全 文 ：收稿日期:2008-06-25;　修订日期:2008-08-29
基金项目:陕西省教育厅专项科研计划项目资助(No.07JK214)
作者简介:赵　桦(1957-),男(汉族),陕西汉中人 ,现任陕西理工学院教
授 ,硕士学位 ,主要从事药用植物研究工作.
秦巴山区马兜铃科两种常用药材中马兜铃酸含量分析
赵　桦 ,吴梦茹
(陕西理工学院·生物科学与工程学院 ,陕西 汉中　723000)
摘要:目的 分析测定秦巴山区产细辛 AristolochiasieboldiMiq.和汉中防己 A.heterophyllaHemsl.两种药材中马兜铃酸 A
的含量。方法 色谱柱:AgilentODS(5 μm, 4.6mm×250mm);流动相:甲醇 -乙腈 -1%冰乙酸(47∶17∶36);流速 1.0
ml/min;柱温∶室温;检测波长 315nm。结果 细辛中马兜铃酸 A的平均含量为 74.1 μg/g, 汉中防己中马兜铃酸 A的平
均含量为 2.14 mg/g。结论 汉中防己中的马兜铃酸 A含量是细辛中马兜铃酸 A含量的 30倍左右。
关键词:细辛;　汉中防己;　马兜铃酸 A;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.1　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)06-1387-02
　　细辛为马兜铃科植物北细辛 AsarumheterotropoidesFr.
Schmidtvar.mandshuricum(Maxim.)Kitag., 华细辛 A.sieboldii
Miq.的干燥全草 , 主要分布于辽宁 、吉林 、黑龙江 、陕西 、山东等
省。临床上用于祛风散寒 , 通窍止痛 , 温肺化饮 [ 1] 。汉中防己为
马兜铃科马兜铃属异叶马兜铃 AristolochiaheterophyllaHemsl.的
干燥根 , 生于山坡灌丛中 ,主产于陕西。原植物为缠绕藤本 , 高 2
～ 3 m, 根圆柱形 ,长 8 ～ 15 cm, 直径 2 ～ 5 cm,有香气 , 外皮黄棕
色或灰褐色。性寒 , 味苦 , 能祛风 ,利湿 ,镇痛 ,用于水肿 、小便不
利 、风湿痹痛等症。
近年来 , 马兜铃科植物体含有的马兜铃酸引起肾脏损害的临
床报道和毒理研究受到广泛重视 ,许多研究报告对一些常用的含
马兜铃酸药材进行了分析 [ 2 ～ 7] , 为这些药材的临床使用提供科
学依据。由于植物体内的化学成分含量与生长环境有密切的关
系 , 不同产地的同一种药材化学成分存在一定的差异 ,在现有的
报道中 , 不同产地的细辛所含马兜铃酸 A的量差异也较大 [ 8 ～ 15] 。
秦巴山区有丰富的药用植物资源 ,但含马兜铃酸药材的分析研究
还较少。本文选用产于秦巴山区的两种含马兜铃酸的常用药材
细辛和汉中防己 , 分析其药用部位马兜铃酸的含量 , 为药用资源
的开发利用以及常用药材的安全使用提供科学依据。
1　仪器与材料
1.1　仪器 紫外分光光度计(TU-1221), 高效液相色谱仪(Agi-
lent1200), 微型植物试样粉碎机(FZ102), 电子天平 , 索氏提取
仪 , 三用电热恒温水箱。
1.2　材料 本实验所用实验材料华细辛(原植物为华细辛 A.
sieboldiMiq.全草)和汉中防己(原植物为异叶马兜铃 A.hetero-
phyllaHemsl.干燥根)产自陕西汉中 , 均由陕西省汉中市药品检
验所提供。
1.3　试剂 马兜铃酸 A对照品购自中国药品生物制品鉴定所
(批号:110746-200406);乙腈为色谱纯 , 甲醇 ,分析纯 , 西安化学
试剂厂;乙醚 ,分析纯 , 天津市化学试剂六厂;水为纯化水;3.6%
硫酸溶液;0.5%氢氧化钠溶液。
2 　方法与结果
2.1 　色谱条件 高效液相色谱仪(Agilent1200);色谱柱:Agi-
lentODS(5μm, 4.6mm×250mm, Agilent);流动相:甲醇 -乙腈
-1%冰乙酸(47∶17∶36);流速 1.0ml/min;柱温:室温;检测波
长 315 nm。进样量:20 μl, 保留时间:12 min。
2.2 　实验材料准备 用微型植物试样粉碎机分别粉碎细辛和
汉中防己两种药材 , 按照《中国药典》操作 , 药材粉末过 40目筛 ,
盛于洁净干燥的广口瓶中备用。
2.3　对照品溶液的制备 用电子天平精密称取马兜铃酸 A标准
品 7.5mg, 用甲醇定容至 25 ml的容量瓶中(C=0.3 mg/ml)。摇
匀 , 再精密吸取 0.5ml置于 10ml容量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 , 使其成为 15 μg/ml的溶液 ,放于 4℃冰箱储存备用。
2.4 　供试品溶液的制备 用电子天平精密称取汉中防己药材
粉末 1 g, 置于 150 ml索氏提取仪中 , 加入适量的甲醇 , 加热回流
5h。将提取液回收至干 , 用 15 ml0.5%NaOH溶液 , 使其完全溶
解 , 转至分液漏斗中 , 调 pH=10,用乙醚萃取两次 , 15 ml/次 。萃
取后的碱液 ,用 3.6%的硫酸溶液调 pH=2, 再用乙醚萃取 4次 ,
15 ml/次 ,合并萃取液 , 水浴蒸干 ,用甲醇定容于 150 ml容量瓶中
备用。
用电子天平精密取细辛药材粉末 5 g,置于 150 ml索氏提取
仪中 , 用上述方法进行提取 , 纯化后用甲醇定容至 50 ml容量瓶
中备用 。
2.5 　检测波长的测定 取马兜铃酸 A标准品储备液 , 在 200 ～
400 nm波长范围内扫描 ,在 390, 315 nm处有最大吸收峰。高效
液相色谱实验结果表明 , 在 315 nm处干扰弱 , 灵敏度高 , 因此选
择 315 nm作为检测波长。
2.6　线性关系的考察 分别吸取浓度为 15 μg/ml的马兜铃酸 A
标准品溶液 5, 10, 15, 20, 25μl进入高效液相色谱仪中进行分析。
以进样量为横坐标 ,以峰面积为纵坐标 , 绘制标准曲线 ,得标准曲
线回归方程为 Y=28.804X-1.12, 相关系数 r=0.999 958,表明
马兜铃酸 A在 0.075 ～ 0.375 μg范围内进样量和峰面积值呈现
良好的线性关系。见图 1。
图 1　马兜铃酸 A标准曲线图
2.7　精密度实验 精密吸取浓度为 15 μg/ml的马兜铃酸 A标
准品储备液 20 μl,注入高效液相色谱仪中分析。连续进样 5次 ,
计算峰面积的 RSD值为 0.6%。
2.8 　稳定性实验 取细辛和汉中防己的均匀供试品溶液各一
份 , 室温放置 ,于 0, 2, 4, 6, 8, 10h进样 20ml测定 , 样品在 10h内
稳定。细辛和汉中防己供试品溶液的峰面积的 RSD值分别为
2.0%和 0.28%。
2.9 　重复性实验 取同一批细辛和汉中防己药材 , 按供试品溶
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6 时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期
液的制备方法平行制备 5份供试品溶液 , 进样 20ml测定。计算
其马兜铃酸 A含量的 RSD值分别为 0.8%和 3.7%。
2.10　回收率实验 采用加样回收率法 ,精密吸取质 量浓度已
知的马兜铃酸 A样品及细辛 、汉中防己供试液 , 将其等体积混
合 , 然后注入高效液相色谱仪中分析 ,重复做 5次 , 进行回收率测
定。结果显示 , 细辛的平均回收率为 100.6%, RSD值为 1.1%;
汉中防己的平均回收率为 99.6%, RSD值为 1.81%。
2.11 　样品的测定 分别称取细辛 5g和汉中防己 1g, 按 “ 2.4”
方法制备供试品溶液 , 与对照品同样色谱条件下测定。色谱图见
图 2 ～ 4。
图 2　标准品的 HPLC图谱
图 3　细辛样品的 HPLC图谱
图 4　汉中防己样品的 HPLC图谱
2.1.2　药材中马兜铃酸 A的含量 经检测实验结果为:细辛中
马兜铃酸 A的平均含量为 74.1 μg/g, 汉中防己中马兜铃酸 A的
平均含量为 2.14mg/g。结果见表 1。
表 1　细辛和汉中防己中马兜铃酸 A的含量
细辛样
品序号
含量
C/μg· g-1
平均含量
C/μg· g-1
汉中防己
样品序号
含量
C/mg· g-1
平均含量
C/mg· g-1
1 74.3 1 2.22
2 73.8 74.1 2 2.08 2.14
3 74.2 3 2.12
　　n=3
在现有文献中 , 不同产地细辛中马兜铃酸 A的含量变化较
大。姜旭等 [ 7]报道其含量范围在 0 ～ 351 μg/g之间 , 其中华细辛
平均含量为 145 μg/g。在李琳等 [ 2]的报道中 , 华细辛中的马兜
铃酸 A含量为 0.178%。相比之下 , 本实验检测的产于秦巴山区
的华细辛马兜铃酸 A含量较低。
分析结果同时表明 ,产于秦巴山区的汉中防己中马兜铃酸 A
含量较高 ,其含量是华细辛中马兜铃酸 A含量的 30倍左右。
3　讨论
3.1　实验方法对含量测定的影响 细辛药材中只含有微量马
兜铃酸 A,必须采用灵敏度高的方法才能检测到。 文献中曾
采用薄层色谱法 , 没有检测到马兜铃酸 A, 可能是由于灵敏度
较低的缘故 。为了提高灵敏度 , 采用吸光度较高的波长是有
利的 , 马兜铃酸 A在紫外区的两个吸收峰 , 以 390 nm为最灵
敏 , 但是却存在较大的干扰 , 本实验兼顾灵敏度和专属性 , 选
用 315 nm为检测波长 。
3.2　供试样品制备法对含量测定的影响 在制备细辛和汉中防
己供试样品提取液时 ,由于药材中含有木兰碱 、马兜铃内酰胺 、青
木香酸等多种杂质 ,会干扰实验结果 , 因此 ,我们根据马兜铃酸 A
可溶于碱的原理 ,在碱液中用乙醚萃取除去杂质后 ,分离效果较
好。碱化时碱性要达到 pH=10, 否则马兜铃酸 A不能完全溶解 ,
酸化时酸性要达到 pH=2, 否则马兜铃酸 A不能完全析出 ,萃取
不完全 。
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