全 文 ：大黄素对小鼠腹腔巨噬细胞内
游离钙浓度的影响△
天津医科大学药理教研室 ( 3 0 0 07 0 )崔荣芬命 林秀珍
摘要 用钙敏感的荧光指示剂F u r a 一 2 / Am 定量分析大黄素对小鼠腹腔巨噬细胞内 ( C a “ )i的
影响 。 结果显示 : 在巨噬细胞悬液中相继加人不同剂量的C a C I : 后 , ( C a Z 十 ) i明显增 高 ( 尸 <
0
.
0 1 )
。 巨噬细胞用适当剂量大黄素予处理 10 m in , 使用上述不同剂量的 C a C I : 后 , ( C a ’ 干 ) i
水平明显增高 , 该实验进一步提示 ; 大黄素可促进细胞内 C a ’ + 释 放 , 也 可促进细胞外 C a ’ 十 内
流 。 而且大黄素对 ( C a Z + ) i的作用呈剂量依赖性 。
关键词 大黄素 腹腔巨噬细胞 C a ’ + F u r a 一 2 / A m
大黄素 ( e m o d i n , E M D ) 是从大黄中提取的有效成分 , 文献报道〔 1 , 2 〕。 E M D 具有 抗
菌 、 抗癌和抑制免疫功能等作用 。 但最近本教研室观察到 E M D 可提高淋巴细胞内游 离钙 浓
度 〔 3〕 , 为进一步探讨 E M D对免疫功能的影响 , 本文应用钙荧光指示剂 F u r a 一 2 / A m 测 定了
EM D对小鼠腹腔巨噬细胞内游离钙浓度 ( ( C a Z + ) i) 的影响 。
1 材料与方法
1
.
1 药品与试剂 : F u r a 一 2 / A m : 中国科学院上海生理研究所提供 。 E a g le ` 5 M E M : 日本
N is s iu 制药公司产品 。 E M D : iS g m a公司产品 。 其它试剂均为市售分析纯 。
1 1
.
2 动物 : 小 鼠雌雄兼用 , 体重 10 ~ 2 9 。
1
.
3 方法
1
.
3
.
1 小 鼠腹腔 巨噬细胞制备 : 取小鼠 4只断脊髓处死 , 腹腔内分别注入 2 m l冰 冷 的 E a g -
e ` s一M E M培养液 , 轻揉腹部 l m in 后打开腹腔 , 分别取腹腔液 2 m l置一试管内 , 用无 C a “ + ,
M g
Z十的 H a n k ` s液洗涤离心共 3次 ( 5 0 0 r , s m i n ) , 最后加M E M制成 z ~ 2 x 10 7细胞悬 液 备
用 。
1
.
3
.
2 F ur
a 一 2 / A m 负载及荧光测定 : 取腹腔巨噬细胞悬液 2m l , 加入 F u r a 一 2 / A m ( 终 浓
度 5协m ol / L ) 和牛血清蛋白 ( 0 . 1% ) , 在超级恒温水浴振荡器中孵育 30 m in ( 37 ℃ ) , 再
用无 C a “ + , M g “ 十的H a n k ` s液洗涤离心 3次 ( s o o r , s m i n ) 弃上清液 ,最后将细胞悬浮在 Zm l
无 C a “ 十 , M g “ + 的 H a n k / “液中待测定 。 本实验采用岛津 R F 一 5 10 型 ( 带恒温器的 ) 荧光 分 光
光度计 , 将发射波长固定在 4 9 0 n m , 通过快速 ( 4~ 6 5 ) 转换激发波长 , 记录 3 5 0 / 3 8 o n m 的
荧光比值变化 , 由公式 〔们计算出细胞内游离钙浓度 。 其中 k d = 2 2 4 n m ol / L , 在计算之前 需
减去未负载 F u r a 一 2 / A m 的细胞 自发荧光 :
〔 C a Z + 〕 i = k d · ( R 一 R m i n ) · ( R m a x 一 R ) 一 ` · S
2 结果
2
.
1 C a C 1
2对腹腔巨噬细胞内 ( C a “ + ) i的影响 : 在静息状态下 , 小鼠腹腔 内巨噬细胞在无
C a
“ + ,
M g
“ + 的H a n k ` s液中 , 〔 C a Z+ 〕 i为 19 5 . 5 6士 4 4 . s Z n m o l / L ( n = 1 1 ) 在细胞悬液中
.
A d d r e s s : C u i R
o n g f o n
,
D e P a r t m e n t o f P h a r m a c o l o g y
,
T i a n j i n M
e
d i
e a l U n i v e r s i t y
,
T i a n j i
n
△ 国家自然科学基金资助课题
中 天津医科大学基础医学部
《 中草药 》 1 9 , 5年第 26 卷第 4 期 · 19 9 ·
加入 C a C I: ( 0 . 7 5 , 1 . 7 5 , 2 . 7 5m m o l / L )
后 , 腹腔巨噬细胞内 ( C a “ + ) i均明显高于
静息时水平 ( 尸 < 0 . 0 1 , 图 1 ) 。
2
.
2 E M D对 C a C I丹 l起腹腔巨 噬 细 胞 内
〔 C a “ + ) i增加的影响 : 腹腔巨噬细胞经 EM
D ( 4
.
6 , 9
.
2 , 8
.
5和 3 7协m o l / L )预先温育 1 0
m i n 后 , 在静息状态下 ( o . s m m o l / L E G
T A存 在 ) , 高浓度 E M D ( 3 7协m o l / L )
使腹腔巨噬细胞内 〔 C a “ + ) i较对照组明 显
增加 ( P ( 0 . 0 5 , 表 1 ) , 说明 EM D可促进
内钙释放 。 经适当剂量 E M D作用的腹腔 巨
噬细胞悬液中加入上 述等剂量的C a C I: 后 ,
〔 C a +2 3 1水平较对 照 组 明显 增 高 ( 尸 <
0
.
05 和尸 < 0 . 0 1 , 图 1 ) 。 而 且 , 大黄素增
加巨噬细胞内游离钙浓度 的作用 与 剂 量相
关 , 剂量增加 , 效应增强 ( 图 2 , 表 )
表 静息状态下小鼠腹腔巨噬细脸内
游离钙浓度 ( 夕士 S D )
?翻口`门
耐|叫|洲叫!ù已上,且
闷\,”口日叫仍。ù
圈 1 E MO对 C a C I: 诱导小鼠腹腔巨噬细胞
内钙增加的影响
心 一对照组 ( n = 1 1 ) o · E M D 4 一 6卜m o l / L ( n = 7 )
7
一
E M D g
.
2卜m o l / L ( n = 8 ) 一 1 5 。 5协m o l / L
( n = 6 ) 直 EM D 3 7卜m o l / L ( n 二 7 )
与给药前相比 . 尸 < 。 . 05 . 今尸 < 。。 01 * . * 尸 < 0 . 0 01
与对 照组相比 介尸 < 0 . 05 ` 母尸 < 0 . 01 . ` 公尸 < 0 .的
。男烫叠支盯
去 ` 长 .
t上 l
p. 1口`甘月,
!
八U八内U几月ó几”ē亡口.一
弓。与~.宁3
组别 例数 〔加E C T A 前
C五卜 〕 1 n m o l / L加 E O T A 后’
( 。 。 6m m o l/ L )
对照组 ( 与给药
组等量等 p H水 )
外勿 O加 01几》
大 9 。 2
.
5 卜m o l / L
。
0
1 1 1 9 8
。
6 6 土 4 4 。 8 2 2 6 . 6 0 土 1 1 。 3 6
7 1 8 4
.
6 9 士 4 3 。 2 6 2 4 。 9 1 土 6 。 5 3
8 1 9 4
。
7 7 士 3 5 . 6 4 2 3 。 5 4 土 4 。 6 8
6 2 3 1
。
7 2 士 3 7 . 5 6 . 3 4 。 5 8 士 8 。 8 1
7 2 9 0
。
0 2 士 4 5 。 7 5* 二 3 9 。 46 土 4 。 9 1 ,.
圈 2 E M O对C a C I : ( 1 . 了s m m o l / L ) 小民
腹腔巨噬细胞内钙增加的剂登关系
与对照组相比 * 冰尸 < 。 . 0 1 ` 巾 中 P < 0 . 0 0 1
8俘`,人几舀黄素
注 : 与对照组比较 中 尸< 。 . 5 * * . 尸 < 。。 。 1
3 讨论钙对细胞有极其重要的生理作用 c5 〕 。 巨噬细胞在不 同环境条件下可能发挥不 同 的 免 疫
调节作用〔 6 〕。 当细胞内钙增高到一定程度时 , 钙作为激动剂使细胞产生效应 , 低钙 则 可 导
致机体免疫功能不足 。 本实验结果表明 , 适当浓度的大黄素不但可促进 巨噬细胞内钙释放 ,
而且还可 以促进外钙内流 , 其效应与剂量相关 。 结果提示 : 大黄素有促进机体免疫功能的作
用 。
1 陈琼华 。 冶金医药情报 , 1 9 9 0 , 7 ( 3 ) : 2 6 0 ( 5 ) : 3 4 4 0
陈家坤 , 等 。 中草药 , 19 91 , 2z ( 12 ) .
靳珠华 , 等 。 中草药 , 1 9 9 4 , 25 ( 8 ) :
参 考 文 献
8 8
5 4 3 5
4 1 3 6
1 9 8 5 .
金有豫 . 中国药学杂志 , 1 9 9 2 , 2 7 ( 1 ) : 38
1 9 8 7
一
7 9
:
4 C r y n k i e w ; 。 Z G , e t a l . J B i 0 C h e m ,
N . t h a n C F
.
J C l i m I n v e s r
3 1 9
( l 。。连一 0 9一 0 6收稿 )
.
2 0 0
.
是 n ten ra一 。 ta nd a rd .h Te me th 。 d is pa r o i。 u一 a r一 yad, a n t a g e o u s f o r t h e d o t e r m 盆n a t i o n o r B o r n e o l .
( o r i g i n a l a r t i c l e o n P a g e 1 8 3 )
D e t e r m i n a t i o n o f T a n s h e n o s id e 1 i n T a id a n g s h e n ( C o d 0 0 0 p
s` s p `10 5 “ l a ) a n d
C u l t i v a t e d L u d a n g s h e n ( C
.
P i l o
: u l a ) o f D i f f e r e
n t Y e a r s O l d
D a i J i n g
,
F e n g L i
,
H
a n G u i r u e t a l
A m o
u n t s o f t a n s h e n o s i d e 1 i n c u l t i v a t e d L u d a n g s h e n o f d i f f e
r o n t y o a r s o f c u l t i v a t i o n h i s
-
t o r y w a s d e t e r m i
n e d b y T L C d
e n s i t o m
e t r y i n e o m P
a r i s o n w i t h t h a t i n w i l d l y g r o , n L u d a n g s
·
h e n a n d e u l t i v a t e d T a i d a n g s h e n
.
R e s u l t s s h o w e d t h a t t a n s h e n o s i d e 1 i
n c u l t i v a t e d L u d a n g
-
s h e n d e e r e a s e s w i t h i n c r e a s e d y e a r s o f c u l t i v a t i o n h i s t o r y w h i l e t h a t 10 c u l t i v a t e d T a i d
a n g s
-
i h e n 1 5 s l i g h t l y l o w e r t h a n t h a t o f L u d a n g s h e n o f t h e s a m e y e
a r s o f e u l t i v a t i o n
.
T a n s h e n o s
·
d e 1 i n w i l d T a i d a n g s h e n 1 5 a l s o l o w e r t h a n t h a t i n e u l t i v a t e d T a i d a n g s h e n
。
( o r i g i n a l a r t i c l e o n p a g e 1 8 5 )
S t u d y o n B i o l o g i c a l E f f e e t s o f S o n g z i k e A e id i c P o ly s a c c h a r id e
H o u F a n g y u
,
Y
u Q i n g h u a
, e t a l
T h e b i
o l o g ic a l e f f e c t s o f S o n g z i k e a e i d i e p o l y s a c e h a r i d
e ( S T g o ) , e r e s t u d i e d i n v i v o a n d
v i t r o
。
I t w a s f o u n d t h a t S T 9 0 h a d d i s r i n c t a n t i n e o P l a s t i e
, a n t i b
a c t e r i a l a n d a n t i v i r a l e f f e c t s
。
, 1 m a r k e d l y i n h i b i t s P r o l i f e r a t i o n o f 5 15 0 s o l i d t u m o r i n m i c e a n d r e d u c e s t h e m o r t a l i t y o f
m i c e i n f e c t e d b y S a l m o ” e ll a *夕 P h `沉“ r “` m , a n d s h o w s a P r o t e c t i v e e f f e e t o n F L c e l l s i n f e e t ·
e d w i t h a d y 一 、 a d y , , v s v a n d C B一 。
( o r i g i n a l a r t i c l . o n P a g o 1 9 3 )
P r o t e e t i v e E f f e c t o f T e a P o l y Ph e n o l o n R a t M y o e a r d i a l
I n j u r y In d u c e d b y Is o P r o t e
r e n o l
T a n g S h e n g x i n g , Y . T i
n g
,
Z h a o Z h e n g d o n g
I : e t r e a t功 e o t w i t h t e a P o l y P h e n o l ( T P ) a t a d o s e o f z o m g / k g i p t o r a t s f i v e d a y s b e f o r e
i s o P r o t e r e n o l ( 1 5 0 ) e h a l l e n g e ( i m g / k g
s e , f o r t w o d a y s )
, r e s u l t e d i n d e e r e a s e o o f m a l o n y d
-
i a 一d e h y d e e o n c e n t r a t i。 n , c r o a t i n e p h 。 : p h 。 k i n a s e , l a 。 t i c d e h y d r o g e n a o e ( L n H ) a n d L b H : ,
a c t i v i t i e s , i n c r e a s e d L D H
:
/ L D H
, r a t i o a n d i n h i b i t
e d t h e e x r e n t o f m y o c a r d i a l i n j u
r y
, s im i l
-
a r t o t h e a c t i o n o f P r o P r a n o l
.
A t t h e s
a m e t i m e T P d e c r e a s e d r a t P l a s m a r e n i n a c t i v i t y
。
T h e r e s u l t s s u g g e s t e d t h a t t h e m e c h a
n i s m b y w h i c h T P P r o t e c t s h o a r t f r o 位 1 5 0 一 i n d u e e d m -
y o c a r d i a l i n j
u r y 15 d u e t o i t s a n t i o x y g e n f r e e r a d ic
a l a n d i n h i b i t i o n o f r e n i n a e t i v i t i e s
.
( o r i g i n a l a r t i e l e o n P a g e 19 7 )
E f f e e t s o f Em o d i n o n t h e C y t o Pl a s m i e f r e e C a
么+
i n P e r i t o n e a l M a c r o Ph a g e s F r o m Mi e e
C 、 1 1 R o n g f e n , L i n X i u z ll e n
.
2 2 4
.
E f f e e t o f E m o d in ( E M o ) o n f r e e i n t r a e e l l u l a r C a
Z +
( 〔C a Z 十 〕 i ) i n P e r i t o n e a l m a e r o P h a g e s
o f m ie e w a s m e a s u r e d w i t h e a
Z 十 s。 , 1 5 ; t i v o f l o o r e s e o n t i n d i e a t o r F u r i 一 2 / A m q u a n t i t a t i v e l y .
R
e s u l t s s h o w e d t h a t i n t h e r e s t i n g
、 〔 C 压 2 ’ 〕 1 l e v e l i n t h e P e r i t o n e 王 l m 飞 e r o P h a g e s w a s 1 9 5 . 5 6士
刁` . s Z n m o l / L ( n = 1 1 ) i n C a Z ` f r e e H , n k , 5 s o l u t io n
.
A f t e r a d d i n g 0
.
7 5
, 1
.
7 5 a n d 2
.
7 5 m m o l / L
C a C I
: t o m a e r o p h a g e s s u s p e n s i o n s e l u e n t i a l l y
, t h e f r e e 〔C a ” 〕1 l e v e l s w e r e o b v i o u s l y h i g h e r
a 5 e o m P a r e d w i t h t h a t o f t h e r e s t i n g l e v e l ( P < 0
.
0 1 )
.
W h
e n t h e m
a e r o P h a g e s w e r e P r e t r e a t
-
e d w i r h a d e q u a t e d o s , 5 o f E M D f o r 1 0 m i n
,
i n r h e r e s t i n g o r u s i n g t h e a b o v e d o s e s o f C a
-
C I
: , t h e 〔 C a Z 十〕 1 w a s s i g n i f i e , n t l y i n e r e a s e d a s e o m P a r e d w i t h t h e e o n t r c l g r o u P s ( P < 0 . 0 1 ) .
T h e P r e s e n t i n v e s : i g l t i o n i n d i e a t e d t h a t E M D e l n n o t o n l y P r o m o t e t h e r e l e a s e o f i n t r a e e
-
l u l a r C a
Z 十
b u t a l s J t h e i n f l u x o f e x t r a e e l l u l a r C a
“ 十 。
F u r r h e r m o r e t h e e f f e e t o f E M D o n
〔 C Z + 〕 1 15 d o s e d e P e n d e n t 。
( o r i g i n a l a r t i e l e o n P a g e 1 9 9 )
S t u d i e s o n R e s o u r c e U t i l i z a t i o n o f C h i n e s e D r u g
D w a r f L Ily t u r f ( O p人i o p o 夕o o j 。 p o 。￡e u s )
Y u B o y a n g
,
X u G u o j
u n
、
M a i d o n g
l,
( R a d i戈 O P h i o P o g o 。 : s ) , 15 a t r a d i t i o n a l C h i n e s : d r u g
.
C h i n e s e P h a r m 之 c e P o e i a
( 19 9 0 ) r e e o r d e d t h a t t h e b o t a n i e a l o r i g i n o f
”
M a i d o n g
l
15 O p 八丁o p o g o ” j a p o ” ` c “ s ( L . f . ) k e r -
G a w l
.
( L f l i a e e a e )
.
A r e e o n t s u r v e y o f d r u g r e s o u r e e s i n Zh e j i
a n g
,
S i c h u a n
,
H
u
b
e i
,
!注u n a n ,
Y u n n a n
,
G u i z h o u
,
j i a n g s u
,
A n h u i a n d F u j i
a n P r o v i n e e s s h o w e d t h a t P l a n t s u n d o r t h e g e n
-
e r a l n a m e
”
M
a i d o n g
l,
i n v o l v e 2 6 s p o e i e s a n d v a r i e t i e s r r o m G e n
.
O 夕人10户。夕 0 0 t o G e n . L i r i o广e .
A m o n g t h e s e
,
1 6 s P e e i e s a n 通 v a r i e t i e s a r e u s e d a s 、 M a i d o n g l, i n e o m m e r e e , t h e m o s t P o P u l a r
b e i n g 0
.
j a P o ” f e 。 s , L
.
: P `e a t a v a r . P r o l i f e r a a n d L . 用“ s e a r s . T h e s t e r o i d s a p o n i n s a n d h o m e i -
s o f l a v o n o i d s e o n t a i n e d i n t h e t u b e r 〕 u s r o o t s o f 1 6 s P e e i e s a n d v a r i e t i e s m e n t i o n e d a b o v e
a w e r e e e m P a r e d o n t h e b a s i s o f H P T L C w i t h 4 5 s t e r o i d s 1 P o n i l l s a n d 5 h o m e i s o f l a v o n o i d s a s
u t h e n t i c s f m P l e s
.
T h e r e s u l t s s :1 o w e d t h a t t h e P l a n t s b e l o n g i n g t o G e n
。
O P h f
o
P
o g o 几 c o n t a -
1 n e i t h e r s t e r o i d s a P o n i n s e o m P o s e d o f r u s e o g : n i n o r d i o s g e n i n
, o r h o m e i s o f l a v o n o i d s ; t h e
P l a n t s b e l o n g i n g t o G e n
.
L i , i o p e e o n t a i n o n l y s t e r o i d s 3 P o n i n s e o m P o s e d o f 2 5 〔 S ) 一 r u s c o g -
e n i n o r y a m j g e n i n
.
I t 1 5 e a s y r o i d e n t i f y t h e v a r i e d s P e e i e s a n d v a r i e t i e s o n T L C
.
T h e P o
-
l y s a e e h a r i d e i n t h e t u b e r o u s r o o t s o f t h e 1 6 s P e e i e s a n d v a r t i e i s w a s d e t e r m i n e d b y v i s i
-
b 1e s P e e t r o P h o t o m e t r y
。
R e s u l t s i n d i e a t e d t h a t t h e P o l y s 压 e e h a r i d e e o n t e n t i n v a r i e d s P e e i e s
15 v e r y d i f f e r e n t
, a n d 15 a l s o d e P e n d e n t o n l o e a t i o n s
, e u l t i v a t e d y e a r s a n d t h e g r a d e o f e r u
-
d e d r u g
。
( o r i g i n a l a r t i e l e o n p a g e 2 0 5 )
P h a r m a e o g n o s t i e a l Id e n t i f i e a t i o n o f L a w n P e n n y w o r t
( H 夕d r o c o t夕 l e s i b t h o r P i o 公d e s )
H
u a n g C h e n g y o n g
,
L u o Z e y u n
, e t a l
T h e b
o t a n i e a l o r i g i n
,
m a e r o s e o P i c 3 1 a n d m i e r o s e o P i e a l e h a r a e t e r i s t i e s a n d P h y s i e a l
i e a l t e s t s f o r t h e i d e n t i f i c a t i o n o f T i a n h u s u i ( H 夕 d r o e o t夕 I e s f b t几o r P ￡P ` d e s L a m . ) a n d
g q i a n ( H
. s f b t h o r P i
o i d s L a m
。
a b a s i s f o r t h e i d e n t i f i c a t i o n
V a t b
j t r a 。人i“ 沉 ( H a n e e ) H a n d 一 M a z z . ) w e r e r e P o r t e d t o
C h e m
·
P o t o n
-
P r o v i d e
o f t h e d r u g a n d r
e v i s笼o n o f t h e d r u g s t a n d a r d 。
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r i琴i n a l a r t i e l e O n P a g e 2 1 1 )