全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 29(6)：863— 865 2009年 11月
达肝清对小鼠免疫性肝损伤的保护作用
周小雷 ，王 硕 ，邓家刚2，范丽丽2，袁经权l
(1．广西壮族 自治区药用植物园 南方药物研究检测中心，南宁 530023；2．广西中医学院，南宁 530001)
摘 要：采用卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)造成免疫性肝损伤动物模型 ，观察达肝清对小鼠血清 ALT、AST
活性及肝组织匀浆 SOD、MDA、GSH—PX水平的影响，并观察肝组织病理学改变。结果表明：达肝清可明显降
低小鼠血清中ALT、AST活性，同时能减少肝匀浆 MDA含量 ，并 能使降低 的肝匀浆 SOD、GSH—PX活性升
高。该实验属首次报道。
关键词 ：达肝清；免疫性肝损伤 ；保肝
中图分类号：Q946文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3142(2009)06-0863—03
Protection 0f Daganqing 0n immunological
l● ● ● n iver ln1m ．v 0tnl0USe
ZHOU Xia()-Lei，Ⅵ NG Shuo，DENG Jia-Gang，
FAN Li—Li，YUAN Jing-Quan
(1．Southern Medicine Research Test Center，Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants，Nanning
530023，China；2．Guangxi Traditional Chinese Medical University，Nanning 530001，China)
Abstract：The models of hepatic damage of immunity were induced by BCG+ LPS．The level of ALT，AST in serum，
the activities of MDA，SOD，GSH—PX in liver homogenate，and the coefficient of liver were assayed．in addition，di—
mensions of hepatic damage in the histopathology were observed． We found that Daganqing could significantly de—
crease the serum transaminase activities and MDA content，and prevent the reduction of SOD，GSH-PX activities in
liver homogenate．These experiments of the article were the first report for Daganqing．
Key words：Daganqing；immunological liver inj ury；hepatopr0tection
肝炎是一种常见的严重危害人类健康的疾病，肝
炎肝损伤的病理生理过程，不仅包括病毒的直接作
用，机体内免疫功能紊乱也起到关键作用，因此调节
肝炎患者异常的免疫功能，将有助于改善病情 ，阻止
向慢性化发展。卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)尾静脉
联合注射制造免疫性肝损伤模型，是探讨肝炎免疫机
制理想 的模型，近 些年 已被广泛 采用 (叶维法等 ，
1997)。达肝清是具广西特色的抗慢性乙型病毒性肝
炎复方之一，由三姐妹等药物组成，有清热解毒、益气
健脾、利湿等作用，对 2215细胞分泌的乙型肝炎病毒
表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒 e抗原(HBeAg)
有抑制作用，对大、小鼠肝损伤具保护作用，临床观察
达肝清对慢性乙型肝炎患者具有保肝降酶、抗乙肝病
毒、提高免疫功能的作用(邓家刚等，2004，2007a，b，
2008)。本研究采用卡介苗(BCG)十脂多糖(LPS)造
成免疫性肝损伤动物模型，观察达肝清对小鼠免疫性
肝损伤的影响 ，为进一步研究抗乙肝病毒药物和其I临
床应用提供实验依据。
1 材料与方法
1．1材料
(1)实验药物：达肝清由三姐妹等药物组成(饮
片由广西中医学院药学院鉴定室蔡毅副教授鉴定)，
收稿日期：2009—06—09 修回日期 ：2009一10—20
基金项目：广西科技攻关项目(桂科攻 0235023一1)；广西科技创新能力与条件建设项 目(桂科能0630006—5A)[Supported by Key Technologies
Research and Development Program of Guangxi(0235023一1)；Scientific and Technological Innovation Capacity and Condition Development
Program of Guangxi(O63。。06—5A)]
作者简介：周小雷(1973一)，男 ，河南邓州人 ，硕士，研究方向为天然药物活性成分研究与新药研发，(E-mail)zhouxiolei123@163．corn。
864 广 西 植 物 29卷
经水提(分 2次提，第一次 lO倍量水 ，第二次 8倍量
水，合并提液，浓缩至比重约 1．05)，醇沉(水提液 ：
95 乙醇==1：2，醇沉 24 h，弃去沉淀，回收乙醇)，
残液浓缩成浸膏(每 l mL相当生药材 4．17 g，低温
贮藏，用时用水稀释)；联苯双酯 ，广州星群(药业)股
份有限公司生产 ，批号 CF40033。(2)动物 ：昆明种
小鼠，体重(24±2)g，雌雄各半 ，清洁级，购于广西医
科大学实验动物中心。(3)试剂：卡介苗(BCG)，中
国生物技术集团公 司上海生物制品研究所生产 ，批
号：2004060501；大肠杆菌脂多糖 (LPS)，Sigma公
司产品 ；谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超
氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过
氧化物酶(GSH—PX)试剂盒均购自南京建成生物工
程研究所。(4)仪器 ：CHEM300半 自动生化分析仪
(德国豪迈克公司)，LGl6 w 离心机(北京医用离心
机厂)，JY92—2D超声波细胞粉碎机(宁波新芝科器
研究院)，Agilent8453紫外可见分光光度计。
1．2方法
(1)动物分组与处理 ：取昆明种小鼠 60只，随机
分组，设空白组、模型组、阳性对照组即联苯双酯组
(600 mg／kg水 溶混悬 液)、药物 高、中、低剂 量组
(17．0、8．5、4．3 g／kg)共 6个组 ，每组 10只。(2)用
药方案：从造模后第 1天起 ，按 0．2 mL／lOg体重分
别用联苯双酯和不同剂量的药物灌 胃，每天 1次，正
常组与模型组每天灌服等体积的水，连续 12 d。(3)
小鼠免疫性肝损伤动物模型的建立：除空白对照组
外，其余 5组小鼠均尾静脉每只注射 0．2 mL卡介
苗(BCG)溶液(用生理盐水配置卡介苗溶液，每 1
mL约含 10。个活菌)，12 d后经尾静脉注射 7 g脂
多糖(LPS)生理盐水溶液 ，空 白对照组 同法尾静等
量的生理盐水，禁食(自由饮水)10 h后各组经眼球
后静脉丛取血，处死小鼠后，取肝脏作有关检测(徐
叔云等，2002；邓家刚等，2006，2007c)。(4)检测指
标及方法：常规分离血清，按试剂盒所述方法用
CHEM300半自动生化分析仪测定血清中谷丙转氨
酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)(赖氏法)。取肝脏约
0．5 g，用冰冷的生理盐水漂洗，除去血液，滤纸拭
干，称重，在冰浴的平皿上剪碎，用生理盐水配 lO％
肝组织，用超声波细胞粉碎机匀浆，低温离心，按试
剂盒说明书所述方法用 Agilent8453紫外可见分光
光度计测定肝匀浆中 SOD、MDA、GSH—PX活性。
另取肝左叶同一部位组织，l0 0,4甲醛固定，按常规方
法制备切片，在光镜下进行病理学检查。(5)统计学
处理 ：各项数据均以±S表示 ，组问差异用 检验。
2 结果
2．1达肝清对免疫性肝损伤小鼠血清转氨酶的影响
模型组血清 ALT、AST水平升高，与空白组相
比较 ，P<0。01，说 明模型建立成功 ；达肝清高、中、
低剂量组均能显著降低小 鼠血清 中升 高的 ALT、
AST活性 ，高、中剂量组与模型组比较 ，P剂量组与模型组 比较，P<0．05；且 高、中剂量组优
于低剂量组，高、中剂量组与低剂量组比较，P<
0．05，高 、中剂量组问无统计学意义 ，P>O．05，其作
用效果与联苯双酯相近，与阳性组比较，P>0．05。
提示：达肝清各给药组对免疫性肝损伤小 鼠肝脏均
有一定的保护作用 ，使血清 中 ALT、AST活性向正
常水平恢复，其中高 、中剂量组作用较佳，明显优于
低剂量组(表 1)
2．2对免疫性肝损伤小 鼠肝匀浆 SOD、MDA、GSH—
PX水平的影响
模型组肝匀浆 MDA水平升高，同时 SOD、
GSH—PX活性降低 ，与空白组比较，P<0．01。达肝
清高、中、低剂量组可以明显降低小鼠肝匀浆 MDA
的水平。均可 以明显升高小 鼠肝匀浆 SOD、GSH—
PX活性，高、中剂量组与模型组比较，P<0．01，低
剂量组与模型组比较，P<0．05，提示：达肝清各给
药组能减少免疫性肝损伤小鼠肝匀浆 MDA含量，
并能使降低的肝匀浆 SOD、GSH—Px活性升高，达
肝清有很好的抗脂质氧化作用，其护肝作用与抗脂
质氧化有关(表 2)。
2．3小鼠肝脏病理组织学检查结果
小 鼠肝组织病理形态学观察结果显示，空白组
肝小叶结构正常，无肿胀 ，无明显水肿 、脂肪变性 ；亦
无坏死 ；肝小叶内及汇管区无炎细胞浸润、无纤维结
缔组织增生(图版 I：A)；与正常组相 比，模型组肝
小叶结构紊乱不清，肝细胞明显肿胀，体积增大，广
泛水肿变性及气球样变性，小区出现肝细胞片状坏
死伴多量炎细胞浸润，汇管区大量炎细胞浸润及明
显纤维结缔组织增生，说明模型建立成功(图版 I：
B)；联苯双酯组和达肝清高、中剂量组均无明显坏
死，高剂量组肝细胞稍有轻微水肿外，大部分肝细胞
结构正常(图版 I：C，D，E)，低剂量组肝细胞仍见肿
胀，大片水肿变性、胞浆疏松，偶见气球样变性，灶性
坏死及炎细胞浸润(图版 I：F)。提示：达肝清对免
6期 周小雷等：达肝清对小鼠免疫性肝损伤的保护作用 865
空 白组 Blank
模型组 Model
联苯双酯组
Bifendate
高剂量组
High—dose
中剂量组
Moderate—dose
1O 一 39．092士 5．950 45．349±8．822 168．708士13．008 8．192士 2．239 227．699士 27．070
1O 一 66．573± 7．477 88．900士 18．123 69．506士 9．838 21．676士 4．904 159．968土 20．636
10 0．6 45．122~8．64911 58．839士9．75011 133．650-1-12．58611 12．146士2．80511 214．455士14．52411
1O 17．0 44．967土5．28511* 64．941士8．89011*114．683~37．52711 14．662士2．35511 187．091士15．23911
10 8．5 47．711±6．69211* 65．583±6．50211* 95．745士 19．69911 14．436土4．61511 183．862士15．16311
低剂量组 1O 4．3 59．423±3．6181~ 71．621土14．25611 84．567士15．0411 14．912土4．8431 177．280土13．947
I OW—dose
与空白组比较：一 Po．05。
图 1 达肝清对小鼠免疫性肝损伤的组织学观察 A．空白对照组(×20)；B．模型组(×20)；C．联苯双脂组(×20)；D．高剂量组
(×2O)；E．中剂量组(×20)；F．剂量组(×20)。
Fig．1 Histological observation of the immunological liver injury in mice treated with Daganqing A．Control group(×
20)；B．Model group(×20)；C．Bifendate group(X 20)；D．High-dose group(×20)；E．Moderate-dose group(×20)； Low-dose group(×20)
疫性肝损伤有保护作用。
3 讨论
免疫性肝损伤动物模型，接近人类肝炎发生的病
理生理过程，是筛选和研究保肝药物较为理想的模型
之一，预先给小鼠注射卡介苗可使多核中粒细胞或巨
噬细胞聚集于肝，继后再用低剂量大肠杆菌脂多糖攻
击注射，可激发这些细胞释放对肝细胞有毒性作用的
多种免疫效应分子(如自由基等)，自由基过度释放，
可导致肝细胞内脂质过氧化反应的发生，造成脂质过
氧化产物的积累而损伤肝细胞，造成免疫性肝损伤
(陈琼仁，1993；Wang等，1995；Zhang等，2002)。
卡介苗(B(、G)与脂多糖(LPS)联用可引起小鼠血
清中 ALT、AST明显升高，肝组织可见散在细胞变性
坏死，说明本实验所建立的免疫性肝损伤模型成功；
该模型肝细胞浆脂质过氧化产物 MDA明显升高 ，表
明肝细胞内脂质过氧化是本模型的重要终末肝损伤
机制，达肝清各剂量组能减轻模型鼠肝脏的病理损
伤；高、中剂量组能使血清中 ALT、AST活性向正常
水平恢复，其作用效果与联苯双酯组相近，明显优于
低剂量组；能降低肝细胞浆 MDA，升高肝损伤小鼠肝
细胞浆内SOD、GSH—Px的活性，可见抗肝细胞内脂
(下转第 787页 Continue on page 787)
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