全 文 ：定测量含
眼一素广 西 植 物 G u i ha ia Z:` 4) : 2 0 5一2 0 8
甜 茶
吴祖祥 孟丽珊 徐位坤
( 广西植物研究所 )
Q U N AT IT AT V IE N A AL Y I S S OF SWE ET EN E R
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( G u a n g x i I n s t i u t e o f B o t a n y )
甜茶 ( R u b u s S u a v i s s im u s 5 . L e e ) 含一种高甜度的甜茶素 , 为斯替维醇 ( S t e v i o l )
和葡萄糖结合而成的二菇试 。
甜叶菊中斯替维贰的含量测定方法有 : 气相色谱法 〔” “ 〕 、薄层— 气谱联合测定法 〔’ 〕 、薄层层离— 分光光度法 一 4 〕 、 薄层扫描测定法 〔 6 〕等 。 甜茶中 , 贰的含量测定尚无人进行过研究 , 本文参照宫崎等人的薄层层离— 分光光度法进行了研究 。 即首先把贰加酸水解为异贰元 ( i s os t e v oi l ) , 再将异贰元和 2 , 4一二硝基苯脐作用制成腺 , 经薄层分离 后 将 色 带洗
脱 , 在久3 62 n m 处测定吸收值 , 计算异贰元的 2 , 4一二硝基苯腺量 , 最后根 据贰 与 共异贰元
2 , 4一二硝基苯腺的克分子比换算成贰的含量 。 此法结果比较稳定 , 全程加样回收率 9 6 . 85 士
1
.
8 9 %
。 现将实验方法及结果报导如下 :
实 验 部 分
( 一 ) 仪器与试剂
u v 一 2 10 A 型紫外分光光度计 , 50 nt l微量注射器 , 95 %乙醇 ( A R ) ;无水乙醇 ( A R ) ,
丙酮 ( A R ) , 氯仿 ( A R ) 。
( 二 ) 异斯替维醇 2 , 4一二硝基苯粽标准品制备
原理 :
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方宏 、 李仲瑶同志参加了此项工作
召0吞
操作 :称取异斯替维醇 16 0二 g置于一个 ] 0o m l的圆底烧瓶中 , 加 2 m l 甲醉使之溶解仁再
称取 2 , 4一二硝基苯胁 80 m g置于另一个 10 0 m l 的圆底烧瓶中 , 加人甲醉 20 m l及 85 %磷 酸 1城 )水浴上加热使之溶解 。 将上面二液混合 , 并在水浴上加热回流反应 1 小时 。 把反应物静童片
刻即有黄色絮状沉淀析出, 滤出沉淀物并在稀乙醇中重结晶 2 次得黄色针状结晶 , 熔点 2香.
~ 2 5 1℃ , 紫外光谱 礁梦工36 n2 m ( 10 9 。 。 . : 8 3 ) 。 以此作为含量测定的标准品 。 -…\ 、 \ 八厂 \//护///
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图 1 异斯替维醇 2 , 4 一二硝基苯踪紫外吸收光谱
( 三 ) 标准曲线的制作 -
精密称取异斯替维醇的 “ , `一二 “肖基苯踪标难一占占1 omg 置于 10 “ m ` 量瓶中 , 并用无水娜溶解 、 稀释至刻度作为标准液 。 ( 每 1 m l 含标准品 。 . l m g ) 准确吸取际准液0 、 2 、 3 、 龚拓
5
、
6
、
7
、
8 m l 分别置于 8 个 50 m l 的量瓶中 , 用无水乙醇稀料至刻 度, 在 久3 62 n m
各 自的吸收度值列于表 1 中 。 将表 1 的数据进行 直线回归 , 得回归方程如下 :
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y一 a 十 b x = 0 . 0 0 2 9 7 + 4 8 . l x
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表 1 拍
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样 品 号 ` i
浓 度 与 吸 收 度 的 变 化 关 系 ,
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丽 一碗 /m” 一… 4 } 6 { 8 ` 。 ` 2吸收度 . y _ 二 } “严 2 …旦· 2 92 2 { 0· 3吧二 ) 。 · ` 82色二 …二 . 只· 5脚 r }, 一 ” 6 7 5 8 7 73 0
. 数据为 5 次重复试验的 j砰均值
2 0 6
从统计一结果看 :相关系数几等于 1, 剩余标准差则几等于零 , 这说明所确立的回归方程
是有意义的 , 精密度是高的 , 可用于含量测定工作 。 图 2 是根据该回归方程制作的标准曲线 。
含量测定时, ( 1) 式可改写为 :
y 一 o · () 0 2 9 7 , 。
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吸
收 ,度 」 · U
/
/
x 一测得的浓度 ( m g / m l ) ;
y 一吸收度值 。
( 四 ) 样品测定
( 1 ) 提取 : 精密称取通过 60 筛 目的干
燥甜茶叶粉 50 Om g 置于 。 . 8 义 4 c m 的滤纸简
中 , 把滤纸筒放进一 2 50 m l 的圆底烧瓶内 ,
同时加人 95 %乙醇 1 50 m l , 装上冷凝管 , 在
水浴上加热回流提取 3 小时 , 再把滤纸筒用
棉线系 _ L挂于冷凝管下继续洗提 2 小时 。 回
收 乙醇得提取物 。 ( 同样作一重复 )
( 2 ) 水解 : 将 ( 1 ) 所得提取物加进
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改 .史 ( 1J `夕n l l )
图 2 标准曲线
10 %硫酸水溶液 ( W /W ) 1 50 m l , 在沸水浴上加热水解 5 小时 , 然后转溶于 1 50 m l氯仿中 。
回收氯仿得水解物 。
( 3 ) 踪化 : 在 ( 2 ) 所得水解物中加 95 %乙醇 50 m 工, 同时加人 2 , 4 一二硝基苯脐试剂
1 m l ( 试剂配制 : 将 2 9 2 , 4一二硝基苯胁加入到 24 m 185 %的磷酸中 , 加热溶解 , 再加 95 %
乙醉 15 m l 稀释 , 过滤备用 ) , 然后在 80 ℃水浴上回流粽化 1 小时 , 回收乙醇得棕化物 。 将
踪化物用丙酮转移至 25 m l容量瓶中 , 并准确稀释到刻度 。
( 4 ) 薄层分离及测定 : 用微量注射器
精密吸取样品的丙酮液 5。时 在 5 x 20 。 m 的
硅胶 G 薄层板 ( 1 0 9硅胶 G 加蒸馏水 30 m l 制板
3 块 , 于 1 1 0℃活化 1 . 5小时备用 )上点成线
状 , 用氯仿 : 甲醉 ( 9 : 1 ) 展开 , 异斯替维
醇的 2 , 4 一二硝基苯脍本身显 鲜 黄色 ( 见图
3)
。 用吸样器吸取样品色带 _ L的硅胶 , 并用
5 m l 无水乙醇洗脱 , 同时在 同一板上没有样
品色带的地方吸取同量硅胶按上法处理作为
参比 , 在 入3 6 2 n m 处 MJl 定吸收度 , 根据公式
( 3 ) 计算含量 。 图 8
y 一 0 。 0 0 2 9 7
x d
甜茶素含量 ( % ) =
0
.
61 9
X 10 .0
· · · · · · · · · · · · · · … … ( 3 )
W— 千叶粉称样量 ( r n g ) , V l— 腺化物丙酮 转溶体积 ( m l ) , V :— 薄层点样休积 ( m 飞) ; y— 吸收度值 , d— 薄层洗脱液稀释倍数 , 0 . 6 19— 为异斯替维醉的 2 , 4一二硝基苯腺与甜茶素的克分子比 。
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· 样品色带 R f = .0 妙
异斯替维醇 4 , 2 一 二
硝基苯膝薄层层析谱
展开剂; C H C I。 : M e O H / 9 : i
刁0 7
(五 )加样回收试验 -
在已知甜茶素含量的一定量甜茶叶粉 中加人甜茶素纯品 o l m g, 依法进行提取 、 分奴测定 , 从测得的甜茶素总量中减去原样品含量以计算加样回收率 。 结果见表 2 。
表 2 甜 茶 素 加 样 回 收 率一…纯一…一 加一
( 六 ) 应用 一
( 1 ) 甜茶叶各生 一长期的甜茶素含量变化 ( 表 3 ) 。 叶子不 同生长发育阶段中甜茶鑫的
含量有着明显的变化 , 嫩叶的含量最高 , 成叶次之 , 落叶最低 。
表 3 甜 茶 叶 不 同 生 长 期 甜 茶 素 含 量
资一洲么井一…一 _ _丫_ 一 _一…汽一一` 2 ) 甜茶叶中甜茶素含量 一与季节的关系 ` 表` , 。 5月底较低 , 6月底开始 一 h升 , 林
8 两月达到最高点 , 9 月底以后开始下降 , 12 月底降到最低值 。
表 4 甜 茶 素 含 量 与 季 节 的 关 系 1 9 8 1年
采 样 时 间 含 量 ( % ) 采 样 时 间 毛
4
.
4 1 含 量 ( % )
6
.
0 4
5 月 2 9日 6 . 4 3 9 月 2 9日 5 . 2 2
6 月 2 9日 6 2 8 1 0月 2 9 日 5 . 1 9
7 月 2 9日 1 1月 2 9 日 4 . 6 4
8 月 2 9日 1 2月 2 9 日 3 . 8 6
( 3 ) 产地对甜茶叶中甜茶素含量的影响 ( 表 5 ) 。 桂南的岑溪 ( 北纬 2 2 “ 4 7 ’ ) 和桂中
的全秀 ( “匕纬 2` 。 0 8 ’ ` ’ 所亡赘茶叶甜茶素的含量相 以`, 而较北的桂林雁山 ( 北纬 2 5 。 。州娜产甜茶叶 ( 栽培 ) 则含量梢低 。 一~ 、
( 下转 2 15 页 )
2 0吕
致谢 :核磁共振谱 、 质谱是中国科学院上海药物研究所测定 。
红外光谱 、 紫外光谱是广西植物研究所测定 , 均表示感谢 。
今 考 文 献
〔 1 〕 邱运平等 , 1 9 5 2 : 广西植物 i ( i ) 4 7一 4 9 .
〔 2 〕 R . C r o h a r e e t a l . , 1 97 4 : P h y t o e h e m , ( 1 3 ) : 1 9 5 7 .
〔 3 〕 朱大元等 , 1 981 : 中草药 ( 1 2 ) : 1一 2 .
〔 4 〕 Z h u D a 一 y t l a n e t a l . , 1 9 8 2 : H e t e r o e y e l e s 1 7 : 3 4 5 .
( 上接 2 0 8 页 )
表 5 产 地 对 甜 茶 素 含 量 的 影 响
含 量 ( % )
桂 林 雁 山
7
.
7 5
样 1 8 . 0 7
样 1 7 . 7 9
6
.
3 5
野生 , 1 9 8 1 , 8 , 1 2 ,
野生 , 1 9 8 1 , s , 1 6 ,
样 1的刺很少。
栽培 , 1 0 5 1 , s , 2 9 ,
采样。
采样。
县溪秀岑金
采样。
结 果 与 讨 论
1
. 本文采用薄层层离 分光光度法测定甜茶中甜茶素的含量 , 方法流程虽较长 , 但
只要控制好实验条件 , 结果还是比较稳定的 。
2
. 甜茶叶子的生长期对甜茶素的含量有较大影响 , 嫩叶含量较高 , 但嫩叶的叶片小而
薄 , 产量低 , 故以采收成叶为好 ; 季节对含量的影响也较大 , 就含量而言 , 则以 6 月 底 到
9 月初采收为宜 ; 雁山栽培的含量较之岑溪 、 金秀二地野生的含量稍低 , 是否由于地区差异
所 引起 , 有待进一步研究 。
参 考 文 献
〔 1 〕 三桥 博等 , 2 9 7 5 : S t e v i a r e b a u d i a n a B e r t o n i 。 栽培研究 S t e v i o s i d e 。 定量卜飞。 U t ,
药学杂志 ( 日 ) , 9 5 ( 1 ) , 1 2 7一 1 3 0
〔 2 〕 坂本征则等 , 1 9 7 5 : S t e v i o s i d e 仍定量法口研究 , 药学杂志 ( 日 ) , 9 5 ( 2 2 ) , 1 5 0 7一 1 5 1 0
〔 3 〕 三桥 博等 , 1 9 7 5 : S t c v i a r e b a u d i a n a B e r t o n i O 栽培研究 S t e v i o s i d e O 定量卜 { 。 匕下,
( 第 2 报 ) , 药学杂志 ( 日 ) , 9 5 ( 1 2 ) , 1 5 0 1一 1 5 0 3
〔 4 〕 宫崎幸男等 , 1 9 7 4 : 久于匕了 ( S t e v i a r e b a u d i a n a B e r t o n i ) O 栽培夕 { 关犷乙研究 , 热带农
业 , 第 1 7卷第 3 一号 , 1 5 8— 1 6 1〔 5 〕 卞咏梅 , 1 9 8 1 : 新甜味植物— 甜叶菊的研究 , 植物生理学通讯 , 3 , 15 一 17
2 1 5