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HPLC测定马先蒿属植物中的桃叶珊瑚苷



全 文 :华西药学杂志
W C J·P S 2015,30(6)∶718 ~ 719
基金项目:国家自然科学基金资助项目(批准号:81374019) ;甘肃省中医药管理局科研立项(GZK -2015 - 59)
作者简介:李茂星(1973—) ,男,江苏江都,博士,副主任药师,从事天然药物化学的研究工作。Email:limaox2005@ aliyun. com
HPLC测定马先蒿属植物中的桃叶珊瑚苷
李茂星1,2,曹馨元1,2,陶 锐1,2,曹文龙3,栾 飞1,刘延彤1
(1.兰州军区兰州总医院药剂科 全军高原环境损伤防治重点实验室,甘肃 兰州 730050;2. 兰州大学药学院,甘肃 兰州
730000;3.天祝县藏医药开发研究所,甘肃 武威 733299)
摘要:目的 采用 HPLC法测定马先蒿属植物中桃叶珊瑚苷的含量。方法 色谱柱为 Waters C18柱(150 mm × 4. 6 mm,5
μm) ,流动相为甲醇 -水(10∶90) ,检测波长 204 nm,流速 1 mL·min -1。结果 各样品中均能检测出桃叶珊瑚苷,但含量差异
较大。结论 桃叶珊瑚苷普遍存在于马先蒿属植物中;所用方法简便、准确,可用于马先蒿属药材的质量控制。
关键词:马先蒿;桃叶珊瑚苷;高效液相色谱法;含量测定;质量控制;环烯醚萜苷
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 - 0103(2015)06 - 0718 - 02
DOI:10. 13375 / j. cnki. wcjps. 2015. 06. 030
Determination of aucubin in medicinal plant Pedicularis by HPLC
LI Mao - xing1,2,CAO Xin - yuan1,2,TAO Rui1,2,CAO Wen - long3,LUAN Fei1,LIU Yan - tong1
(1. Department of Pharmacy,Lanzhou General Hospital of PLA&Key Laboratory of the Prevention and Cure for the Plateau Enviroment
Damage,PLA,Lanzhou,Gansu,730050 P. R. China;2. Pharmacy College,Lanzhou University,Lanzhou,Gansu,730000 P. R. China;
3. China Tibetan Medicine Research Institute in Tianzhu County,Wuwei,Gansu,733299 P. R. China)
Abstract:OBJECTIVE To establish an HPLC method for the determination of aucubin in medicinal plant Pedicularis.METHODS
Waters C18 column(150 mm ×4. 6 mm,5 μm)was used,and the mobile phase was MeOH - H2O(10∶90)with the detection wave-
length of 204 nm and the flow rate of 1 mL·min -1 . RESULTS Aucubin could be determined in all samples and there was an obvious
difference in content. CONCLUSION Aucubin is widely distributed in Pedicularis. This method is simple and accurate,and can be
used for the quality control of Pedicularis plants.
Key words:Pedicularis;Aucubin;HPLC;Determination;Quality control;Iridoid glycoside
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 - 0103(2015)06 - 0718 - 02
玄参科马先蒿属 Pedicularis 植物多具有清热解
毒、利尿、保肝等作用[1]。该属植物大多含有环烯
醚萜苷、苯乙醇苷、生物碱及黄酮类化合物[2],以桃
叶珊瑚苷为代表的环烯醚萜苷是其特征成分。桃叶
珊瑚苷同时存在于忍冬科、车前科、杜仲科、玄参科
等多种植物中,具有抗氧化、抗炎、抗病毒、保护神经
及降压等作用[3]。现首次采用 HPLC法测定了不同
产地的 7 种马先蒿属植物中桃叶珊瑚的含量。
1 实验部分
1. 1 仪器与试药
1525 型高效液相色谱仪(美国 Waters) ;HP -
8453 紫外可见分光光度计(美国惠普)。桃叶珊瑚
苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:
111761) ;7 种不同马先蒿共 13 个样品采自甘肃、青
海、四川等省区,均经鉴定;甲醇为色谱纯;水为注射
用水;其余试剂为分析纯。
1. 2 方法与结果
1. 2. 1 色谱条件 色谱柱为 Waters C18(150 mm ×
4. 6 mm,5 μm) ,流动相为甲醇 -水(10∶90) ,流速
1 mL·min -1,柱温25 ℃,进样量20 μL。在此条件下,
对照品和 13种马先蒿属样品溶液的色谱图见图 1。
1. 2. 2 溶液的制备 精密称取桃叶珊瑚苷对照品
5. 00 mg,置 10 mL 量瓶中,用 10%甲醇溶解并定
容,得对照品贮备液。取上述贮备液适量,以 10%
甲醇稀释至 51 μg·mL -1的对照品溶液。分别取 13
种药材各适量,粉碎(过 4 号筛) ,准确称取粉末
2. 00 g,置具塞锥形瓶中,精密加入 75% 甲醇 20
mL,称定重量,超声(59 kHz、350 W)30 min,冷却,
用 75%甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,取续滤液
1 mL,置 10 mL 量瓶中,用 75%甲醇定容,用 0. 45
μm微孔滤膜过滤,即得供试品溶液。
1. 2. 3 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液
0. 1、0. 4、0. 7、1、1. 3、1. 6 mL,分别定容至 5 mL,进
0 5 10 0 5 10 0 5 10 0 5 10 0 5 10 0 5 10 0 5 10
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t/min
图 1 对照品(A)和马先蒿属样品(B ~ N)溶液的的色谱图
Figure 1 Chromatograms of control solution(A)and Pedicularis samples solution(B - N)
样测定,记录峰面积。以峰面积为纵坐标、对照品浓
度为横坐标进行线性回归,得回归方程:Y =
1. 5311 × 104X + 338. 07(r2 = 0. 9999) ,桃叶珊瑚苷
1. 02 ~ 16. 32 μg·mL -1与峰面积的线性关系良好。
1. 2. 4 重复性与加样回收率试验 取甘肃马先蒿
药材粉末,平行制备 6 份供试品溶液,进样测定,计
算得峰面积的 RSD = 1. 57%(n = 6) ,表明方法的重
复性良好。精密称取已知桃叶珊瑚苷含量
(9. 4 mg·g -1)的甘肃马先蒿药材粉末 0. 5 g ,共 6
份,分别精密加入一定量的对照品溶液,制备供试品
溶液并进样测定,计算加样回收率(表 1)。
表 1 加样回收率试验的结果(mg,n =6)
Table 1 Results of the recovery tests(mg,n =6)
Original Added Detected Recovery /% 珔X /% RSD /%
4. 709 2. 520 7. 346 104. 63 103. 36 2. 02
4. 728 2. 520 7. 367 104. 71
4. 719 2. 520 7. 337 103. 88
4. 709 2. 520 7. 340 104. 38
4. 691 2. 520 7. 295 103. 33
4. 709 2. 520 7. 210 99. 24
1. 2. 5 精密度与稳定性试验 取对照品溶液,连续
进样 6 次,计算得峰面积的 RSD = 0. 80%(n = 6) ,
表明仪器精密度良好。取甘肃马先蒿供试品溶液,
于室温下放置,分别于 0、2、4、6、12、24 h 时进样测
定,计算得峰面积的RSD = 1. 51%(n = 6) ,表明供试
品溶液在 24 h内稳定。
1. 2. 6 样品的测定 每种药材取 6 份,按“1. 2. 2”
项方法制备供试品溶液,分别进样,计算样品中桃叶
珊瑚苷的含量(表 2) ,平均含量为 7. 33 mg·g -1。
2 讨论
曾分别考察了不同比例流动相(乙腈 -水、甲
醇 -水系统)、不同提取溶剂(75%甲醇、水)、不同
表 2 马先蒿属样品中桃叶珊瑚苷含量测定的结果(n =6)
Table 2 Ddetermination results of aucubin in Pedicularis(n =6)
No. 药材名称 采集地 桃叶珊瑚苷 /mg·g - 1 RSD /%
1 甘肃马先蒿(茎) 甘肃天堂 9. 41 1. 06
2 甘肃马先蒿(根) 甘肃天堂 1. 80 1. 78
3 中国马先蒿 甘肃天堂 4. 22 0. 47
4 藓生马先蒿 甘肃天堂 5. 45 1. 84
5 俯垂马先蒿 甘肃天祝 7. 20 1. 90
6 中国马先蒿 甘肃天祝 4. 73 1. 72
7 藓生马先蒿 甘肃天祝 2. 81 0. 57
8 甘肃马先蒿 青海西宁 13. 26 1. 98
9 藓生马先蒿 青海西宁 18. 35 1. 31
10 白花甘肃马先蒿 青海西宁 11. 01 1. 54
11 轮叶马先蒿 四川诺尔盖 8. 32 0. 73
12 碎米蕨叶马先蒿 四川诺尔盖 6. 52 1. 19
13 藓生马先蒿 四川诺尔盖 2. 23 1. 08
提取方法(加热回流、超声)对样品中桃叶珊瑚苷提
取效率的影响。考虑到桃叶珊瑚苷的分子结构中存
在不稳定的双缩醛结构[4],故选择了文中的提取条
件。文中采用 HPLC法测定了 7 种不同马先蒿共 13
个样品中桃叶珊瑚苷的含量,并进行了比较,为优质
药材的筛选及活性成分的研究奠定了基础。
参考文献:
[1] Li MX,He XR,Tao R,et al. Phytochemistry and pharmacology of
the genus pedicularis used in traditional chinese medicine[J].
Am J Chin Med,2014,42(5) :1 - 28.
[2] 褚洪标,谭宁华,熊江.长舟马先蒿化学成分研究[J].天然产
物研究与开发,2007,19(4) :584 - 587.
[3] 文质君,陈筱春,朱梅菊.密穗马先蒿对耐力运动小鼠红细胞
参数、抗氧化和免疫功能的影响[J]. 中国康复医学杂志,
2008,23(11) :1022 - 1024.
[4] Yang XM,Shang PP. Preliminary study on the stability of aucubin
[J]. Chin J Pharm Anal,2003,23 (3) :167 - 169.
收稿日期:2014 - 10 - 23
917第 6 期 李茂星,等。HPLC测定马先蒿属植物中的桃叶珊瑚苷