全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 28(6)：851— 855 2008年 11月
鄂尔多斯半日花提取物的杀线虫作用
田 蕾，,i-0 强
(天津师范大学 化学与生命科学学院，天津 300074)
摘 要：为全面了解濒危植物半日花的价值，测定并比较半日花不同浓度的 6种提取物药液对松材线虫的生
物活性 ，选出有较强杀线虫活性的甲醇、乙醇及水提取物，系统研究 了提取物种类、浓度和处理时间对松材线
虫死亡率的影响。三因素方差分析表明，提取物种类(A)、处理浓度(B)和处理时间(C)，三因素的互作效应
(A×BXc)和双因素互作效应(AXB、AXC、B×c)对线虫的校正死亡率都有极显著影响。最佳药液处理为：
水提取物在6 mg·L0浓度时与 1 d的作用组合和乙醇提取物在 3 mg·L-1浓度时与 5 d的组合，以上两种组合
的校正死亡率均达到 IO0 。比较水、乙醇提取物 5 d中的LC5o值，确定水是提取活性物质的首选溶剂。
关键词：鄂尔多斯半日花；松材线虫；三因素分析；最佳处理组合；LC5o
中图分类号 ：Q946．88 文献标识码：A 文章编号 ：1000—3142(2008)06—0851—05
Nematicidal activity of extracts of Helianthemum
ordosicum against B p Z xylophilus
TIAN Lei，LIU Qiang
(Colege ofchemistry and Li Science，Tianjin Normal University，Tianjin 300074，China)
Abstract：To found out the value of Helianthemum ordosicu优，the biological activities of six kinds of extract on dif-
ferent concentrations were determined and compared．And the carbinol，ethanol and water extracts which have strong
nematicidal activity were selected from those extracts．The influences of extract types，treatment concentrations and
treatment time on Bursaphelenchus xylophilus were investigated．Variance analysis of three factors showed Helian—
them“优 ordosicum’S corrected mortality was extremely influenced by type(A)，treatment concentration(B)and
treatment time(C)，interaction effect of three factors(AXBXC)and interaction effects between factors(A×B，A×
C，B X C)had the same effect．The optimal treatment combinations were solved：one was the water extract 6 mg·
L- on the 1st day；the other was ethanol extract 3 mg·L-1 on the 5th day，the Helianthemum ordosicum’8 correc—
ted mortalities of the above two combinations were al 1 00％．The water and carbinol extract’S LC5o in 5 days were
compared，and the nematocidal activity of water extract were significantly stronger than others．
Key words：Helianthemum ordosicum；B“rsn ^Z c s xylophilus；analysis of three factors~the optimal treatment
combination；LC5o
鄂尔多斯半 日花 (Helianthemum ordosicum)
属半日花科(Cistaceae)半 日花属的矮小灌木，分布
于内蒙古西部鄂尔多斯高原海拔 1 000～l 300 m
的石砾质山麓上，为西鄂尔多斯荒漠特有种，属国家
二级濒危植物(傅立国，1992)。近年来许多学者对
半日花进行了各方面多层次的研究，在生物活性方
面，有研究表明半日花具有较强的抑菌活性和杀虫
活性(田蕾等，2007；杨文思等，2007)，但尚无有关其
收稿El期：2007—06—16 修回日期 ：2008一O1—26
基金项目：国家自然科学基金(30760018，30060011，30570344)[Supported by the National Natural Science Foundation of China(30760018
30060011，30570344)
作者简介：田蕾(1982一)，女 ，天津市人，硕士研究生，研究方向为保护生物学，(E-mail)tjtianlei@126．com。
通讯作者(Author for correspondence，E—mail：lqtjnu@126．corn)
852 广 西 植 物 28卷
提取物对松材线虫的生物活性的报道。本研究对其
杀线虫活性进行了初步研究，证明该植物中含有活
性较强的杀线虫活性物质。这项研究为从该植物中
研发杀线虫化合物或杀线虫农药的先导化合物奠定
了基础；也为半 日花的保护与科学利用提供了一定
的依据。
1 材料与方法
1．1半日花提取物的提取
半日花植物样品采 自内蒙古乌海市，阴干后用
粉碎机粉碎，过 20目筛，备用。有机溶剂提取物采
用冷浸法。称取半 日花粉末用足量的石油醚、乙酸
乙酯、丙酮、无水乙醇和甲醇浸泡 7 d，用旋转蒸发仪
蒸馏浓缩，得到膏状提取物；水提取物采用蒸煮法。
1．2松材线虫的培养
松材线虫以灰葡萄孢(Botrytis cinerea)培养基
培养。用贝尔曼(Baermann)漏斗法分离收集，用无
菌水冲洗 2次后配成 10 000条／mL线虫液备用。
1．3杀线虫活性测定
采用触杀法测定植物提取物对松材线虫的毒杀
作用。将药液和线虫液加入 24孔细胞培养板中，每
隔 24 h在解剖镜下检查每孔中线虫死亡数量。水
提取物用蒸馏水稀释成不同浓度的溶液。有机溶剂
提取物先用丙酮溶解，后用蒸馏水稀释，使丙酮在溶
液中的含量低于 5 ；对照组为相应体积比的溶液。
每组数据重复4次。
校正死亡率(0,4)=
盟 蒹翥 X 10 对照组的生存率
1．4数据统计分析
用 SPSS程序进行方差分析和 LSD多重比较，
线虫校正死亡率均经反正弦变换。根据预实验设置
7～11个浓度梯度，用 SPSS程序求取 LC
2 结果与分析
2．1半日花不同溶剂提取物的杀线虫活性
6种提取物在 6 g·L- 浓度时对松材线虫的毒
杀作用如图 1所示。水提取物杀线虫效果最好，5 d
中校正死亡率均达到 100 。元水乙醇提取物的杀
线虫效果次之，前 3 d的校正死亡率在 3O ～5O
之间，后 2 d则接近 100 。甲醇提取物前 2 d的杀
线率较低，后 3 d杀线活性增强，杀线率都增至 5O
以上。乙酸乙酯提取物在前 4 d杀虫活性都很小，
到第 5天其杀线虫率突然急剧增强至 94．17 ，推
测此提取物的杀线虫作用缓慢，有延迟现象。丙酮
和石油醚提取物的杀线虫效果都很差，5 d中杀线
率都在 1O 以下。6种提取物中，水、乙醇、甲醇及
乙酸乙酯提取物都有明显的杀线虫活性。
琶 1 D0
= 80
呈 60
40
20
表 l 提取物种类处理浓度和处理时间对松材
线虫校正死亡率的方差分析结果
Table 1 Variance analysis of different extracts，
concentration and days against B．xylophilus
处 理 Treatment
校正死亡率 Adjust mortality
F Sig．
2．2．2提取物种类在不同时间对松材线虫毒杀作用
的多重比较 提取物种类在不同时间下对松材线虫
6期 田蕾等：鄂尔多斯半日花提取物的杀线虫作用 853
的毒杀作用，结果见表 2。水提取物在前 3 d中对线
虫的毒杀作用均强于甲醇和乙醇提取物，而在第 4、
5天中乙醇提取物的毒杀效果显著强于水和甲醇提
取物。
表 2 提取物种类处理时间对松材线虫
毒杀作用的多重比较结果
Table 2 Multiple comparisons of different extracts
against B．xylophilus in different days
注：表内数据为 4次重复平均值，同列数据后标有相同字母者表
示在5 水平差异不显著。以下各表同。
Note：Data are means of four replications．Little letters which folbw
the data mean significant difference at P一 0．05．The sanle bdow．
2．2．3药液浓度在不 同时间对松材线 虫影响的多重
比较 比较不同时间下药液浓度对线虫死亡率的影
响，见表 3。除第 5天 中 0．5 mg·L 和 2 mg·L-
处理的线虫校正死亡率高于其他各浓度外，其余各
天中线虫的校正死亡率基本上是随药液浓度的增加
而增加，但各浓度间的死亡率差异并不显著。
2．3提取物种类、浓度及处理时间对线虫毒杀作用
的最佳处理组合
为了选出不同时间下杀线虫最适宜的提取物处
理组合，对每天中提取物种类和浓度对线虫的校正
死亡率进行了多重比较，结果如表 4。由表 4可知，
最佳的药液处理组合分别为：水提取物在 6 mg·
L 浓度时与 1 d的作用组合最佳；乙醇提取物在 3
mg·L 浓度时与5 d的组合也为最佳，以上两种组
合的校正死亡率均达到 i00 。
2．4水和乙醇提取物的LC 。值
求得杀线虫效果最好的水提取物和无水乙醇提
取物 5 d中的LC 。值，水提取物的LC。值依次为
表 3 处理浓度在不同时间对松材线虫
死亡率的多重比较结果
Table 3 Comparisons of different concentration
against B．xylophilus in different days
1．21 g·L- 、1．26 g·L 、1．30 g·L 、1．69 g·L 和
1．82 g·L ；乙醇提取物的LG。分别为 6．98 g·L- 、
6。26 g·L- 、8．28 g·L- 、2．91 g·L- 和 2．82 g·L- 。
各天中水提取物的数值均显著低于乙醇，进一步说
明鄂尔多斯半 日花水提取物中杀线虫活性物质的含
量或者活性是最强的。
3 结论与讨论
(1)从实验结果可看出，在 6种提取物中，极性
较强的水、甲醇、乙醇和乙酸乙酯提取物表现出较强
854 广 西 植 物 28卷
表 4 提取物种类及其浓度处理不同时间对松材线虫毒力的多重比较结果
Table 4 Comparisons of different extracts，concentrations and days against B．xylophilus
理 Ex tract
皴
ants and
度
处理时间 ～ ⋯
及其浓度 校
Ad
正
ju
死
st
亡
m
率
ort
(
a
s
li
E)
ty
Extractants and 处 时间 ： ．、 ●
眦 ( ) 。o
，
ncentratio
、
n。 “ ⋯ Ti e(d) co
，
ncentratio
、
n。 ( )
(mg·L-1) ⋯ (mg·L-1) ⋯
1 水 Water 0．5 18．6士1．4ef 3 甲醇 Methanol 2．5 28．4士4．2ode
1 35．7士2．6de 3 13．4土 1．3de
1．5 59．5士7．5cd 6 55．1士3．5bc
2 87．2士5．2bc 乙醇 Ethanol 0．5 14．7士0．8de
2．5 92．1士11．7b 1 13．8士2．1de
3 64．4土15．3cd 1．5 2O．2士2．7de
6 100士1．3a 2 16．4士4．3de
甲醇 Methano1 0．5 1．24土1．7f 2．5 19．8土1．7de
1 1．75士7．6f 3 23．8士2．5de
1．5 4．7士 2．1ef 6 37．8土 3．5cde
2 4．6士1．3ef 4 水 Water 0．5 10．0士4．6e
2．5 4．5士1．6ef 1 —1．6士9．7e
3 21．6士 2．7ef 1．5 17．2士3．5cde
6 5．3士1．1ef 2 53．8士7．1abcde
乙醇 Ethano1 0．5 1．0士1．1f 2．5 33．1士6．2cde
1 5．1士1．6el 3 94．3士15．3ab
1．5 8．3士4．3ef 6 1O0士1．Oa
2 5．0士2．6el 甲醇 Methanol 0．5 7．89士4．6de
2．5 7．5士1．2ef 1 1．5士0．6e
3 19．1士1．5e{ 1．5 7．3士1．4de
6 37．3士1．6de 2 12．3士2．6cde
2 水 W ater 0．5 —6．2士2．5d 2．5 13．6士3．2cde
1 31．8士1．8bed 3 9．9士1．6de
1．5 65．8士3．8b 6 84．2土5．2abode
2 99．1土3．8a 乙醇 Ethanol 0．5 32．8土7．3bcde
2．5 91．1士9．6bcd 1 67．3士8．5abcde
3 87．9士7．4cd 1．5 82．5士4．0abcde
6 100土1．3cd 2 81．4土8．1abede
甲醇 Methanol 0．5 0．3土1．0cd 2．5 92．6±13．2abed
1 —0．5士5．7cd 3 94．4士11．6abe
1．5 2．8土2．4cd 6 97．9土10．9ab
2 —1．0土6．4cd 5 水 Water 0．5 18．9士9．Ode
2。5 —0。5士8．7cd 1 —5．8士11，5e
3 31．4士5．3cd 1．5 —7．6士21．5e
6 3．7±1．6cd 2 44．5士2．5cd
乙醇 Ethanol 0．5 5．7士2．1cd 2．5 22．1±5．5de
1 8．8±5．1cd 3 83．3士9．6abe
1．5 12．0士3．7bcd 6 100士3．7a
2 1O．2士1．3bed 甲醇 Methano1 0．5 21．8士3．5de
2．5 1O．7士1．7bcd 1 11．8士2．6de
3 15．9士0．8bcd 1．5 42．0土8．5cd
6 50．o士 o．9bc 2 59．8± 6．9abcd
3 水 Water 0．5 14．7士3．2de 2．5 50．0士3．6cd
1 27．0土1．4de 3 53．4士2．6bed
1．5 67．3士5．7bc 6 92．4±3．8abc
2 89．1±3．2b 乙醇 Ethano1 0．5 94．6士8．1abe
2．5 6O．1士 1．3bcd 1 93．3土 13．9abc
3 93．0土11．3bc 1．5 93．9士6．8abc
6 100±0．8b 2 97．3±5．7abc
甲醇 Methanol 0．5 3．2士5．3e 2．5 99．4土3．6ab
1 6．9±0．5e 3 100士3．5a
1．5 6．9士0．3e 6 100±2．1a
2 5．2土1．1e
6期 田蕾等：鄂尔多斯半日花提取物的杀线虫作用 855
的杀线虫活性，而石油醚及丙酮提取物的杀线活性
较弱。说明鄂尔多斯半日花的杀线虫活性成分主要
分布于这个极性范围内，而且以极性最强水溶性的
活性最强。(2)本文充分考虑了提取物种类(A)、浓
度(B)和处理时间(C)以及三因素的互作效应(AXB
×C)和双因素互作效应(A×B、AX C、B×C)对线虫
校正死亡率的显著影响，选出两个最佳的药液处理组
合：水提取物在 6 mg·L- 浓度时与 1 d的作用组合、
乙醇提取物在 3 mg·L- 浓度时与 5 d的组合。
参考文献 ：
吴文君，刘慧霞，朱 靖博 ，等．1998．天然产 物杀虫剂——原 理
· 方法 ·实践[ ．西安：陕西科学技术出版社：338
郭郛，忻介六．1998．昆虫实验方法[M]．北京：科学出版社：
184— 194
傅立国．1992．中国植物红皮书——稀有濒危植物[M]．北京：
科学出版社 ：2—18
Chandravadana MV，Eugene S．1996．Nematicidal activity of some
plant extracts[J]．Nematol，26：148—151
Li DP(李 典鹏 )，Liu JL(刘 金 磊)，Chen HS(陈海 珊)，et a1．
2007．Bioactivity of extract from Heynea trijuga against Pieris
rapn larvae(海木提取物对菜青虫幼虫的生物活性)[J]．
Guihaia(广西植物)，27(3)：453—456
Nonogaki H，Gee 0H，Bradford KJ．20o0．A germination-specific
end B．mannanase gene is expressed in the micropylar endo
sperm cap of tomato seeds[il1．PlantPhysiol，123：1 235—1 246
Suresh Walia．2003．An efficient method for the purification and
characterization of nematicidal azadirachtins A，B and H using
Ⅳ LC and ESIMS[-J]．Agric Food Chem，51：3 966—3 972
Tiara L(田蕾)，Yang J(杨静)，Liu Q(刘强)，2007．On fungistasis
of the extracts from Helianthemum ordosicum for pathogenic
germs of plants(鄂尔多斯半 日花提取物对 4种植物病原菌 的
抑菌性)[J]．J n口 in Norm Univ(NatSci Edi)(天津师范大
学学报 ·自然科学版)，27：32—38
Yang WS(杨文思)，Tian L(田蕾)，Liu Q(刘强)．2007．The tox
icity of the water extract from Helianthemum ordosicum against
Plutellaxylostella(鄂尔多斯半 日花水煮膏对小菜蛾 的毒杀
作用)口]．J Mongolia Norm Univ(内蒙古师范大学学报)，36：
202——204
Zeng XR(曾宪儒)，Chen HS(陈海珊)，Liu Y(刘演)，eta1．2005．
Insecticidal activity of wild Meliaeeae plant extracts from Guan。
gxi on the Lipaphis erysimi Kaltenbaeh(广西野生楝科植物提
取物对萝 b蚜的杀虫作用初步研究)[J]．Cmihaia(广西植
物)，25(5)：494-496
(上接第 822页 Continue from page 822)
Pan Q(潘琦)，Chen SY(陈绍瑗 )，Jiang wM(姜 维梅)，et a1．
2006．Study on the podophylotoxin in the Dysos~a versipellis
and its calus’materials(／＼角莲的愈伤组织和组培根及野生根
状茎的鬼臼毒索含量比较研究)[J]．J Zh~iang Univ(浙江大
学学报)，32(1)：56—59
Qin JM(秦佳梅)，Zhang WD(张卫 东)，Zhao SW(赵书巍)．
2006．Study on dormancy mechanism and handing technique of
seed of Senecio cannabiJblius(返魂草种子休眠机理及处理技
术研究)[J]．Seed(种子)，25(2)：4—5，9
Qiu HX(邱 荷 香 )，Qiu YX，(邱 英 雄 )．2002．Advances in
kesearch on the endemic and endangered plant of Dysosma in
China and its exploitation prospects(中国特有濒危植物八角莲
的研究进展及其开发前景)[J]．J Anqing Teachers Coll(安庆
师范学 院学报)，8(4)：91—93
Shang MY(尚明英)，Xu LS(徐 路珊)，LiP(李萍)，et a1．2002．
Study on pharmacodynamics of Chinese herbal drug Guijiu and
its ligna(鬼臼类中药及其木脂素类成分的药效学研究)[J]．
C^ n Trad Herb Drugs(中草药)，33(8)：722—724
Toshio M，Masaru M，Kazutaka I．1998．Production of podophyl—
lotoxin in Juniperus chinensis calus culture treated with oligo—
saecharids and biogenetic precursor[J]．Phytochemistry，49(2)：
491— 496
Yang HL(杨慧玲)，Liu JQ(刘建全)．2005．Seed germination of
Swertia mussoti，an important application in tibetan folk medicin
(重要藏药川西獐牙菜种子萌发的研究)[J]．Acta Bot Yunnan
(云南植物研究)，27(3)：295—300
Yao LY(姚莉韵)，Wang LP(王丽平)．1999．Isolation of effective
constituents from the hydrophilic fraction of Dysosma Versipellis
and their antivirus effect on CB1—6V and HSV-1 virus(八角莲
水溶性有效成分的分离与抗病毒活性的测定)[J]．Acta Vni—
versitatis Medicinalis Second Shanghai(上海第二医科大学学
报)，16(10)：234—237
Yang QH(杨期和)，Liao FL(寥富林)，Wen XH(温献环)，et a1．
2005．Study on dorm ancy and germination of Areca triandra
seeds(-药槟榔种子休眠与萌发的研究)[J]．Guihaia(广西植
物)，25(6)：549—554