全 文 ： 一苦 瓜 素 和 日一 苦 瓜 素 的 研 究 进 展
山东大学生物系 济南 ! 王 庆华 于 长春 徐 誉泰 王海仁
摘要 综述 一苦瓜素和队苦瓜素的提纯 、 理化性质 、 生物学性质及作用机理的探讨。
苦瓜 。。 击 。。 ’。。 系葫芦科苦瓜属植物 , 其果实是我国人民常用魂菜 。 近
年来 , 国内外许多学者从苦瓜种仁中分离纯化蛋白质并对其生理作用进行研究 , 从中筛 选出
有效成分作为药用和其它用途 。 目前 已经分离纯化出苦瓜凝集素
, 、 一苦瓜素 一 。 、日一苦瓜素 日一 、 苦瓜 抑
制剂 。 , 以及核糖体失活蛋 白
, 等多种苦瓜种仁蛋白 。 现主要综述 一苦瓜素和卜苦瓜素的研究进
展 。
一苦瓜素和民苦瓜素的分离纯化
年 以脱脂苦瓜种仁为材料 , 采用生理盐水浸提 、丙酮分级沉淀 、 一
离子交换柱层析和 一 凝胶过滤层析等步骤 , 分离得到 种均一的具 有堕
胎作用的蛋白质 , 分别定名为 一苦瓜素和卜苦瓜素亡〕, 经 一 检测两者均为一条电
泳谱带 。
’苦瓜素和卜苦瓜素的理化性质
一苦瓜素和卜苦瓜素都是单链糖蛋白 , 均无凝集素活性 , 分子量分别 为 和 ,
中性糖含量分别为 和 , 一末端氨基酸残基均为 并且富含有 残基 ,
以及 残基 , 但却没有 残基 。 除此之外 , 一苦瓜素还含有少量的 残 基 , 经
水解可产生几个水解片段而卜苦瓜素不含有 残基 , 因而 对它无任何 水解作
用 。 在免疫扩散实验中 , 日一苦瓜素不能与 一苦瓜素的抗血清发生沉淀交叉反应 形成沉淀弧 ,
因而说明它们的免疫化学性质是不相同的〔〕, 也进一步证明了 一苦瓜素和卜苦瓜素是种不
同的物质 。
一苦瓜素和卜苦瓜素堕胎作用的研究
一苦瓜素和卜苦瓜素都能引起怀孕小鼠的早期和中期流产 。 在早期器官发生阶段 , 种
苦瓜素都具有致畸胎作用 , 可引起体外培养鼠胚的畸形生长 , 头 、 躯干 、 四肢出现不正常形
态 , 对内脏卵黄囊的超结构研究表明 , 内胚层出现错乱 , 顶端表面内折程度降低 , 细胞间距
扩大 , 这一时期的致畸作用可能是由于苦瓜素对内脏卵黄囊的毒害作用所致〔〕。
给怀孕 的小 鼠腹腔注射 一苦瓜素 体重 , 多的小 鼠胚胎着床失
败 , 体外研究表明 , 除非 苦瓜素的浓度较高 卜 , 否则并不能显著影响 胚 胎
从 一细胞阶段发育 到桑堪胚阶段 , 但随后胚泡形成的能力显著退化 , 细胞数 目减少 , 细胞分
裂亦受到抑制〔〕。 给怀孕 一 的小 鼠腹腔注射 一苦瓜素 体重 , 胚胎着床被
抑制〔〕。 体外培养胚细胞研究表明 , 一苦瓜素不影响桑根胚到胚泡的发育 , 但当把体外培养
的胚胎移植到假孕鼠子宫中 , 胚胎则显示较低的诱导蜕膜能力并且许多胚胎不能着床 , 即使
着床 , 胚胎发育也很迟缓 , 许多部位仅含有滋养层 巨细胞和胚外膜〔“〕。 可见 , 一苦瓜素终止
, 多 , 召 , , 雄
·
阜孕的作用因怀孕时间的不同而有所差异 , 在怀孕早期可影响到桑堪胚 的发育而终止妊娠 ,
而一旦发育到桑堪胚阶段 , 直 到胚泡以后的发育才受阻 , 这一时期 一苦瓜素可能主要对滋养
层细胞起毒害作用 。
卜苦瓜素抑制假孕鼠子宫对机械刺激的蜕膜反应 。 经 一苦瓜素处理的小鼠子宫 , 基质细
胞不能蜕膜 , 子宫腺体肿胀 , 内胚层和子宫肌层 中退化的细胞重新开始分裂 。 另外 , 日一苦瓜
素对体外培养的内胚层细胞的生物合成活性有抑制作用 , ’ 一尿嗜绽 。 ‘ 一胸腺喀吮和 一亮
氨酸的细胞结合率均明显下降〔〕。 可能卜苦瓜素对早孕鼠的堕胎作用是由于它抑制了内胚层
的分化而导致的 。
一苦瓜素和卜苦瓜素免疫抑制活性的研究
体外研究表明 , 一苦瓜素和日一苦瓜素的非细胞毒作用剂量可以显著地抑制小鼠脾细胞由
于伴刀豆球蛋白 植物凝集素和脂多糖的存在而产生的促有丝分裂反应 , 抑制作用与所用苦
瓜素的剂量成正比关系 。 同时 , 由异体抗原引起的淋巴细胞分裂和由此而引发的溶解淋巴细
胞的反应都被显著抑制。 相反的是 , 沁解淋巴细胞的细胞溶解活性和 自杀细胞没 有 受 到 伤
害 , 而巨噬细胞抑制细胞的作用和吞噬细胞的作用却有明显下降。 体内研究表明 , 给小 鼠注
射非毒性剂量的苦瓜素可以显著抑制迟延型过敏性反应 , 由绵羊红细胞引起的抗体形成也受
到抑制。 同样 , 由琉基醋酸盐醋诱导的巨噬细胞的迁移也被抑制 , 而体内 自杀细胞的的活性
却不受影响〔幻。 由此可以看出 , 一苦瓜素和日一苦瓜素强有力 的免疫抑制活性不可能是 由 于
直接溶解淋巴细胞所致 。
一苦瓜案和卜苦瓜紊抗肿瘤作用的研究
一苦瓜素能够选择性杀伤绒毛膜癌细胞和黑色素瘤细胞 , 而对肝癌细胞的作用不明显 、它
对肿瘤细胞的毒性作用方式与千扰 代谢的一些抗癌药物如氨甲喋吟 、 一氟尿哦吮等的
作用方式不同 , 放射性前体物整合研究表明 , 一苦瓜素抑制肿瘤细胞的蛋白质合成 。 用
苦瓜素处理后 , 绒毛膜癌细胞中绒毛膜促性腺激素和黄体酮的分泌显著减少 , 主要原因是由
于癌细胞数 目的减少 〔, 〕。 日一苦瓜素能够抑制 一亮氨酸、 “ 一尿啼咤和 一胸腺嗜吮整合到人
舌喉鳞状上皮癌细胞中 , 但对 鼠肝细胞的蛋白质 , 和 的合成没有影响〔‘”〕。
一苦瓜素和卜苦瓜紊与其它苦瓜种仁蛋白的关系
由于 一苦瓜素和一苦瓜素均无凝集血细胞的活性 , 因而不 同于苦瓜凝集素 。 据 报 道 ,
一苦瓜素和卜苦瓜素与核糖体失活蛋 白的相应抗血清可以发生交叉反应 , 核糖体失活蛋白也
具有堕胎作用。。 , 两者之间的关系有待于进一步验证 。
总之 , 一苦瓜素和日一苦瓜素的生物学作用中潜在着可观的药用价值 , 它们 与天花粉蛋白
都属于葫芦科植物蛋白, 其作用也具有许多相似之处 。 因而 , 进一步研 究它们的作用方式 、
作用机理 , 减缓它们的毒害作用 以利于临床应 用 , 是非常必要和可行的 。
参 考 文 献
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《中草药 》1 9 9 5年第26 卷第 5 期
( 下转 第271页 )
. 267 -
四 神 胶 囊 的 剂 型 研 究
枪州市药检所 ( 。6 1 0 0 1 ) 王晓琦 郑德杰 刘立维 石 月岭 张云发
上层溶 液展 开 , 置U V 灯 ( 254n m ) 下检视 。 供
试品色谱在与对照溶液及对照品溶液色谱相应的位
置上显相同的红棕色斑点。 见图 。
2
. 2 . 2 补骨脂的鉴别: 取胶囊内容物29 , 加醋酸
乙醋20 m l, 超声处理20 m in , 滤过 , 滤 液蒸干 ,
残渣加醋酸乙醋lm l使溶解 , 作为供试品溶液 。 同
时取四神丸粉末29 , 同法制成对照溶液 。 另取补骨
脂素、 异补骨脂素对照品加醋酸乙 醋制成每lm l各
含Zm g的混合溶液 , 作为对照品溶液 。 吸取上述溶
液各2~ 4月 , 分别点于同一硅胶G 板上 , 以正己烷
一醋酸乙醋(8 : 2 )展开 , 喷以10 % K O H 乙醇溶液 。
置u v 灯 ( 365n m )下检视 。 供试品色谱在与 对照
溶液及对照品溶液色谱相应的位置上显相同的荣光
斑点。 结果见图 。
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四神丸收载于中国药典 ( 1990年版 ) , 是由肉
豆范、 吴茱英 、 补骨脂 、 五味子 、 干姜、 大枣等6
味药组成 。 其崩解缓慢、 服用量大 , 一定程度影响
了治疗效果 。 我们将丸剂改进为胶囊剂 , 并对其定
性鉴别、 溶散时限等进行比较研究 , 认 为 是可行
的。
1 材科和试荆
五味子甲素 、 五味子乙素、 补骨脂素、 异补骨
脂素均购于中国药品生物制品检定所 。 四神丸A 厂
( 批号A ) , B 厂 (批号B : , B : ) 。所用药材由沧
州中药厂提供 。 其它试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2 .1 四神胶囊的制备: 按四神丸处方量 , 大枣加水
煎煮2次 , 每次0.5h , 合并煎液 , 浓缩 成膏 。肉豆落
(制) 、补骨脂 、五味子照流浸膏与浸膏剂项下的渗滤
法 , 用60 % 乙醉作溶剂 , 进行渗滤 , 干姜照流浸膏
与浸膏剂项下的渗滤法 , 用乙醇作 溶剂 , 进行渗
滤 , 合并以上乙醇渗滤液 , 回收乙醇 , 浓缩成膏。
吴茱英 ( 制 )粉碎成细粉与水 、 醇膏混合 , 低温干
燥 、 粉碎 、 混匀 , 装人胶囊即 得。 共 制 2批C :、
C :
。
2
.
2 定性鉴别
2 .2 .1 五味子的鉴别: 取内容物 1.59 , 加 氯 仿
20 m l, 超声处理20 m in , 滤过 , 取 滤 液蒸 干 , 残
渣加氯仿lm l使溶解 , 制成供试品溶液 。 取四神丸
粉末1.59 , 同法制成对照溶液 。 另取 五 味 子 甲素
和五味子乙素对照品 , 加氯仿制成每lm l各 含lm g
的混合溶液 , 作为对照品溶液。 吸取上述 3 种溶液
各Zm l, 分别点于同一硅胶G F :“板上 , 以石油醚
( 3c 一 60 0 C ) 一甲酸 乙醋一甲酸 ( 15 : 5 : i ) 的
图 T L C鉴别图
A 一 五味子 B 一 辛[骨脂
1一供试品 2 一 对照品 3一 对照溶液
2 .3 溶散时限: 按中国药典199。年版 附 录丸剂及
胶囊剂项下的方法检查 。 结果 , 丸剂为92 m in (n =
s ) , 胶囊剂为s7m in ( n = 3 ) 。
( 1 9 9 理一2 2 一 2 9 收稿 )
( 上楼 吝23了互 )
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《 中草药 》19 9 5 平弟26 卷第 5 期 ·
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