全 文 :第 30卷 第 1期 西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) Vol. 30 No. 1
2002年 2月 Jour. of No rthw est Sci-Tech Univ . o f Ag ri. a nd Fo r. ( Na t. Sci. Ed. ) Feb. 2002
西藏部分地区豆科植物根瘤菌资源的初步调查
王素英 1 ,李润花 2 ,刘新成3 ,李新锁 1
( 1天津商学院 食品与生物工程系 ,天津 300400; 2山西教育学院 生物系 ,山西 太原 030000;
3天津师范大学 化学与生命科学学院 ,天津 300074)
[摘 要 ] 对采自西藏拉萨、林芝和日喀则地区的 10属 18种豆科植物的 282份根瘤样品进行根瘤菌的分离
纯化、菌株的回接和固氮酶活性的测定 ,结果表明 ,这些地区的豆科植物均可自然结瘤 ,其形态比较单一 ,主要为较
规则的球形、柱状和掌状 ,颜色为褐红色、红色、粉红色和白色 ,球形根瘤的大小为H0. 1~ 6. 0 mm ,柱状根瘤的大小
为 1~ 10 mm , 92. 5%的自然根瘤可测到固氮酶活性 ,其活性值为 0. 093~ 12. 403 nmo l /( mg· h) ,可以看出 ,豆科
植物根瘤的大小、颜色和固氮酶的活性与采集地点的生态环境相关。
[关键词 ] 西藏 ;豆科植物 ;根瘤菌 ;固氮状况
[中图分类号 ] S144. 3 [文献标识码 ] A [文章编号 ]1000-2782( 2002) 01-0033-05
西藏自治区位于东经 28°~ 36°,北纬 77°~
103°,面积 120多万 km2。 喜马拉雅山、念青唐古拉
山、冈底斯山、昆仑山及唐古拉山自南而北 ,东西横
亘 ,雅鲁藏布江由西向东流经本区南部 ,澜沧江、怒
江等则由北而南蜿蜒于东南。东南部受印度洋暖湿
气流的影响 ,雨量充沛 ,属热带、亚热带气候。北部和
西北部地势高、面积辽阔、湖泊星罗棋布 ,并有许多
宽谷盆地 ,平均海拔 4 000 m以上 ,雨量稀少 ,气候
寒冷干旱 ,属寒旱化高原气候。如此复杂的地理和气
候条件使西藏自治区的植物种类繁多 ,仅报道的分
布于各种生态环境中的豆科植物已达 51属 236
种 [1 ] ,约占 1981年全世界豆科植物统计数的
10% [2 ]。 而对可与豆科植物共生结瘤的根瘤菌资源
尚未做过调查 ,本课题组根据气候、交通和豆科植物
分布情况 ,于 2000年 8~ 9月对西藏部分地区的 12
个县市进行了根瘤的采集和固氮酶活性的测定 ,为
该区根瘤菌资源的开发利用积累了一些资料。
1 材料与方法
1. 1 调查路线
( 1)朗县—米林—林芝 ; ( 2)拉萨—达孜—墨竹
工卡—工布江达 ; ( 3) 贡嘎—浪卡子—江孜—白朗
—日喀则。
1. 2 根瘤的采集
选择交通比较便利、植被比较茂盛的区域进行
根瘤的挖掘。将采集的根瘤洗净 ,选取个大、新鲜、最
好为红色的根瘤分为 3份: 1份用于固氮酶活性的
测定 , 1份用于根瘤菌的斜面划线初步分离 , 1份装
入灭菌的放有硅胶的小瓶中制成干燥根瘤。
1. 3 固氮酶活性的测定
根据参考文献 [3 ] ,采用乙炔还原法测定。
1. 4 根瘤菌的分离纯化
利用新鲜根瘤和干燥根瘤为材料进行根瘤菌的
分离纯化。以新鲜根瘤为材料的纯化方法是在采集
地点用体积分数为 75%的酒精对根瘤进行表面消
毒后 ,将根瘤捣碎于斜面进行划线分离 ,若不纯 ,在
室内进一步纯化 ;以干燥根瘤为材料的分离纯化方
法见参考文献 [4 ]。
1. 5 菌株的回接
按参考文献 [4]进行。
2 结果和讨论
2. 1 调查结果
2000年 8~ 9月份 ,西藏东南部多雨 ,泥石流泛
滥 ,除拉萨至林芝外 ,其他交通线路堵塞 ;东北部尤
其是海拔 4 500 m以上的高原地带在这一季节开始
降雪 ,仅拉萨至日喀则畅通无阻。因气候和交通的原
因 ,此次采集仅覆盖拉萨地区、林芝地区和日喀则地
区的 12个县市 ,占自治区总面积的 1 /8左右。对这
一区域内的 10属 18种野生豆科植物根瘤进行了挖
[收稿日期 ] 2001-02-23
[基金项目 ] 国家自然科学基金资助项目 ( 39970017)
[作者简介 ] 王素英 ( 1964- ) ,女 ,山西盂县人 ,教授 ,博士 ,主要从事微生物资源与新产品开发研究。
DOI : 10. 13207 /j . cnki . jnwaf u. 2002. 01. 008
掘 ,共获得根瘤样品 282份 ,被调查豆科植物种类的
结瘤率为 100% 。同时在采集过程中发现 ,林芝地区
因属于暖温带气候 ,植被茂盛 ,豆科植物种类较多 ;
拉萨地区属于寒旱化高原 ,植被稀疏 ,豆科植物种类
稀少。此次采集的豆科植物中 ,除二色锦鸡儿为半灌
木外 ,其他均为草本植物 ,且在多数情况下 ,采集地
点一旦发现某种豆科植物 ,则往往成片生长。
2. 2 根瘤的形态特征
豆科植物的根瘤形态较单一 ,主要为较规则的
球形、柱状和掌状。林芝地区的豆科植物根瘤一般成
簇生长在根毛、侧根、主侧根交叉处。拉萨和日喀则
地区的豆科植物根瘤一般成簇着生于根毛 (表 1)。
2. 3 固氮酶活性的测定
固氮酶活性的测定结果见表 1。
表 1 西藏自治区豆科植物的结瘤固氮概况
Table 1 A survey of nodula tion and nitro gen fix a tion o f rhizobia isolated from Tibe t Autonomous Region
寄主名称
Hos ts
采样地点
Sampling si te
地点
Locali ty
海拔 /m
Al ti tude
采样时期
Grow th period
根瘤形态特征
Morph ological characteri-
stics of nodule
形状
Shape
颜色
Colo r
大小 /mm
Size
固氮酶活性 /
(nmol·
mg- 1· h- 1)
Ni t rog enase
activity
紫雀花
Parochetus
communis
林芝
Lin zh i
2 900
盛花期
Blos soming period
球形
Sph erical
红色
Red
2~ 3 2. 831
米林
Milin
2 800
盛花期
Blos soming period
球形
Sph erical
红色
Red
2~ 3 3. 204
达孜
Dazi
3 700
盛花期
Blos soming period
球形
Sph erical
粉红色
Pink
1~ 2 1. 745
贡嘎
Gong ga
3 800
生长期
Grow ing period
球形
Sph erical
粉红色
Pink
1~ 2 0. 970
拉萨
Lasa
3 700
初花期
Init ial fl ow ering period
球形
Sph erical
粉红色
Pink
1~ 2 1. 253
天蓝苜蓿
Medica go
lupal ina
日喀则
Rikaze
3 840
生长期
Grow ing period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
2~ 3 0. 258
江孜
Jiang zi
4 000
生长期
Grow ing period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
3~ 5 0. 404
浪卡子
Lang kazi
3 900
生长期
Grow ing period
掌状
Palmate
浅粉色
Pink
1~ 3
拉萨
Lasa
3 750
初花期
Init ial fl ow ering period
掌状
Palmate
粉色
Pink
4~ 7 0. 763
墨竹工卡
Mo zhugongka
3 800
初花期
Init ial fl ow ering period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
3~ 5 0. 986
达孜
Dazi
3 700
初花期
Init ial fl ow ering period
掌状
Palmate
粉色
Pink
3~ 5 0. 684
米林
Milin
2 800
初荚期
Ini ti al podding period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
3~ 5 1. 287
林芝
Lin zh i
2 900
初荚期
Ini ti al podding period
掌状
Plamate
粉色
Pink
5~ 7 1. 764
窄叶野豌豆
Vicia
an gusti fol ia
日喀则
Rikaze
3 840
生长期
Grow ing period
柱状
Cylinderical
近白色
Wh ite
3~ 4 0. 358
江孜
Jiang zi
4 000
生长期
Grow ing period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
4~ 6 0. 790
浪卡子
Lang kazi
3 890
生长期
Grow ing period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
4~ 6 1. 024
拉萨
Lasa
3 690
盛花期
Blos soming period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
4~ 5 1. 109
墨竹工卡
Mo zhugongka
3 780
盛花期
Blos soming period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
4~ 6 1. 350
达孜
Dazi
3 700
盛花期
Blos soming period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
3~ 4 1. 027
米林
Milin
2 780
花后期
Pos t blossoming period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
4~ 5 1. 903
林芝
Lin zh i
2 910
花后期
Pos t blossoming period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
4~ 5 2. 034
工布江达
Gong bujiangda
3 100
盛花期
Blos soming period
柱状
Cylinderical
粉色
Pink
4~ 6 2. 007
山野豌豆
Vicia
amoena
林芝
Lin zh i
2 910
初花期
Init ial fl ow ering period
掌状
Palmate
红色
Red
5~ 7 1. 957
米林
Milin
2 780
初花期
Init ial fl ow ering period
掌状
Palmate
红色
Red
5~ 7 2. 309
朗县
Liangxian
2 600
花后期
Pos t blossoming period
柱状
Cylinderical
红色
Red
4~ 7 2. 570
工布江达
Gong bujiangda
3 100
生长期
Grow ing period
柱状
Cylinderical
红色
Red
4~ 6 2. 097
34 西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) 第 30卷
续表 1 Continue Table 1
寄主名称
Hos ts
采样地点
Sampling si te
地点
Locali ty
海拔 /m
Al ti tude
采样时期
Grow th period
根瘤形态特征
Morph ological characteri-
stics of nodule
形状
Shape
颜色
Colo r
大小 /mm
Size
固氮酶活性 /
(nmol·
mg- 1· h- 1)
Ni t rog enase
activity
西南野豌豆
Vicia
nummularia
墨竹工卡
Mo zhugongka
3 800
初花期
Init ial fl ow ering period
柱状
Cylinderical
红色
Red
3~ 5 1. 329
林芝
Lin zh i
2 910
盛花期
Blos soming period
掌状
Palmate
红色
Red
5~ 7 2. 451
工布江达
Gong bujiangda
3 000
初花期
Init ial fl ow ering period
掌状
Palmate
红色
Red
4~ 6 1. 793
米林
Milin
2 800
花后期
Pos t blossoming period
掌状
Palmate
红色
Red
4~ 7 2. 569
朗县
Langxian
2 600
花后期
Pos t blossoming period
柱状
Cylinderical
红色
Red
4~ 6 3. 062
毛果葫芦巴
Tr igonella
p ubescens
墨竹工卡
Mo zhugongka
3 810
生长期
Grow ing period
近球形
Sph erical
粉红色
Pink
1~ 2 0. 943
达孜
Dazi
3 750
生长期
Grow ing period
球形
Sph erical
粉红色
Pink
1~ 3 1. 032
工布江达
Gong bujiangda
3 100
生长期
Grow ing period
近球形
Sph erical
粉红色
Pink
2~ 4 1. 320
林芝
Lin zh i
2 900
初花期
Init ial fl ow ering period
球形
Sph erical
红色
Red
2~ 4 1. 574
米林
Milin
2 800
初花期
Init ial fl ow ering period
球形
Sph erical
红色
Red
3~ 4 1. 307
朗县
Langxian
2 750
初花期
Init ial fl ow ering period
球形
Sph erical
红色
Red
3~ 6 1. 870
葫芦巴
Tr igonella
tibetana
浪卡子
Lang kazi
3 900
生长期
Grow ing period
球形
Sph erical
白色
Wh ite
1~ 3 0. 763
江孜
Jiang zi
4 020
生长期
Grow ing period
球形
Sph erical
白色
Wh ite
1~ 3 0. 704
白朗
Bai lang
4 100
生长期
Grow ing period
球形
Sph erical
白色
Wh ite
1~ 3 0. 308
齿荚葫芦巴
Tr igonella e-
mod i
墨竹工卡
Mo zhugongka
3 800
初花期
Init ial fl ow ering period
球形
Sph erical
粉红色
Pink
2~ 3 0. 947
达孜
Dazi
3 750
初花期
Init ial fl ow ering period
球形
Sph erical
粉红色
Pink
1~ 2 1. 205
米林
Milin
2 780
盛花期
Blos soming period
球形
Sph erical
红色
Red
2~ 4 1. 475
林芝
Lin zh i
2 900
盛花期
Blos soming period
球形
Sph erical
红色
Red
2~ 4 2. 032
工布江达
Gong bujiangda
3 050 生长期
Grow ing period
球形
Sph erical
粉红色
Pink
1~ 2 1. 976
朗县
Langxian
2 800
初花期
Init ial fl ow ering period
球形
Sph erical
红色
Red
1~ 3 0. 853
草木樨
Mel ilotus
suaveolens
拉萨
Lasa
3 700
花后期
Pos t blossoming period
柱状
Cylinderical
白色
Wh ite
1~ 2 0. 357
贡嘎
Gong ga
3 800
盛花期
Blos soming period
柱状分叉
Y sh aped
白色
Wh ite
2~ 3 0. 207
江孜
Jiang zi
4 000
盛花期
Blos soming period
柱状
Cylinderical
白色
Wh ite
2~ 4
直立黄芪
Astra galus
adsurgens
日喀则
Rikaze
3 850
初花期
Init ial fl ow ering period
柱状
Cylinderical
白色
Wh ite
2~ 3
拉萨
Lasa
3 700
初荚期
Ini ti al podding period
柱状
Cylinderical
白色
Wh ite
2~ 4 0. 301
贡嘎
Gong ga
3 790
初花期
Init ial fl ow ering period
柱状
Cylinderical
白色
Wh ite
1~ 4 0. 243
江孜
Jiang zi
4 000
盛花期
Blos soming period
柱状
Cylinderical
白色
Wh ite
1~ 2
浪卡子
Lang kazi
3 900
初花期
Init ial fl ow ering period
柱状
Cylinderical
白色
Wh ite
1~ 3 0. 354
白朗
Bai lang
4 050
生长期
Grow ing period
柱状
Cylinderical
白色
Wh ite
1~ 2 0. 093
米林黄芪
Astra galus
mil ingensis
林芝
Lin zh i
2 900
初荚期
Ini ti al podding period
柱状分叉
Y sh aped
红色
Red
6~ 8 3. 024
米林
Milin
2 780
初荚期
Ini ti al podding period
柱状
Cylinderical
红色
Red
6~ 8 3. 541
朗县
Liangxian
2 800
盛花期
Blos soming period
柱状
Cylinderical
红色
Red
6~ 8 2. 973
墨竹工卡
Mo zhugongka
3 800
盛花期
Blos soming period
柱状分叉
Y sh aped
粉红色
Pink
3~ 5 1. 987
工布江达
Gong bujiangda
3 000
盛花期
Blos soming period
柱状分叉
Y sh aped
粉红色
Pink
3~ 5 1. 357
35第 1期 王素英等: 西藏部分地区豆科植物根瘤菌资源的初步调查
续表 1 Continue Table 1
寄主名称
Hos ts
采样地点
Sampling si te
地点
Locali ty
海拔 /m
Al ti tude
采样时期
Grow th period
根瘤形态特征
Morph ological characteri-
stics of nodule
形状
Shape
颜色
Colo r
大小 /mm
Size
固氮酶活性 /
(nmol·
mg- 1· h- 1)
Ni t rog enase
activity
假弯齿黄芪
Astra galus
comptodontoid es
林芝
Lin zh i
2 900
初荚期
Ini ti al podding period
柱状
Cylinderical
粉红色
Pink
6~ 10 2. 873
米林
Milin
2 780
初荚期
Ini ti al podding period
柱状
Cylinderical
粉红色
Pink
8~ 10 4. 357
朗县
Langxian
2 800
盛花期
Blos soming period
柱状
Cylinderical
粉红色
Pink
5~ 8 1. 980
墨竹工卡
Mo zhugongka
3 750
盛花期
Blos soming period
柱状分叉
Y sh aped
粉红色
Pink
4~ 6 1. 354
光亮黄芪
Astra galus
lucidus
林芝
Lin zh i
2 910
花后期
Pos t blossoming period
柱状
Cylinderical
红色
Red
6~ 9 3. 201
米林
Milin
2 780
花后期
Pos t blossoming period
柱状
Cylinderical
红色
Red
6~ 9 4. 873
白花黄芪
Astra galus
leucocephalus
林芝
Lin zh i
2 910
初荚期
Ini ti al podding period
柱状
Cylinderical
红色
Red
7~ 10 1. 904
米林
Milin
2 780
初荚期
Ini ti al podding period
柱状分叉
Y sh aped
红色
Red
7~ 10 2. 005
苏理木兰
Zndigof era
soul iei
林芝
Lin zh i
2 900
初花期
Init ial fl ow ering period
球形
Sph erical
粉红色
Pink
2~ 3 0. 932
米林
Milin
2 800
初花期
Init ial fl ow ering period
球形
Sph erical
粉红色
Pink
2~ 3 0. 764
朗县
Langxian
2 800
生长期
Grow ing period
球形
Sph erical
粉红色
Pink
2~ 4 1. 026
二色锦鸡儿
Caragana
bicolor
林芝
Lin zh i
2 900
初荚期
Ini ti al podding period
球形
Sph erical
褐红色
Brow n
4~ 6 12. 403
米林
Milin
2 800
初荚期
Ini ti al podding period
球形
Sph erical
褐红色
Brow n
3~ 5 10. 957
雅致山马蝗
Desmod ium
eiegans
林芝
Lin zh i
2 910
生长期
Grow ing period
椭圆形
Ellipse
红色
Red
1~ 2 0. 764
米林
Milin
2 780
生长期
Grow ing period
椭圆形
Ellipse
红色
Red
1~ 3 1. 025
工布江达
Gong bujiangda
3 100
生长期
Grow ing period
椭圆形
Ellipse
红色
Red
0. 5~ 1 0. 964
长萼棘豆
Oxytropis
parasericopetala
拉萨
Lasa
3 700
初花期
Init ial fl ow ering period
球形
Sph erical
红色
Red
0. 2~ 0. 5
贡嘎
Gong ga
3 800
生长期
Grow ing period
球形
Sph erical
红色
Red
0. 1~ 0. 5
江孜
Jiang zi
4 000
生长期
Grow ing period
球形
Sph erical
红色
Red
0. 5~ 1 0. 304
浪卡子
Lang kazi
3 900
生长期
Grow ing period
球形
Sph erical
红色
Red
0. 5~ 1 0. 157
从表 1可以看出 ,在自然条件下 ,各种野生豆科
植物根瘤的固氮酶活性相差较大 ,酶活性分布范围
为 0. 093~ 12. 403 nmo l /( mg· h) ,酶活性最高者为
二色锦鸡儿 ,且在林芝地区 (包括林芝、米林、朗县 )
该种植物的根瘤成蔟广布于侧根 ,几乎每个根瘤的
直径可达 5 mm左右。酶活性最低者为分布于白朗
的直立黄芪。另外分布于拉萨和贡嘎的长萼棘豆 ,日
喀则和江孜的直立黄芪 ,江孜的草木樨及浪卡子的
天蓝苜蓿的自然根瘤未测到固氮酶活性。 从采集过
程和酶活性测定结果 (表 1)可知 ,豆科植物的分布
与采集地点的生态环境相关 ,豆科植物根瘤的大小、
颜色和固氮酶活性也明显与采集地点的生态环境和
植物的生长阶段相关。 在低海拔植被茂盛的林芝地
区 ,豆科植物主要分布于高山灌木林带和田间、路边
杂草丛中 ,根瘤的采集地点主要是沙壤土 ;在高海拔
的拉萨和日喀则地区 (包括日喀则、江孜、白朗、浪卡
子 ) ,植物种类单一且多为草本 ,豆科植物分布于河
道两边的杂草丛中 ,根瘤的采集地点主要是沙砾 ;而
在高山地带 ,植被稀疏 ,无乔灌木分布 ,也没有发现
豆科植物。从采集和测定结果看 ,在大多数情况下 ,
同一种豆科植物在同一生长时期 ,林芝地区挖掘到
的根瘤体积较大 ,多为褐红色、红色和粉红色 ,固氮
酶活性较高 ,在拉萨和日喀则地区挖掘到的根瘤较
小 ,多为粉红色和白色 ,固氮酶活性较低 ;对同一地
区 (如拉萨 )的豆科植物 ,在低海拔区域 ,由于水分充
足、土壤较肥沃 ,采集到的根瘤体积较大 ,多为粉红
色 ,固氮酶的活性也较高 ,而在高海拔地区则与此相
反。
36 西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) 第 30卷
2. 4 根瘤菌的培养特征
从 282份根瘤菌样品中共分离到 340株 G- 、杆
状快生型根瘤菌 ,在 YMA平板上生长 48 h,乳白
色、黏液状的菌落直径达 3~ 5 mm,对数生长期测
定的菌体大小为 ( 0. 5~ 1. 7)μm× ( 1. 5~ 2. 3)μm。
他们与已命名的快生型根瘤菌的亲缘关系正在进一
步的研究中。
3 结 论
在林芝地区、拉萨地区和日喀则地区选点进行
调查 ,虽然采集到的豆科植物仅占到该地区已报道
豆科植物的 1 /6左右 ,但可明显看出由于受气候的
影响 ,林芝地区活土层较厚 ,分布的豆科植物种类较
多 ,根瘤的固氮酶活性也远远高于其他地区。
从已有的资料 [1 ]可知 ,林芝地区、拉萨地区和日
喀则地区与西藏的其他地区相比 ,豆科植物的种类
较少 ,然而在采集过程中发现 ,只要水分充足 ,豆科
植物尤其是豆科牧草常成片存在 ,这一现象在植被
较差的拉萨和日喀则地区也很突出。
与有关研究 [5, 6 ]报道相比 ,除分布于林芝地区的
二色锦鸡儿外 ,其他豆科植物根瘤的固氮酶活性很
低 ,这预示着西藏自治区非常缺乏高固氮活性的根
瘤菌菌株 ,因此选育可与该地区豆科植物结瘤的根
瘤菌菌株 ,广泛使用根瘤菌剂对于改善该地区土壤
贫瘠的面貌和恶劣的生态条件是有益的。
[参考文献 ]
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Inves tigation of rhizobial resources in th e Tibet Autonomous Region
WANG Su-ying1 , LI Run-hua2 , Liu Xin-cheng3 , LI Xin-suo1
( 1 Department of Food and Biological Engineering , Tianjin University of Commerce, Tianjin 300400,China;
2 Department of Biology ,Educational College of Shanx i , Shanxi , Taiyuan 030000,China;
3 School of Chemistry and Lif e Science, Tianjin Normal Universit y , Tianj in 300074,China)
Abstract: 282 specimens of root nodule, Which are dispersed over 10 genera 18 species of legumes in
the Lasha, Linzhi and Rikaze prefecture of Tibet Autonomous Region, were analysed by isolation, purifica-
tion, renodulation o f rhizobial st rains and determina tion of nit rog enase activ ity. The results show that all
leguminous plants could nodulate under the natural envi ronment , the shape of nodules is mainly spherical,
cylindrica l and palmate, and the co lor is brow n, red and pink, the diameter of spheriod nodule is 0. 1-
6. 0 mm and the leng th o f cy linder and palm nodule is 1- 10 mm. 92. 5% na tural nodules have activi ty of
ni t rog en fixation, and the value of ni t rogenase activ ity is 0. 093- 12. 403 nmol / ( mg· h) . It is obvious that
the shape, colo r, si ze and nit rog enase activi ty of nodule a re related to ecolo gical envi ronment o f sampling
si tes.
Key words: Tibet; legume; rhizobia; state of ni trog en fix ation
37第 1期 王素英等: 西藏部分地区豆科植物根瘤菌资源的初步调查