全 文 ：收稿日期:2013-05-02 接受日期:2013-10-21
基金项目:中国科学院“西部之光”人才培养计划(2010);中国科
学院知识创新工程重要方向(KSCX2-EW-J-26);国家科
技支撑计划(2010BAK68B02)
* 通讯作者 Tel:86-971-6143523;E-mail:sunj@ nwipb． cas． cn
天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2015，27:466-469
文章编号:1001-6880(2015)3-0466-04
四种绿绒蒿属植物中总黄酮含量测定
舍莉萍1，2，孙 菁1* ，周玉碧1，孙胜男1，2，赵庆帅1，2，叶润蓉1，卢学峰1，彭 敏1
1中国科学院西北高原生物研究所 青海省青藏高原特色生物资源研究重点实验室，西宁 810008;
2中国科学院大学，北京 100049
摘 要:本文采用比色法测定了 4 种绿绒蒿属植物中总黄酮的含量，该方法线性关系良好(r2 = 0． 9990)，平均回
收率为 101． 56%，精密度和重复性试验 ＲSD分别为 2． 94%和 1． 22%，表明本试验的重复性较好。结果显示总
黄酮含量以五脉绿绒蒿中最高，全缘和红花绿绒蒿次之，总状绿绒蒿中最低，4 种药材总黄酮含量的变化与其用
途差异基本吻合，与藏医用药品次习惯较为相符。本实验结果可以为绿绒蒿属药用植物资源的深入研究和开
发利用提供一定的理论依据。
关键词:总黄酮;比色法;五脉绿绒蒿;全缘绿绒蒿;红花绿绒蒿;总状绿绒蒿
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A DOI:10． 16333 / j． 1001-6880． 2015． 02． 020
Determination of Total Flavonoids in Four Meconopsis
Species from Qinghai-Tibet Plateau
SHE Li-ping1，2，SUN Jing1* ，ZHOU Yu-bi1，SUN Sheng-nan1，2，
ZHAO Qing-shuai1，2，YE Ｒun-rong1，LU Xue-feng1，PENG Min1
1Qinghai Key Laboratory of QinghaiTibet Plateau Biological Ｒesources，Northwest Institute of Plateau Biology，Chinese
Academy of Sciences，Xining 810008，China;2University of Chinese Academy of Sciences，Beijing 100049，China
Abstract:In this paper，the contents of total flavonoids in four Meconopsis species collected from the Qinghai-Tibet plat-
eau were determined by ultraviolet-visible spectrophotometer with colorimetric method． This method showed good linearity
(r2 = 0． 9990)． The average recovery of the method was 101． 56%;the accuracy and repeatability of the method were
confirmed by the precision and repetition tests with ＲSD = 2． 94% and 1． 34%，respectively． The results showed that the
total flavonoids content in Meconopsis quintuplinervia was the highest，which was a top-grade medicinal herb in accord
with the traditional usage habit of Tibet． In addition，the results showed that there was a remarkable difference between
Meconopsis quintuplinervia and the others which was analyzed by SPSS 20． 0 with ANOVA method． The results presented
in this study，will provide a theoretical basis for the further studies of the medicinal herbs of Meconopsis species．
Key words:total flavonoids;colorimetric method;Meconopsis quintuplinervia;Meconopsis integrifolia;Meconopsis horridu-
la;Meconopsis punicea．
绿绒蒿是罂粟科(Papaveraceae)绿绒蒿属
(MeconopsisVig．)植物的统称，为多年生草本，系藏
医药中著名的传统药用植物。我国有 38 种，主要分
布于云南、四川、甘肃、青藏高原等地区［1，2］。其中，
17 种为药用植物，《藏药志》中记载以五脉绿绒蒿
(Meconopsis quintuplinervia Ｒegel．)、全缘绿绒蒿［M．
integrifolia(Maxim．)Franch．］、多刺绿绒蒿(M． hor-
ridula Hook． F． et Thoms．)、总状绿绒蒿［M． horridula
Hook． Thoms． var． racemosa(Maxim．)Prain］、红花绿
绒蒿(M． punicea Maxim．)等最为常用［2］。近年来对
绿绒蒿属植物化学成分的研究表明，该属植物中含
有生物碱、黄酮、挥发油、萜类等化学成分，其中又以
生物碱类和黄酮类成分为该属植物主要活性成分，
围绕这两类化合物的研究最为引人关注［3-7］。现代
药理学研究表明，绿绒蒿属植物具有抗疲劳、止泻、
镇痛和保肝等作用［8-10］。
黄酮类化合物(Flavonoids)是在植物中广泛存
在的一类具有 C6-C3-C6 结构的天然化合物，是药用
植物中的主要活性成分之一，具有抗炎抑菌、镇痛止
咳及解热保肝等药理作用。近年来对绿绒蒿属植物
黄酮类化合物的研究多集中于结构分析和鉴定［3-7］，
对于不同物种间总黄酮含量比较的研究则较少，本
文采用比色法［8-10］测定了四种绿绒蒿属药用植物，
即五脉绿绒蒿、全缘绿绒蒿、总状绿绒蒿及红花绿绒
蒿中总黄酮含量，并对其含量差异进行了比较分析，
以期为绿绒蒿属药用植物资源的深入研究和开发利
用提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1． 1 仪器
722S型分光光度计(上海棱光);KQ5200DE 超
声波清洗仪(江苏昆山);优普 UPT-I-10T 型超纯水
机(上海优普)。
1． 2 试剂
芦丁对照品购自中国食品药品检定研究院(批
号 100080-200707);亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、
无水乙醇等均为分析纯;试验用水为超纯水(18． 2
MΩ·cm)。
1． 3 样品采集与预处理
试验用材料均采自青海省境内，具体采集地点
如表 1 所示。每一物种在同一采集地点，至少采集
15 ～ 20 株植株个体，株间距离至少 5 m，然后混合。
原植物标本经中科院西北高原生物研究所卢学峰副
研究员鉴定为罂粟科绿绒蒿属五脉绿绒蒿(M． quin-
tuplinervia Ｒegel．)、全缘绿绒蒿［M． integrifolia(Max-
im．)Franch．］、总状绿绒蒿［M． horridula Hook．
Thoms． var． racemosa(Maxim．)Prain］及红花绿绒蒿
(M． punicea Maxim．)。样品带回实验室后，用纯水
淋洗、阴干后粉碎，过 100 目筛，备用。
表 1 绿绒蒿样品采集地点
Table 1 Collecting sites of experimental samples
样品
Samples
五脉绿绒蒿
M． quintuplinervia
全缘绿绒蒿
M． integrifolia
总状绿绒蒿
M． horridula
红花绿绒蒿
M． punicea
采集地点
Sites
青海省贵德县
Guide county
青海省尖扎县
Jianzha county
青海省刚察县
Gangcha county
青海省达日县
Dari county
1． 4 实验方法
1． 4． 1 总黄酮提取
精确称取样品 0． 500 g 置于 100 mL三角瓶中，
加入 50 mL 75%乙醇，称重，45 ℃下恒温超声 1 h
(超声频率为 40 KHz)，放凉，补足重量。过滤，准确
量取提取液 1 mL，用 75%乙醇定容至 50 mL容量瓶
中，待测。
1． 4． 2 标准曲线绘制
精密称取芦丁对照品 0． 0070 g，用 75%乙醇溶
液溶解，定容至 100 mL，即得浓度为 0． 070 mg /mL
的对照品储备液。依次吸取对照品溶液 2、4、6、8、
10 mL置于 10mL 容量瓶中，用 75%乙醇溶液稀释
至刻度，分别配制成浓度为 0． 014、0． 028、0． 042、
0. 056、0． 070 mg /mL的系列标准工作溶液。
准确量取各浓度标准工作溶液 2． 0 mL置于 25
mL容量瓶中，加 1． 0 mL5% NaNO2 溶液，摇匀，静
置 5 min;加入 1． 0 mL10% Al(NO3)3 溶液，摇匀，静
置 6 min;再加入 1． 0 mL40% NaOH 溶液，用 75%乙
醇溶液定容至 25 mL 容量瓶中，摇匀，放置 15 min。
以不加对照品的 75%乙醇溶液同法作空白，在波长
510 nm处进行检测。以芦丁浓度为横坐标，吸光度
值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程 Y =
0. 8929X-0． 0075(r2 = 0． 9990)。
1． 4． 3 精密度试验
准确量取芦丁浓度为 0． 070 mg /mL 的标准工
作溶液 2． 0 mL，置于 25 mL容量瓶中，按“1． 4． 2”项
下方法进行检测，平行测定 5 次，计算 ＲSD值。
1． 4． 4 重复性试验
取五脉绿绒蒿待测液 5 份，分别按“1． 4． 2”项
下方法进行检测，以吸光度值计算 ＲSD值。
1． 4． 5 回收率试验
取已知总黄酮含量的五脉绿绒蒿样品待测液 5
份，每份 1． 0 mL，分别加入系列浓度的标准工作溶
液 1． 0 mL，按“1． 4． 2”项下方法进行检测，计算平均
回收率。
1． 4． 6 样品测定
准确量取各样品待测溶液 2． 0 mL 置于 25 mL
容量瓶中，按“1． 4． 2”项方法进行检测，每个样品平行
测定 3次，根据标准曲线计算各样品中总黄酮含量。
1． 4． 7 数据处理
采用 SPSS20． 0 软件对四种绿绒蒿植物中总黄
酮含量进行单因素方差分析。
764Vol. 27 舍莉萍等:四种绿绒蒿属植物中总黄酮含量测定
2 结果与讨论
2． 1 方法学考察及样品含量测定
由表 2 和表 3 可以看出，精密度和重复性试验
ＲSD 值分别为 2． 94% 和 1． 34%，平均回收率为
101． 56%。
表 2 精密度和重复性试验(n = 5)
Table 2 Ｒesults of precision and repeatability tests (n = 5)
精密度试验 Precision tests 重复性试验 Ｒepeatability tests
测定次数
Testing times
吸光度
A ＲSD %
测定次数
Testing times
吸光度
A ＲSD %
1 0． 055 1 0． 085
2 0． 055 2 0． 084
3 0． 057 2． 94 3 0． 085 1． 34
4 0． 054 4 0． 086
5 0． 058 5 0． 087
表 3 回收率试验(n = 5)
Table 3 Ｒecoveries of the developed method (n = 5)
序号
No．
含量
Content(mg)
加入量
Add(mg)
检测量
Tested(mg)
回收率
Ｒecovery(%) ＲSD(%)
1 0． 130 0． 014 0． 298 99． 8
2 0． 130 0． 028 0． 312 100． 7
3 0． 130 0． 042 0． 327 102． 1 1． 49
4 0． 130 0． 056 0． 341 101． 4
5 0． 130 0． 070 0． 357 103． 8
平均回收率
Average Pecovery(%) 101． 5
从表 4 中可以看出，被测样品总黄酮含量以五
脉绿绒蒿最高，全缘、红花绿绒蒿次之，总状绿绒蒿
最低。数据处理结果显示，五脉和总状绿绒蒿分别
与其他三种样品之间差异极显著(P ＜ 0． 01)，全缘
与红花绿绒蒿之间差异不显著(P ＞ 0． 05)。
表 4 样品总黄酮含量测定结果(n = 3)
Table 4 Contents of total flavonoids in the 4 investigated spe-
cies (n = 3)
样品
Sample
总黄酮含量
Contents (mg /g)
均值
Mean (mg /g)
五脉绿绒蒿
M． quintuplinervia
0． 1281
0． 1295 0． 1295 ± 0． 0014(A)*
0． 1309
全缘绿绒蒿
M． integrifolia 0． 0679
0． 0679 0． 0665 ± 0． 0024(B)
0． 0637
总状绿绒蒿
M． horridula 0． 0413
0． 0371 0． 0399 ± 0． 0024(C)
0． 0413
红花绿绒蒿
M． punicea 0． 0665
0． 0707 0． 0693 ± 0． 0024(B)
0． 0707
* :ABC 分别表示显著性分析，相同字母表示无显著差异(P ＞
0. 05)，不同字母表示有极显著性差异(P ＜ 0． 01)。
* :ABC indicated results of variance analysis，same letter indicated no
significant difference (P ＞ 0． 05) ，different letters indicated extremely
significant difference (P ＜ 0． 01)．
2． 2 讨论
黄酮类化合物分子结构中若具有 3-羟基、5-羟
基或邻二酚羟基，则易与金属盐类如铝盐、锆盐、锶
盐、镁盐等反应，生成有色金属络合物，这些络合物
作用在光谱上能产生明显的变化，吸收峰红移，可用
于定量法测定黄酮含量［9，10］。绿绒蒿属植物中已检
测出的黄酮类化合物多为槲皮素、双氢槲皮素、木犀
864 天然产物研究与开发 Vol. 27
草素等［3，4］，故本实验以 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 作
为显色体系，芦丁为对照品，采用比色法测定了四种
绿绒 蒿 属 植 物 总 黄 酮 的 含 量，平 均 回 收 率
101. 56%，精密度试验和重复性试验 ＲSD 分别为
2. 94%和 1． 34%，表明本实验方法精密度高，具有
良好的准确性和重复性。
据藏药志记载，总状绿绒蒿为藏药“才温”的代
用品，用于接骨，清热，止痛，活血化瘀;治头伤、骨
折、骨蒸、跌打损伤、胸背疼痛。五脉、全缘和红花绿
绒蒿则统称“吾巴拉”，根据花色不同进行区分。
“吾巴拉”可清热解毒，利尿，消炎，止痛;主治肺炎、
肝炎、头痛、水肿、皮肤病、肝与肺的热症［2］。由此
可见，这两类药材的用途和功效具有较大差别，这与
我们的差异性分析结果基本吻合。
现代药理研究表明，黄酮类化合物多对血液、血
管有活性作用，其中槲皮素、木犀草具抗菌、抗病毒
作用［9，10］，这与绿绒蒿属植物所具有的清热、解毒、
消炎、止痛等功效相符合［3，4］。藏医用药习惯多以
五脉绿绒蒿作为藏药“吾巴拉”的上品，全缘和红花
绿绒蒿则以花色区分来分别加以利用［2］。实验结
果表明(见表 4)，五脉绿绒蒿总黄酮含量比全缘和
红花绿绒蒿的总黄酮含量高出一倍多，且差异显著，
这说明以其为藏医用药上品是具有一定科学道理
的。
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