全 文 ：广 西 植 物 Guihaia　Dec．２０１５,３５(６):９３０－９３４　　　　　　　　　　 http://journal．gxzw．gxib．cn　
DOI:１０．１１９３１/guihaia．gxzw２０１４０５０３１
沈薇,石晓峰,宁红霞,等．雪松不同部位中原花青素的含量测定及其清除DPPH自由基的活性[J]．广西植物,２０１５,３５(６):９３０－９３４
ShenW,ShiXF,NingHX,etal．DeterminationofproanthocyanidinsandDPPHradicalscavengingactivityofdiferentpartsfromCedrusdeodara[J]．
Guihaia,２０１５,３５(６):９３０－９３４
雪松不同部位中原花青素的含量测定
及其清除DPPH自由基的活性
沈　薇１,石晓峰１∗,宁红霞２,胡彩香１
(１．甘肃省医学科学研究院,兰州７３００５０;２．甘肃中医学院,兰州７３００００)
摘　要:雪松(Cedrusdeodara)是松科(Pianaceae)雪松属(Cedrus)树种的泛称,为广泛分布于喜马拉雅山脉
的常绿树种,包括雪松(C．deodara)、黎巴嫩雪松(C．libani)、短叶雪松(C．brevifolia)和北非雪松(C．atlanＧ
tica)等.雪松的针叶药用历史悠久,主要化学成分为黄酮类、苯丙素类、有机酸类、三萜类、甾体类、多糖及针
叶胶等,具有抗肿瘤、抗氧化、改善记忆、抗菌及抗病毒等多种功效.为了测定雪松不同部位中原花青素的含
量,并考察其清除DPPH自由基活性的能力,该研究以Fe３＋离子为催化剂,用正丁醇－盐酸法分别测定雪松
松针、花序、小枝、木质部、树皮中原花青素的含量,并对不同部位提取液清除DPPH自由基的能力进行测定.
结果表明:松针、花序、木质部、树皮、小枝中原花青素的含量分别为１２．９３％、１２．９３％、６．４１％、１２．００％、３．３７％,
在质量浓度(以生药计)为０．８mg􀅰mLＧ１时,其对DPPH自由基的清除率均达到或接近９０％.该研究结果提
示雪松各个部位的原花青素含量丰富,其提取液的体外抗氧化活性很高,这为雪松的进一步开发利用提供了
很好的参考价值.
关键词:雪松;原花青素;含量测定;紫外－可见分光光度法;DPPH自由基
中图分类号:R９３１．６,Q９４６　　文献标识码:A　　文章编号:１０００Ｇ３１４２(２０１５)０６Ｇ０９３０Ｇ０５
DeterminationofproanthocyanidinsandDPPH
radicalscavengingactivityofdifferent
partsfromCedrusdeodara
SHENWei１,SHIXiaoＧFeng１∗,NINGHongＧXia２,HUCaiＧXiang１
(１．GansuAcademyofMedicalScience,Lanzhou７３００５０,China;２．GansuCollegeofTCM,Lanzhou７３００００,China)
Abstract:Cedrusdeodara(Pinaceaefamily),whichconsistsofC．deodara,C．libani,C．brevifoliaandC．atlanＧ
tica,isanevergreentreegrowingextensivelyontheslopesoftheHimalayas．ItsleaveswasakindofchinesemediＧ
cineforalonghistory．Itsmainchemicalconstituentsincludeflavonoids,phenylpropanoids,organicacid,triterpenes,
steroids,polysaccharidesleafglueandsoon．ThemajorpharmacologicalactivitiesofpineneedlesofC．deodarainＧ
cludeantitumor,antioxidation,improvingmemory,antibacterialandantivirus,ect．InordertodetermineproanthoＧ
cyanidincontentandDPPHradicalscavengingactivityofdiferentpartsfromC．deodara．Inthisstudy,Fe３＋ionwas
usedforcatalysator,nＧBuOH∶HCl(９５∶５)waschromogenicagentandthedetectionwaveＧlengthswereat５５０nm．
AndthecontentofproanthocyanidinwasdeterminedindifferentpartsfromC．deodarabyultravioletＧvisiblespectroＧ
photometer．AndantioxidantactivityofextractfromdiferentpartsofC．deodarawereinvestigatedbyscavenging
收稿日期:２０１４Ｇ０９Ｇ２１　　修回日期:２０１４Ｇ１２Ｇ０１
基金项目:甘肃省普通中医药科研项目(GZKＧ２０１２Ｇ２９);甘肃省科技支撑计划项目(１２０４FKCA１５２).
作者简介:沈薇(１９７７Ｇ),女,甘肃省酒泉市人,副研究员,研究方向为中药化学及中药质量标准,(EＧmail)shenwei_０１２４＠sina．com.
∗通讯作者:石晓峰,主任药师,教授,硕士生导师,研究方向为天然药物化学,(EＧmail)shixiaofeng２００５＠sina．com.
１,１ＧDiphenylＧ２Ｇpicrylhydrazylfreeradical(DPPH)．Theresultsshowedthatproanthocyanidinscontentindifferent
partsofC．deodarawaspineneedles(１２．９３％),inflorescence(１２．９３％),bark(１２．００％),wood(６．４１％),tender
branchlets(３．３７％)．TheextractfromdiferentpartsofC．deodarahadgoodantioxidantactivity．InacertainconcenＧ
trationscope,therewasastrongpositivecorrelationbetweenthescavengingactivityandtheconcentrations．TheorＧ
derofIC５０wastenderbranchlets＞pineneedles＞wood＞bark＞inflorescence．Exceptforbranchlets,theirDPPH
scavengingactivitieswerearound９０％ whiletheconcentrationoftheextractfromdiferentpartswas０．８mg􀅰mLＧ１．
Theresultsindicatedthattherewerehigherproanthocyanidinscontentandantioxidantactivitiesindiferentpartsof
C．deodara,whichprovidethereferenceoncomprehensivedevelopmentandutilizationofC．deodara．
Keywords:Cedrusdeodara;proanthocyanidin;contentdetermination;ultravioletＧvisiblespectrophotometer;DPPH
freeradical
　　原花青素(proanthocyanidin,PC)是由儿茶素、
表儿茶素及表儿茶素没食子酸酯通过C４~C６或C４
~C８连接而成的不同聚合度的一大类多酚类化合
物的总称(官清等,２０１２).其水溶性好,生物利用度
在９０％以上,是目前发现的最强效抗氧化剂和自由
基清除剂,在体内抗氧化能力是 VE 的５０倍、VC
的２０倍,同时具有较强的抗癌和保护心血管等功能
(张妍等,２０１１).在葡萄籽、松树皮、废弃油菜籽皮、
荔枝皮、蚕豆皮、沙棘籽粕、高粱种皮、黑豆等中含量
均较丰富(张小军等,２００９).
雪松(Cedrusdeodara)是松科(Pianaceae)雪松
属(Cedrus)树种的泛称,又名喜马拉雅雪松、喜马
拉 雅 杉、香 柏.该 属 共 ４ 种,包 括 雪 松 (C．
deodara)、黎巴嫩雪松(C．libani)、短叶雪松(C．
brevifolia)和北非雪松(C．atlantica),具有解痉、
镇痛、抗炎、抗癌、抗菌、抗病毒等多种药理活性(张
军民等,２００９).为开发利用雪松,采用紫外－可见
分光光度法测定了雪松不同部位(松针、花序、小枝、
木质部、树皮)中原花青素的含量;并利用DPPH自
由基清除率来评价雪松各部位的抗氧化能力,为雪
松的多方位开发利用提供了科学依据.
１　材料与方法
１．１材料与试剂
雪松松针、花序、小枝、木质部、树皮,于２０１２年
５月采自兰州市市区,原植物标本经甘肃省医学科
学研究院何福江研究员鉴定为雪松属植物雪松
(Cedrusdeodara).
原花青素对照品(经测定其纯度＞９５％)由成都
曼斯特生物技术有限公司提供;１,１Ｇ二苯基Ｇ２Ｇ苦肼
基自由基(１,１ＧDiphenylＧ２Ｇpicrylhydrazylradical,
DPPH)由 Sigma 公司提供,分析纯抗 坏 血 酸
(VitaminC,VC)由国药集团化学试剂有限公司提
供,其余试剂均为分析纯.
１．２仪器与设备
UVＧ２４０紫外Ｇ可见分光光度计(日本岛津公
司);AE２６０型万分之一电子天平(瑞士 Mettle公
司);CP２２５型十万之一电子天平(德国赛多利斯公
司);B３２００SＧT超声波清洗仪(必能信超声上海有限
公司),快速开盖万能高速粉碎机(上海市晟喜制药
机械有限公司),QLＧ９０１旋涡混合器(海门市麒麟医
药仪器厂).
１．３实验方法
１．３．１雪松不同部位中原花青素含量测定
１．３．１．１对照品溶液和供试品溶液的制备　精密称
取原花青素对照品１２．５mg,置于２５mL容量瓶中,
用９５％乙醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得浓度为
０．５mg􀅰mLＧ１的原花青素对照品储备液.
精密称取雪松松针粉末(２０~４０目筛)１g,加
入４０倍体积的８０％乙醇,超声提取１h,过滤,用少
量８０％乙醇冲洗滤渣,合并滤液和冲洗液,定容至
５０mL容量瓶中,摇匀,然后精密吸取５mL,置５０
mL容量瓶中,用８０％乙醇定容至刻度,即得雪松松
针供试品溶液.
１．３．１．２标准曲线的绘制　分别精密吸取原花青素
对照品储备液０．２５、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０mL于
１０mL容量瓶中,用９５％乙醇溶液定容至刻度,制
成系列浓度的原花青素对照品溶液.精密吸取对照
品溶液１mL至２５mL比色管中,依次加入正丁醇Ｇ
盐酸溶液６mL、２％盐酸硫酸铁铵溶液(NH４Fe
(SO４)２􀅰１２H２O２g,加入２mol/L盐酸溶液１００
mL溶解即得)０．２mL,塞紧塞子,用旋涡混合器混
匀;置沸水浴中加热４０min后,立即取出,用冰水浴
冷却５min,室温放置１５min后,分别测定吸光值.
以含量(X,μg)为横坐标,吸光值(A)为纵坐标,绘
１３９６期　　　　　沈薇等:雪松不同部位中原花青素的含量测定及其清除DPPH自由基的活性
表１　回收率考察结果
Table１　Investigationresultsofrecoveryrate
试验
编号
No．
样品含量
Contentof
sample(μg)
加入量
Addedcontent
(μg)
测得量
Detectedcontent
(μg)
回收率
Recovery
(％)
平均回收率
Averagerecovery
(％)
RSD
(％)
平均回收率
Averagerecovery
(％)
RSD
(％)
１ １２９．３ １００ １００．２４ １００．２４
２ １２９．３ １００ １０２．４０ １０２．４０
３ １２９．３ １００ １０１．５９ １０１．５９
４ １２９．３ １３０ １３８．３５ １０６．４２
５ １２９．３ １３０ １３５．３８ １０４．１４
６ １２９．３ １３０ １３６．７３ １０５．１７
７ １２９．３ １６０ １６４．５６ １０２．８５
８ １２９．３ １６０ １６５．９２ １０３．７０
９ １２９．３ １６０ １６２．９４ １０１．８４
１０１．４１ １．０８
１０５．２４ １．０９
１０２．８ ０．９１
１０３．５ １．８６
制标准曲线,得到原花青素的线性回归方程为A＝
０．００３X ＋０．０１１,R２＝０．９９７,表明原花青素在２５~
３００μg含量范围内与吸光值呈良好线性关系.
１．３．１．３精密度试验　精密吸取浓度为０．１mg􀅰
mLＧ１的原花青素对照品溶液１．０mL,按“１．３．１．２”
项下方法操作,重复测定６次,测得吸光值分别为
０．３９１、０．３９０、０．３９０、０．３９２、０．３９０、０．３９１,RSD 为
０．２１％,表明该仪器的精密度良好.
１．３．１．４稳定性试验　精密吸取雪松松针供试品溶
液１．０mL,按“１．３．１．２”项下方法操作,于０、５、１０、
１５、２０min测定,测得吸光值分别为０．７４６、０．７４３、
０．７４９、０．７４６、０．７４４,RSD为０．３％,表明供试品溶液
在反应完毕放置室温后２０min内稳定.
１．３．１．５重复性试验　精密称定雪松松针粉末６份,
每份１g,先按“１．３．１．１”项下的方法操作制备供试
品溶液,然后精密吸取以上供试品溶液各１．０mL,
按“１．３．１．２”项下的方法操作,测定吸光值,并计算
含量,结果原花青素的平均含量为１２９．３mg􀅰gＧ１,
RSD为３．０４％,表明本方法重复性良好.
１．３．１．６加样回收率试验　精密吸取雪松松针供试
品溶液０．５mL,共９份,按样品含量的８０％、１００％、
１２０％分别加入原花青素对照品溶液(０．５ mg􀅰
mLＧ１)０．２０、０．２６、０．３２mL,依“１．３．１．２”项下的方法
测定吸光值,并计算平均回收率和RSD值.结果原
花青素的平均回收率为１０３．５％,RSD为１．８６％.
１．３．１．７雪松不同部位中原花青素含量测定　精密
称取雪松的松针、花序、木质部、树皮、小枝各１g,按
“１．３．１．１”项下的方法操作制备供试品溶液,然后精
密吸取以上供试品溶液各１．０mL,按“１．３．１．２”项下
的方法操作,测定吸光值,并计算含量.
１．３．２雪松不同部位提取液对DPPH自由基的清除
活性测定　采用贾冬英等(２００７)的方法,准确移取
雪松不同部位制备的供试品溶液配制成不同浓度的
溶液,然后分别精密吸取上述溶液１mL及 VC对
照品溶液１mL于１０mL比色管中,分别加入２mL
DPPH自由基溶液(浓度为８０mg􀅰LＧ１的乙醇溶
液),用８０％乙醇定容至５mL,充分混匀,室温避光
反应３０min后,采用分光光度计在５１７nm下测定
其吸光值A１(以体积分数８０％乙醇溶液为参比);
同时吸取２mLDPPH 自由基溶液,８０％乙醇定容
至５mL,同法操作测定吸光值A０,平行测定３次,
取其平均值后根据以下公式计算清除率.
清除率(％)＝(A０－A１)×１００/A０
以雪松不同部位提取液对DPPH 自由基清除
率为纵坐标(Y),雪松不同部位提取液的质量浓度
为横坐标 (X,mg􀅰mLＧ１),建立线性回归方程,计
算其清除自由基５０％ 的质量浓度(IC５０值).
２　结果与分析
２．１雪松不同部位中原花青素含量
按照本试验方法测定雪松不同部位中原花青素
含量结果见表２.由表２可知,雪松不同部位中均
含有原花青素,其含量分别为松针(１２．９３％)、花序
(１２．９３％)、树皮(１２．００％)、木质部(６．４１％)、小枝
(３．３７％),均可作为原花青素的资源开发利用.
２．２雪松不同部位提取液对DPPH自由基的清除活性
２．２．１雪松不同部位提取液对DPPH自由基的清除
率　DPPH是一种稳定的自由基,其乙醇溶液呈紫
色.当DPPH自由基溶液中加入自由基清除剂时,
２３９ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３５卷
表２　雪松不同部位中原花青素的含量测定结果
Table２　Contentofproanthocyanidinfromdifferent
partsofCedrusdeodara
序号
No．
原花青素含量 (％)
Contentofproanthocyanidin
松针
Pine
needles
花序
IinfloreＧ
scence
木质部
Bark
树皮
Wood
小枝
Tender
branchlets
１ １３．０４ １２．８８ ６．３６ １２．０６ ３．２９
２ １２．９０ １３．０１ ６．４０ １１．９４ ３．４１
３ １２．８６ １２．９１ ６．４７ １２．０１ ３．４０
平均含量(％)
Averagecontent
１２．９３ １２．９３ ６．４１ １２．００ ３．３７
在最大吸收波长５１７nm处测得的吸光度降低,下
降幅度与自由基的清除率呈线性关系.因此,可以
通过检测自由基的清除率来评价活性物质的抗氧化
能力.
雪松不同部位提取液对DPPH 自由基的清除
率见图１.图１显示,雪松不同部位原花青素提取
液均具有清除DPPH自由基的能力,且随着提取液
浓度的增加,其对DPPH自由基的清除能力逐渐增
强,说明雪松不同部位提取液对DPPH自由基的清
除能力与其浓度存在明显的剂量－效应关系.除小
枝外,花序、树皮、木质部、松针提取液对DPPH 自
由基的清除率在生药质量浓度(以生药计)为０．１
mg􀅰mLＧ１时都在１５％以上;当质量浓度(以生药
计)达到０．８mg􀅰mLＧ１时,都接近或者超过９０％,说
明雪松花序、树皮、木质部、松针均具有非常好的抗
氧化活性.
图１　雪松不同部位提取液对DPPH自由基的清除能力
Fig．１　DPPHFreeradicalscavengingactivityofextract
fromdiferentpartsofCedrusdeodara
２．２．２雪松不同部位提取液对DPPH自由基的半数
清除浓度(IC５０)　半数清除浓度(IC５０)被普遍采用
作为评价抗氧化剂能力强弱的指标,IC５０值越小,其
自由基清除活力越大.本试验以抗坏血酸(VC)为
对照药品,以清除率为纵坐标,质量浓度为横坐标,
建立的线性回归方程和计算得到的IC５０值见表３.
由表３可知,雪松不同部位提取液均具有良好的抗
氧化活性,其抗氧化活性强弱依次为花序＞树皮＞
木质部＞松针＞小枝;雪松花序、木质部、树皮的
IC５０值与李丹等(２０１０)测得的葡萄汁清除DPPH自
由基的IC５０值(０．３mg􀅰mLＧ１)接近,其中花序的
IC５０值为０．２５８mg􀅰mLＧ１,是各部位中的最小值,但
仍只达到对照药品抗坏血酸(VC)的１/２０,究其原
因是本试验所有质量浓度均以生药计,而对照药品
抗坏血酸(VC)纯度大于９９％.
表３　雪松不同部位提取液清除DPPH自由基的IC５０值
Table３　IC５０onDPPHscavengingactivityofextract
fromdifferentpartsofCedrusdeodara
部位
Part
回归方程
Equation R
２ IC５０
松针
Pineneedles
Y＝１５tion１．５３X＋０．１６３８ ０．９８９ ０．３２９
花序
Inflorescence
Y＝１６１．１７X＋８．４０８６ ０．９９７ ０．２５８
木质部
Bark
Y＝１２６．３６X＋１３．６５１ ０．９６５ ０．２８９
树皮
Wood
Y＝２００．８５X－２．６５９６ ０．９８４ ０．２６２
小枝
Tenderranchlets
Y＝１０３．４１X＋０．１２１９ ０．９７４ ０．４８２
VC对照
Contract
Y＝３５８０X－０．７７５ ０．９９３ ０．０１４
３　讨论与结论
本文以正丁醇和盐酸为反应介质,Fe３＋金属离
子为催化剂,在加热条件下,使原花青素水解形成在
５５０nm处有最大吸收峰的红色花青素,用分光光度
法测定了雪松不同部位原花青素的含量,所建立的
方法重复性好、精密度高,平均回收率为１０３．５％,
RSD为１．８６％,操作较为简便,结果可靠,可以作为
原花青素含量的测定方法.
为提高原花青素的提取率,笔者分别选用
３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％乙
醇,作为提取溶剂,显色后测定吸光值,实验结果表
明,８０％的乙醇水溶液对雪松中原花青素的提取效
果最好.
雪松不同部位中均含有原花青素,其含量分别
为松针(１２．９３％)、花序(１２．９３％)、树皮(１２．００％)、
木质部(６．４１％)、小枝(３．３７％);雪松不同部位提取
３３９６期　　　　　沈薇等:雪松不同部位中原花青素的含量测定及其清除DPPH自由基的活性
液对DPPH自由基的清除能力与其浓度存在明显
的剂量－效应关系,半数清除浓度(IC５０)的顺序依
次为小枝＞松针＞木质部＞树皮＞花序;当雪松花
序、树皮、木质部、松针质量浓度达到０．８mg􀅰mLＧ１
时,其对DPPH 自由基的清除率都接近或者超过
９０％.雪松不同部位抗氧化活性的顺序与其原花青
素的含量大小不一致,也说明其抗氧化作用由多种
物质参与.
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(上接第７８１页Continuefrompage７８１)
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