 E 和F 残渣 , 按 样 品 测 定 项方法测定尿嘀
吮 、 尿昔和次黄嗓岭的含量 。 然后 , 在A 、 B 、 C 、 D 、 E 和 F的溶液中加 入一定量 的对照 品
尿嗜吮 、 尿昔和次黄嗓吟 , 同法测定它们的含量 , 计算回收率 , 均在98 % 以上 。
5 对 M A O 活性的抑制作用
5 .1 M A O 的制备: 实验用体重 30 9 、 7 周龄的雄性小白鼠 , 在4Oc 下 , 断头 , 立刻摘出肝脏 ,
放入10倍体积的o .32m ol/ L蔗糖一 l o m o l / L 磷 酸缓冲液 ( p H 7 。 楼 ) 中 , 用P o ly tro n P T 一 , o
匀浆机匀浆 。然后 , 在600 x g离心 zom in , 分取上清 , 在zs000 x g再次离 心lom in , 得沉淀物 。将
此沉淀物悬浮在10 m m ol /L 磷酸缓冲液中 , 再次在15000 x g离心 10 m in , 得到较纯的M A O 。
然后 , 用 10 m m ol / L 磷酸缓冲液配成lm g蛋白质/m l, 做为M A O 酶源 。 贮 存在 一 70 O C 下 。
5
.
2 M A O 抑制活性的测定: 分别取A 、 B 、 C 、 D 、 E 、 F 试 料和从 鹿 茸 中 分得的 胆固醇
( I ) 、 胆 街一5一烯一3 日一醇一7 一酮 ( I ) 、 胆街一5 一烯一3日, 7 a 一二醇 ( l ) 、 胆街一5 一烯 一3 氏
7日一二醇 ( lV ) 、 胆固醇十四烷酸酷 ( V ) 、 胆固醇油酸酷 ( M ) 、 胆固醇软脂酸醋 ( 孤)、
胆固醇硬脂酸醋 ( 现 ) 、 尿嚓咤 ( R ) 、 次黄嗦吟 ( X ) 、 肌酸醉 ( 兀 ) 、 烟酸 ( 1 ) 、 脉
(现 ) 、 对经基苯甲醛 炭价 ) 、 对赶基苯 甲酸 ( 别 ) 和尿营 (现 ) , 用 50 m m o l/ L 磷酸缓冲
. !8 .
液溶解成不同的浓度 , 做为供试液。 取上述M A O 贮备液 1m l, 加 入8m l 50 m m ol /L 磷酸缓
冲液稀释 。 测定时 , 取120卜l供试液 , 加 入 1。。!
: :
即60叻翻3(次稀澳盈划妈Ov蔑
6Un八,曰1工
1 5 卜IM A O 稀释液 , 充分混合 , 在37OC 温 育
10m in后 , 加入15卜1 ’‘C 标 记的M A O 底物
酪胺 ( 125m m ol/L ) , 反应 开;始 。 Z o m i n
后 , 向反应液中加入100林l的lm ol/L H e l,
使反应停止 。 然后 , 用500卜1甲苯提取酪胺氧
化物3次 。 蒯此提取液500卜l , 加入到 lom l
液体闪烁液中 , 用 B eek m an n L S一2 5 0液体
闪烁仪测定酪胺氧化物的放射强度 。 放射强
度越大 , M A O 活性越强 。
6 结果和讨论
6.1 首先选用O D S反相柱分离鹿茸中的尿哦
吮 、 尿昔和次黄嗓吟 , 未达 到分离之 目的 ,
1 0 0 2 0 0 通00 名00 1此0 0 3 2 0 0
提取物脓度 (协区彻D
图2 提取物对M A O 活牲的抑制作用
花鹿茸 . 0 一 70 % 乙醉 口 一 50 肠二
马鹿茸: 一 70 %乙醇 曰 一 50 乙醇
‘ ·水
△一水
〔· ‘C 〕一酩 胺为M A O 的底物
继而采用了SN H Z柱 。 流 动 相分 别为氯化钠饱和的甲醇一水 ( 80 , 2 0 , v / V ) 、 80 % 水饱 和
的氯仿一甲醇和 o.Z m ol / L 的 乙睛一水 ( 3。, 70 , V / V ) 时 , 一七述 3种成分亦不能 很 好分离 。
的80物叫州!l
(次辞其盘四扮一O咬艺
而流动相用 o.Z m o一/ L N a H :P 0 4一o . l m o l/ L
N a CI 时 , 上述3 种 成分很好地被分离 。用 三
维检测法确证每个峰均为单一成分 。 在流动
相中添加氯化钠 , 使峰形尖如柱 , 以利于用
峰高定量 。 由于被测样品极性较大 , 因此 ,
增大流动相的极性 , 被测样品与N H :基团的
相互作用减少 , 使被检物快速流出。
6
.
2 水、 7 0 % 甲醇和50 % 乙醇作为提取溶媒 ,
对鹿茸成分的提取效果是不一样的 , 如表和
图1所示 。 采用含醇的水提取时 , 溶 出 的 成
分较多。 民间以酒 泡鹿茸饮之 , 似有道理 。
6
.
3 我们曾报道次黄嘿吟是鹿茸抑制M A O
的有效成分〔3〕。 本项研究证明 , 花鹿茸的次
黄嚷吟含量低于马鹿茸 , 但对M A O 的抑 制
作用确比马鹿茸高2倍多 , 如图2 。 因此 , 鹿茸
的M A O 抑制作用有效成分 , 尚待深入研究 。
6
.
4 从花鹿茸和马鹿茸中分得的次黄漂吟、
2 5 5 0 1 0 0 2 0 0 4 0 0 8 0 0 1 6 0 0 3 2 0 0
化合物浓度 ‘砰g /m l)
图3 对M A O 活牲的抑制作用
1 一对经基苯甲醛 2 一烟酸 3 一 次黄漂吟 4 一对经基苯甲酸
〔“C 〕一酪胺为M A O 的底物:
对经基苯甲醛 、 对经基苯 甲酸 、 烟酸均对M A O
呈现抑制作用。 而另外12 种成分对M A O 活性无抑制作用 , 如图3。
H a t t o r i M
, e t a l
-
1 9 8 9
,
4 3 ( 2 )
:
1 7 3
杨秀伟 , 等 . 中草药
W an g B X , e t a l
参 考 文 献
Shoyakugaku Zassh i,
1 9 9 4
,
2 5 ( 5 )
。
J M
e d P h a r m
2 2 9
S O C
W
a k a n
一
Y a k u
,
1 9 8 8 ( 5 )
:
1 1 6
H
u a n g S L
, e t a l
.
P h y
t o t h
e r a
P y R
. s e a r
-
e
h
,
1 9 9 0
,
4 ( 4 )
:
1 5 2
(
1 9 9 3
一0 9 一 0 4 收稿 ) .
《中草药》 1 9 9 5年第26 卷第 1 期