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茄科植物内生细菌的分离及拮抗菌的筛选



全 文 :第 28卷第 1期 江 西 植 保 Vol. 28, No. 1
2005年 3月 JIANGXI PLANT PROTECTION Mar. ,2005

收稿日期:2004-09-30
基金项目:江西农业大学青年科学基金
作者简介:李庚花(1974- ),女,江西湖口人,实验师,主要从事植物病理学研究工作

茄科植物内生细菌的分离及拮抗菌的筛选
李庚花 1,杨民和 1,蒋军喜 1,罗友强 1,曾敬富 2
(1. 江西农业大学农学院,江西 南昌 330045;2. 江西省吉安市植保植检站,江西 吉安 343000)

摘要: 从番茄和辣椒植株中共分离到 9 株对植物病原真菌具有拮抗作用的内生细菌。其中,来自樱桃番茄的内生
细菌株系 BS-1和湘研辣椒的内生细菌株系 BS-4对辣椒根腐病菌等具有较强的拮抗作用,两者在植株体内均可以
定殖。BS-1和 BS-4均属于芽孢杆菌。
关键词:茄科植物;内生细菌;鉴定;筛选

中图分类号:S436.41 文献标识码:B 文章编号:1006-4249(2005)01-0010-02

近年来,一些学者从棉花、马铃薯、水稻、辣
椒等多种作物体内分离筛选到具有防病或诱导抗病
作用的内生细菌,内生细菌有望对植物病害尤其是
土传病害防治起重要作用[1-4]。2001~2004年间,作
者对南昌市郊区的番茄及辣椒植株进行了内生细菌
的分离,同时用分离到的内生细菌对辣椒根腐病菌
等 6种重要病原真菌进行了拮抗试验,现将结果报
道如下。
1 材料与方法
1.1 分离材料
选江西省普遍种植的番茄(秦佣番茄和樱桃番
茄)和辣椒(湘研辣椒)植株进行内生细菌的分离。
1.2 分离培养基
细菌分离培养用 KB培养基、真菌培养及拮抗
测定用 PDA[5]培养基。
1.3 内生细菌分离与纯化
从不同种植地采集长势良好、无病的番茄、辣
椒植株,其根、茎、叶、花、果、种子分别用自来
水冲洗晾干后,各称取得 3.4g(果 34g),用 1%次
氯酸钠表面消毒 5min~30min,无菌水冲洗晾干,每
样品加 34ml 无菌水碾碎静止 15min 后,各取 1ml
涂平板,每处理重复 3 次,28℃黑暗培养 72h,计
算菌落数,根据菌落形态、颜色等挑选单菌落作为
参试菌株。
1.4 室内拮抗细菌的筛选
在直径为 9cm 的培养皿中加入 1ml 菌株培养
液,加入 10 ml PDA摇匀,然后在平板上接入直径
为 0.7㎝的真菌菌丝块,28℃黑暗培养 6d测量抑菌
圈,设无菌水对照。
1.5 细菌鉴定
常规革兰氏染色,芽孢染色。
1.6 菌株在辣椒体内定殖测定
用逐步筛选法,筛选出樱桃番茄 10-4ug/ml 的
PDA培养基上能稳定生长的 BS-1和辣椒 10-3ug/ml
的 PDA 培养基上能稳定生长的 BS-4。用含有相同
浓度的 KB 培养 24h,用涂抹叶片,注射茎秆等方
法接种,分别于不同时间取根、茎、叶、花,经 1%
次氯酸钠表面消毒后,分离菌株,测定其定殖情况,
以清水处理组织为对照。
2 结果与分析
2.1 茄科植物不同品种内生菌数量
由表 1可知,茄科内生细菌与品种、部位有关,
不同品种、不同部位内生细菌数量不一样。
2.2 拮抗病原真菌的茄科内生菌筛选
从上述分离到的内生细菌挑取、纯化到 45个菌
株,用辣椒根腐病菌、棉花黄萎病菌、稻纹枯病菌、
芝麻茎点枯病菌、油菜菌核病菌、栗镰孢病菌,通
过对峙生长法,测定了内生细菌各菌株对病原真菌
的拮抗作用。筛选了 9种有效菌,对病原真菌有拮
抗作用,其中来自樱桃番茄的 BS-1和辣椒 BS-4两
2005年第 1期 江 西 植 保 ·11·

菌株拮抗作用较强,详见表 2。
表 1 不同茄科植物植株分离到的内生细菌菌株数
品种 种子 根 茎 叶
樱桃番茄 4 4 3 3
秦佣番茄 6 5 3 2
湘研辣椒 5 4 3 3
表 2 内生细菌对常见植物病原真菌拮抗作用
菌落半径 /㎜ 抑制率 /%
植物病原真菌
BS-1 BS-4 CK BS-1 BS-4
辣椒根腐病菌 Fusarium solani
棉花黄萎病菌 Verticillium dahliae
稻纹枯病菌 Rhizoctonia solani
油菜菌核病菌 Sclerotinia sclertiorum
栗镰孢病菌 Fusarium sp.
芝麻茎点枯病菌 Macrophomina phaesolina
16
2
3
16
6
13
8
11
5
8
5
4
34
17
20
30
30
18
52.98
88.24
85.00
46.67
80.00
27.78
76.47
35.30
75.00
73.33
83.33
77.78
2.3 拮抗内生细菌的鉴定
对拮抗作用较强来自樱桃番茄的菌株 BS-1 和
来自辣椒的菌株 BS-4进行了形态观察和常规染色,
参照东秀珠等[6]的方法,将 BS-1和 BS-4均鉴定为
芽孢杆菌(Bacillus sp.)。
3 讨论
从樱桃番茄和辣椒上分离出 9种内生细菌对植
物病原真菌有拮抗作用,其中 BS-1和 BS-4两菌株
作用较强。目前两菌株确定为 Bacillus属内生细菌,
它们的种名及对茄科蔬菜的青枯病、疫病是否有抑
制作用,还待进一步研究。
致谢:江西农业大学范淑英副教授提供的樱桃番茄品种。

参考文献:
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诱导棉花对大丽轮枝菌抗性的研究[J]. 中国生物防治,
1996, 12(1): 7~10
[2] van Buren A M, Andre C, Ishimru C A. Biological control of
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[3] 杨海莲, 孙晓璐, 宋末. 植物内生细菌的研究[J]. 微生
物学通报, 1998, 25(4): 224~227
[4] 何红, 蔡学清, 洪永聪, 等. 辣椒内生细菌的分离及拮抗
菌的筛选[J]. 中国生物防治, 2002, 18(4): 171~175
[5] 方中达. 植病研究法[M]. 北京: 农业出版社. 1998
[6] 东秀珠, 蔡妙英. 常用细菌鉴定手册[M]. 北京: 科学出
版社. 2001

Isolation of endophytic bacteria in species of solanaceae and screening of
antagonistic bacteria

LI Geng-hua1, YANG Min-he1, JIANG Jun-xi1, LUO You-qiang1, ZENG Jing-fu2
(1. College of Agronomy, JAU, Nanchang 330045, China;
2. Plant Protection and Quarantine Station of Jian City, Jiangxi Jian 343000, China)
Abstract: 9 strains of endophytic and antagonistic bacteria were isolated from plant tissues of tomato and
capsicum. Of which,The strains BS-1 and BS-4 showed good antagonistic effectiveness to some plant pathogenic
fungi, such as Fusarium solani, and they could colonized in the plants. Both BS-1 and BS-4 were identified as
Bacillus spp.
Key words: solanaceae; endophytic bacteria; identification; screening