全 文 ：高效液相色谱法测定药材及中成药中
补骨脂素与异补骨脂素含量
第三军医大学西南医院药剂科 (重庆 6 30 0 38 ) 刘松青 . 马文秀 唐 先哲 成 丹 .
摘要 。 用高效液相色谱法测定补骨脂及其中成药中补骨脂素和异补骨脂素含量。 用甲醇一水 (6 ,
40
, v
/
v ) 作流动相 , 在卜 B o n d a p a k c : 。往上 , 两成分能较好地分离 。 用甲醇作提取溶剂 , 超
声振荡提取 30 m i n , 分析了市售补骨脂及 3种含补骨脂的中成药 , 方法简便 , 精密度较高 。
关健词 : 补骨脂 补骨脂素 异补骨脂素 中成药 H P L C
补骨脂系豆科植物补骨脂尸 s or al ea o or 刃 ij ol 沁 L .的千燥成熟的果实 , 性温 , 味辛 ,
具有温暖水土 , 补肾助阳 , 升达脾胃之功效〔1〕。 有致光敏 、 抗菌 、 止 血 、 雌激 素 样 作 用
〔 2〕 , 广泛应用于中成药中。 补骨脂素和异补骨脂素为补骨脂的主 要活性成分 〔 3〕 , 本文拟定
反相高效液相色谱法 , 既可测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂 素 的含量 , 又可测定中成药
中补骨脂素和异补骨脂素的含量 。 实验中对提取溶剂和 提 取时间进行了考察 , 方法选择性
好 、 快速 、 重现性好 。
1 仪器与试药
仪器 : 美国W ar t e r s 8 10 高效液相色谱系统 ( 包括 5 10 泵 , 4 84 可变波长紫外检测器 ,
林6 k进样器 , a a s e l i n e 5 1 0计算衫l控制及处理系统 ) 。 H 6 6 0 2 5超声清洗机 ( 无锡市超声电子
设备厂 ) 。
试药 : 对照品 : 补骨脂素 、 异补骨脂素 ( 中国药品生物制品检定所 ) 。 补骨脂 ( 市售 ) 、
白蚀丸 ( 广州中药一厂 ) , 白瘫风胶囊 ( 天津市第五中药厂 ) , 补骨脂配 (西南医院药局 ) ,
甲醇为色谱纯 , 苯和无水 乙醇皆为分析纯 。
2 色谱条件
色谱柱为少 B o n d a p a k C l 。柱 ( 3 0 0 m m x 4 m m , 10卜m ) , 流动湘为甲 醇 一水 ( 6 0 : 4 0 ,
V / V )
, 流速 : 1 . 2m l /m i n , 检测波长 : 2 4 5叮m ,柱温 : 5 2 士 I O C ; 灵敏度 : o . o o 5 A U F S ,
进样量 : 2 0件 l 。
3 标准曲线制备
分别精密称取补骨脂素 s m g和异补骨脂素 4 . s m g于 10 m l容量瓶中 , 用甲醇溶解并稀释
至刻度 , 摇匀 , 即得 0 . 05 m g / m l的补骨脂素溶液和 o . o 48 m g /m l的异补骨脂素溶液 。
分别精密量取 0 . 05 m g / m l的补骨脂素溶液和 o . o 48 m g /m l异补骨脂素溶液 1 、 2 、 3 、 4 、
5m l于 10 m l容量瓶中 , 用甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 在上述 色谱条件下 , 分别进样20 时 , 测定
峰面积 。 以进样量 ( X ) 对峰面积 ( R ) 回归得补骨脂`素回归方程为 :
X = 一 0 . 0 0 3 0 4 + 2 . x 6 5 X l o 一 7 x R ( r = 0
.
9 9 9 8 )
。异补骨脂素回归方程为 : X = 一0 . 0 0 1 1 3 +
2一 7 4 x 1 0一 ’ x R ( r = 0 . 9 9 9 8 ) 。
4 样品提取条件的选择
4
.
1 提取溶剂的选择 : 分别精密称取补骨脂药材粗粉 ( 过 40 目筛 , 下 同 ) 适量于 25 m l 容量
.
A dd r e s s : L i u S o n g q i n g
,
D e P a r t m o
n t o f P h a r m a c y
,
S o u t h w e s t H o s P i t a l
,
T h i r d M i l i t
r y M
e
d i e a l
U n i v e r s i t y
,
C h o n g q i n g
` . 贵阳中医学院93 届毕业生
《 中草药 》 19 9 4年第 2 5卷第 7 期 · 3 5 5 ·
瓶中 , 各加甲醇 , 无水乙醇 , 苯至刻度 , 用超声波振荡提取30 m in , 静置 。 分别精密量取上
清液 1 . 5m l于 10 m l容量瓶中 , 加入甲醇至刻度摇匀 , 进样 。 结果见 表 1 。
表 1 不同提取溶荆实验结果 ( n ~ 3 )
溶 剂 甲 醇 无 水 乙 醇 苯
成 分
X ( 卜g )
百分含量 ( % )
C V ( % )
补骨脂素
0
。
4 0 7 4
0
。
6 7 9 0
3
。
3
异补骨脂素 异补骨脂素 异补骨脂素
0
。 4 0 7 1
0 。 6 7 8 3
1
。
5
补骨脂素
0
.
3 36 3
0
。
5 6 0 5
0
。
7 8
0
。
3 47 7
0
。
5 7 9 6
1
。
1
补骨脂素
0
。
3 8 0 8
0
。
6 3 4 3
0
。
7 4
0
。
3 8 0 5
0
。
6 33 9
4
.
2 提取时间的选择 : 分别精密称取补骨脂药材粗粉适量于 25 m l容量瓶中 , 加甲醇至刻度 ,
分别超声振荡提取 20 、 30 、 40 、 50 m in 后取出 , 静置 。 分别精密量取上清液 1 . 5m l于 10 m l容
量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 进样 。 结果见表 2 。
表 l 、 2实验结果表明 , 以甲醇为溶剂 , 超声波振荡 30 m in , 提取效果最佳 。
表 2 不同提取时间实验结果 ( n , 3 )
超声时间
成 分
2 0 m i n 3 0m i n 40扭 i t 50 m三n
X ( 卜 g )
百分含量 ( % )
C V ( % )
补骨脂素
0
。
4 0 1 0
0
。
6 68 0
异 补骨脂素 补骨脂素
0
。 4 0 7 4
0
.
67 9 0
3
。
3
异补骨脂素
。
40 1 1
。
6 6 8 5
。
8
0
。
4 0 7 1
0
。
6 7 8 3
1
一
5
补骨脂素
0
。 4 0 44
0
。
6 7 9 9
2
。
8
异补骨脂素
0
。
4 0 8 0
0
。
6 7 9 9
2
。
0
补骨脂素
0
。
40 19
0
。
6 6 9 4
1
。
6
异补骨脂素
。 4 0 1 5
。
6 6 9 1
。
,
2.nl日卜
l一一
。
已.”ǐ门日f,,`
l
5 实验结果
5
.
1 色谱行为 : 在本文的色谱条件下 , 补
骨脂素 、 异补骨脂素及生药中其 它成分分离
良好 , 结果见 图 。
5
.
2 回收率试验 : 取已知含量的补骨脂生药
粗粉 6份 , 精密称定。 精密加入补骨脂 和 异
补骨脂素 , 按所选定样品提取条件进行操作 ,
测定 , 根据各自回归方程计算其含量 , 求得
回收率 : 补骨脂 素 为 97 . 4% , C V = 1 . 1%
(
n = 6 )
, 异补骨 脂素 为 9 9 . 9 % , C V =
1
.
3 ( n
= 6 )
。
匕卜曰州“
时间 (m 111 )
圈 样品色谱图
1
一补骨脂素 -2 异补骨脂素
5
.
3 样品测定结果 : 白蚀丸于乳钵中研碎 , 并使全部通过 40 目筛; 白瘫风胶囊除去胶囊 , 分
别精密称取 白蚀丸药粉 、 白瘫风药粉 、 补骨脂药材粗粉适量于 25 m l容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,
用超声波振荡提取 30 m i n , 静置 。 分别精密量取上清液 1 . 5m l于 10 m l容量瓶中 , 加甲醇稀释
至刻度 , 摇匀 , 进样 , 测定含量 。
精密量取补骨脂配 o . sm l于容量瓶中 , 加甲醇到刻度 , 摇匀 , 进样 , 测定 , 结果见表 3 。
( 下转 第3 5 8 页 )
.
3 5 6
·
衰 骨刺劳损裔中阿托品含最测定结果
样品批号 样品液中阿托品浓度 (m g / m l )样
品中阿托品含量
(n g /片 )
,曰`任几」J任月今直,1一弓`占唯.…
与加入量计算回收率 。结果回收率为 10 1 . 2%,
C V = 3
.
5 5 % (
n = 3 )
。
了 讨论
7
.
1 由于中药橡皮膏多系大复方 , 含 药 量
少 , 基质组成复杂 , 且基质 与其它成分对指
标性成分的测定会产生干扰 , 过去很少进行
9 0 1 1 0 1
9 0 1 1 0 2
9 0 1 10 3
9 0 1 10 4
2 8 4
2 8 9
1 8 5
2 9 4 0
.
1 4 7
指标性成分的定量检测 , 故有关报道资料少 。 本实验采用萃取法提取硫酸阿托品 , 是经过多
次反复的摸索和试验总结出的一种较为合适的方法 。 经过反复处理 , 排除了层析过程中因基
质和其它成分产生的千扰。 该法简便快速 , 回收率稳定 ,便于制剂工艺考察和质量控制 。
7
.
2 在层析过程中 , 展开剂中氨的使用量对样品分 离影响很大 。 样品中阿托品是以游离状
态存在的 , 展开剂中氨量过少时 , 碱性弱不足以克服硅胶的酸性 , 使斑点拖尾严重 , 若氨量
过大 , 则容易使斑点随溶剂推向前沿 , 分离效果差 。 经反复摸索 , 对于高效硅 胶G 板 , 以展
开剂氯仿两酮一甲醇一氨 ( 70 : 1 0 : 15 : 1 ) 分离效果最佳 。 由于氨极易挥发 , 因而展开剂必
须随用随配 。
7
.
3 阿托品经显色后 , 斑点在空气中不稳定 , 加盖玻璃板密封 , 4 h 内斑 点 颜色一直稳定。
( 1 9 9 4刁 2 一 0 1 收稿 )
( 上接 第3 5 6 页 )
表 3 样品含 , 浏定结果 ( n = 3 )
样 品
成 分
补 骨 脂 白 蚀 丸 白 瘫 风 补骨脂配
补骨脂素
0
。
4 0 7 4
0
。
6 7 9 0
3
。
3
异补骨脂素 异补骨脂素 补骨脂素 异补骨脂素
X (卜 g )
百分含量 (% )
C V ( % )
0
。
4 0 7 1
0
。
6 7 8 3
1
。
5
补骨脂素
0
。
15 2 0
0。 25 3 8
2
。
8
异补骨脂素
0
。
1 7 5 8
0
。
2 9 2 3
1
。
3
补骨脂素
0
。
0 2 7 9 2
0
。
1 16 0
0
。
6 3
0 2 8 2 4
1 1 7 4
。
3 47 2
。
17 3 6
。
0 7
3 4 3 3
17 17
1 4
6 讨论
6
.
1 采用高效液相色谱法测定中成药中 2 成分含量 , 具有样品预处理简单 、 出峰时间短 、 灵
敏 、 准确等优点 。
6
.
2 文献报道〔 2〕用苯作为补骨脂的提取溶剂 , 但在本文所采用的色谱条件下 , 苯在 10 m in 左
右出峰 , 延长了分析时间 , 另外提取效果不如甲醇 , 不宜采用 。 我们选用了甲醇作为提取溶
剂 , 效果较好 , 且甲醇提取液的色谱图亦较为简单 。
6
.
3 本实验中采用超声振荡提取较其它提取方法有提取完全 , 快速 , 简便等优点 。
6
.
4 在以流动相作介质时 , 补骨脂素和异补骨脂素最大紫外吸收波长均为 2 4 5n m , 为增加检
出灵敏度 , 故选用 2 4 5 n m 为检测波长 。
6
.
5 取补骨脂 2 个浓度的标准液连续进样 6次 , 测得日内变异系数补骨脂素小于 1 . 5 % , 异补
骨脂素小 于 1 . 6 % 。 在低温冰箱 ( 一 1 8 O C ) 中保存 Z d后 , 连续进样 6次 , 测得 日间变 异 系数
补骨脂素小 于 1 . 8 % , 异补骨脂素小于 2 . 0% , 表明本法测定补骨脂素的含量重现性好 , 稳定
性高 , 能满足分析的需要 。
今 考 文 献
1 江苏新医学院编 . 中药大辞典 . 上册 . 上海 :
民 出版社 , 19 7 7 . 1 17 7
2 黄新生 , 等 . 中药 通报 , 2 9 5 7 , 2 2 ( z ) :
上海人 8 吴 焕 . 中草药通讯 , 19 7 8 , ( 10 ) : 3 2
( 2 9 9 3一 0 8刁 7收稿 )
3 5 8
Qu a n t i t a t i
v e O e t e r m i n a t i n o of A r t e a n n u in i n L ip 0 0 0 爪 e s a n d De x全r a n s
by T L C一S c a n n i n g M e t h od
Ca i M e i m i n g
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一 s c a n n i n g m e t h od f or t h e q ja , t i t a t i v e
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P a k C , 。 c o l , 1位 n w i t h a m o b i l e P h a s e o f M . O H 一 H : O ( 6 . 4 ) a n d d . t e c t e d a t Z` s n m . T h e o P t im u m
c o n d i t i
o n s b扭 s o d o n e x p e r im e n t压 1 r o s u l t s 下 a s t o e x t r . o t t h e s . m p l . b y M o 0 H i 比 a n u l ` r a s o n ` t o r
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.
( o r i g i n a l a r t i c l e o n P a g e 3 5 5 )
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( o r i g i n a l a r t ic l e o n P a g e 5 6 2 )
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S A 1 3
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l e f t d e s e e n d i n g c o r o n a r y a r t e r y l i g a t i
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a r r h y t h 爪 i a s . T h e s e r e s u l t s s u g g e s t t h a t S A h a s P r o t e e t i v e o f f e e t s o n m y o e a r d i a l i s c h e m i a a n d
r e P e r f
u s i o n i
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t: r y
( o
r i g i
` . a l a r t i e l e o n P a g e 3 6 4 )
《 中草药 》 19 9 4年第 25 卷第 7 期
·
3 9 1
·