全 文 ：药物分析杂志 Chi n J Ph ~ A n la Z(X) 5
,
25 ( l) 一 2 1 一
飞蓬属多种植物的化学成分含量研究 ’
胡宇慧 , 张浩“ , 张志锋
(四川大学华西药学院 成都 61 创科 l)
摘要 目的 : 比较飞蓬属五种植物中总黄酮及灯盏乙素 ( s cu et n蔽 n) 的含量 ;建立灯盏乙素的 RP 一 H PCL 测定法 。 方法 : 以芦
丁为对照品 , 比色法测定总黄酮的含量 ;采用 O D S 柱 ,甲醇 一 水 一 冰醋酸 ( 3 :8 6 :2 0 . 8) 为流动相 ,检测波长 335 nm ,测定灯盏乙
素的含量。 结果 : 四川产的多舌飞蓬中总黄酮含量最高 , 四川产的飞蓬中灯盏乙素含量最高。 结论 :所建立的灯盏 乙素的 RP
一 H PCL 测定法准确 ,简便 ,灵敏度高 , 重复性好 ,可以用于飞蓬属多种植物中的灯盏乙素的含量测定 。 同时为我们进一步开
发飞蓬属植物提供了理论依据。
关键词 : 飞蓬属 ;总黄酮 ;灯盏乙素 ; 比色法 ; RP 一 H PCL
D e et r而an it o n F l a v o no id s a dn S c u t e l a ir n in H e r b s o f E igr e or n g e n u s
H U Y u 一 h u i , ZH A N G H a o 巾 , Z H AN G Zh i 一 fe n g
( S
e hol
o f p h
~
y , S i e hu an U n i v e rs i ty
,
C h e n g du 6 1《洲M I
A b st r a c t o bj e c柱v e : oT e o m Paer w i t h t h e e o n t e n t o f t o alt fl va o n o id s an d s e u t e l iar n
, a n d ot e s tab l i
s h a m e ht o d ot
d e t e mr i
n e s e u t e l如 n 场 RP 一 H P LC . M e ht o ds : oT t ak e R u t in a s er fe r e n e e , an d d e t e mr i n e d ot t al fl a v o n o id s 场 v i s
e o l o ir m e itr e a n aly
s i s ;hT
e s a m p l e w as s e p ar at e d o n an O D S
一 18 e o l u m n ,仆 e m o b il e ph a s e w a s m e th a n o l 一 w a t e r -
i e e ac e it e a e id ( 3 8
: 6 2 : 0
.
8 )
.
hT
e d e t e mr i
n at i o n w va e l e n hgt w as 3 3 5
n m
.
eR
s ul st
: t o t al fl vao
n o id s w q s ht e h ihg
e s t i n
E r ige or
n m u l t i r a d i a t u s
,
an d ht
e e o n t e n t o f s e u t i l iar
n in E r ige or
n a e e r w a s h ihg
e r t h an o ht e sr
.
C o n d喊 o sn : hT e
m e ht ed
s
wer
p er e i s e
, e
on
v en i e n t声 p or d u e ibl e for d e temr i n a it o n of s e u t el 如 n i n rE ige or n g e n u s
.
A t ht e sa m e * im e
,
i t ig
v e u s s o m e s e i e nt i if e i fon mr
a ti o n fo r d e v e lo P i n g ht e m fu hrt
e r
.
K e y wo
r ds : E r ig
e r o n g e n u s : to ta l fl va o n o id s ; s e u t e l iar
n : v i s e o l o ir m e itr e an al y
s i s ; RP 一 HPL C
菊 科 飞 蓬 属 植 物 短 草 飞 蓬 「rE ige r on l 实验材料
6 r e o i , e叩 u 。 ( v a n t . ) H a n d一 M a z z . 〕 [` ]在临床上用 多舌飞蓬 〔￡ r咭 e r。 。 m u zt i r a j i a r。 ( h n沮 e . )
于治疗心脑血管疾病 ,但产地及资源极为有限叫 。 eB in h . 」, 20 1年 7 月采集于四川甘孜县新路海 , 药
同属其它种类却少见有研究及应用报道 。 青藏高 材样品编号 01 。 短草飞蓬「E . br o isc aP us ( V an t . )
原地区本属植物种类众多 ,资源丰富 , 许多种类在 H an d一 M az z . ] , 2 0 01 年 7 月采集于云南迪庆藏族
少数民族地区有用药历史 。 为了开发新 的药源 , 自治州帕拉海 , 药材样品编号 02 。 长茎飞蓬 【.E
作者对飞蓬属不同种类中总黄酮 ( ot t d n va on io ds ) el o gn at us eL deb . 〕 , 2 0X() 年 7 月采集于四川卧龙 , 河
及灯盏乙素 ( s cu t el iar n) 进行 了含量测定 , 同时建 滩 ,药材样品编号 03 。 飞蓬【E . a ce ; L . 〕 , 2以刃 年 7
立了灯盏 乙素的 R P 一 H P LC 测定法 , 可用 于灯盏 月采集于四川甘孜县 ,药材样品编号 04 。 绵毛飞蓬
乙素的各种药剂 、 药代学的研究 。 药材 由作者采 〔 .E er io ca lyx L 」20 1 年 7 月采集于四川甘孜州德
集并鉴定 。 格县雀儿山五道班下 ,药材样品编号 05 。
* 国家教育部博士点基金 ( 2 0( 犯 06 10 8 9)
* 通讯联系人 (~
s即 n id gn au ht o r )
一 22 一 药物分析杂志 Chi n J Ph arm An al ZX)( 5 , 2 5 ( l )
2 比色法测定总黄酮含量
2
.
1 仪器与试药 日本岛津 UV 一 2 01 紫外分光
光度仪 ,芦丁 (中国药品生物制品检定所 ) , 其它试
剂为分析纯 。
2
.
2 总黄酮的含量测定
2
.
2
.
1 标准溶液的制备 精密称取无水芦丁 20
m g
,置 10 m L 量瓶中 , 加适量 60 % 乙醇 ,水浴微热
使溶 ,放冷 ,摇匀 ,定容 (每 1 m L 含芦丁 .0 2 m g ) 。
2
.
2
.
2 标准曲线 精密吸取标准溶液 0 . 0 , 1 . 0 ,
2
.
0
,
3
.
0
,
4
.
0
,
5
.
0 m L 适量 , 用 30 % 乙醇使成 5 . 0
m 1
) ,精密加亚硝酸钠溶液 ( 1、 20 ) 0 . 3 m L , 摇匀 , 放
置 6 m in ,再加硝酸铝 ( 10 10 ) 0 . 3 m L , 摇匀 , 放置 6
而 n ,加 N a O H 试液 4 m L ,蒸馏水定容到 10 m L , 在
5 or n m 波长测吸收度 ,绘制标准曲线 ,得标准方程 :
C = 0
.
0 8 3A + 0
.
0 0 4 r = 0
.
9 9 9 2
2
.
2
.
3 样品测定 分别取各样品药材全草 5 . 0 9 ,
粉碎成粗粉 ,用 80 % 乙醇在 80 ℃水浴中提取 3 次
(第一 、二次各 Z h ,第三次 l h ) , 乙醇每次 50 mL , 趁
热过滤 ,合并滤液减压浓缩至浸膏 。 将浸膏用 60 %
乙醇溶解 ,定容到 10 m L 。 精吸 2 m L , 60 % 乙醇定
容到 10 rnL 量瓶中 ,再精密吸取 0 . s fnL 置 10 m L 量
瓶中 ,按标准曲线下 自“ 用 30 % 乙醇使成 5 . 0 m L , ”
开始测定 ,从标准曲线求出各样品药材总黄酮的含
量 。 结果见表 1 。
3 灯盏乙素 R P 一 H P L C 含量测定
3
.
1 仪器及试药 岛津 L C 一 6 A 泵 , S P D 一 6 A V 型
紫外检测器 、浙江大学 NZ o o 色谱工作站 。 灯盏 乙
素对照品 ( 中国科学院昆明植物所孙汉董教授提
供 ) ;其它试剂为分析纯 ;水为超纯水 。
3
.
2 实验方法及结果
3
.
2
.
1 检测波长的选择 依卫生部颁发的药品标
准 ,灯盏乙素 HPL C 检测波长为 335 n m 。
3
.
2
.
2 色谱条件 S hi m p a e k C CL 一 O D S 柱 ( 6 . 0
m m x 15 e m
,
5 林m ) , 甲醇 一 水 一 冰醋酸 ( 3 8 : 6 2 :
0
.
5 )
, 流速 1 . 0 m L · m i n 一 ` ,柱温 3 5 ℃ ,检测波长 3 3 5
n m
。 以灯盏乙素为对照 品 , 采用外标法峰面积定
量 ,进样量为 10 林L 。
人~ J ~ ~` 一儿~ 习` ~ J - 勺` ~ 日` ~ J ~ ~ J一~ 上~ J ~ es L es司`
0 4 8 16 2 0 2 4 28
A
. 1 . . … 1 二0 10 2 0 30 4 0B . 皿 1 . 吸 己 . 1 二 10 10 20 3 0 4 0C
~ J es es es es j e es es es es」 es es es es es j es es es es es 」 es es es es es j es es es es es 」 es es es es es j es
0 10 20 30 40
D
~ 儿~ ~ - - J 目- -
J ~ 一~ ~ J ~
e
~ 日L
e
`
~几~ ~ ~ ~ ~ J~ ~ ~ ~ 曰 es `一 J e 月 es j es es es es
0 10 2 0 30 4 0
E
… 1 1 . … 10 10 2 0 3 0 40F 0 10 2 0 3 0 40 t ./ i n图 1
F ig l
灯盏乙素对照品和样品色谱图
hT
e e h r o m at o gr 田n of
A
. 对照品 ( e h e面 c己
飞蓬 K e肠拜g “ `。
r e fe r e n c
, 〕 u * , 11月石。
e s
ub
s st nL c
F
. 飞蓬 .E ace ;
助 d s am Ple s
e
) B
. 灯盏乙素 ( 。 ) sc u elt ~ C
. 短草飞蓬 .E b , ics aP o D .多舌飞蓬 肠妙阳 n 。 以“ ar id时 us E . 长茎
G
.绵毛飞蓬 .E杭 co a恤
1
.灯盏乙素 ( cs ut en a ir n )
药物分析杂志h Cin Jh Pm r aAn a1200 5
,
25 ( l ) 一 23 一
材中灯盏乙素含量 ,结果见表 1 。
表 1 样品测定结果
aT 卜1 几 . 到绍川坛成 d e扭” 口肠旧“胭
总黄酮 / % 灯盏乙素 /%
06724581C
.1nU7802叹去么.3屯
3
.
2
.
3 对照品的含量测定 采用面积归一法 ,测得
灯盏乙素的含量大于 9 % , 可以作为含量测定的对
照品 。
3
.
2
.
4 线性关系的考察 精密称取灯盏乙素对照
品 1 . 9 6 m g ,配制成 3 . 9 2 , 7 . 8 4 , 19 . 6 , 3 9 . 2 , 7 8 . 4 卜g
· 血 一 ’ 5 种浓度甲醇液 , 进样 10 林L 。 以峰面积 ( )Y
对进样量 ( X )回归 ,得回归方程 :
Y = 一 5
.
7 13 x 10 3 + 8
.
5 16 x 10
3
X r = 0
.
9 9 9 5
线性范围 3 . 9 2 一 7 8 . 4 林g · m L 一 ’ 。
3
.
2
.
5 精密度考察 称取短覃飞蓬 1 . 0 9 , 按样品
含量测定项下操作 ,分别在 0 , 2 , 4 , 6 , s h 进样 , 以灯
盏乙素的峰面积计 ,其 R s D = 1 . 2% 。
3
.
2
.
6 重复性考察 分别精密称取 5 份短草飞蓬
粉末 1 . 0 9 ,按样品含量测定项下 ,分别进样 , 以灯盏
乙素的峰面积计 , R s D = 0 . 6% 。
3
.
2
.
7 回收率实验 将高 、 中、 低浓度的对照品溶
液分别加人已测定含量的适量短草飞蓬粉末 ,依法
提取后测定加样回收率 ,每浓度平行实验 3 次 ,取平
均值 。 结果得到 3 个浓度的加样 回收率分别为
9 7
.
8 7%
,
9 9
.
1 3%
,
9 8
.
9 4%
,
R SD 分 别 为 1 . 2% ,
0
.
4%
,
0
.
6%
。 从以上实验结果可 以证明本测定方
法灵敏 、准确 、精密度高 、 重现性好 ,可用于飞蓬属药
材中灯盏乙素的含量测定 。
3
.
2
.
8 样品含量测定 精密称取干燥 、粉碎后的五
种药材样品粉末适量 , 加甲醇 一水 ( 1 : 1 ) 20 m L , 超
声振荡提取 30 m in Z 次 ,提取液定容到 50 m L ,精密
稀释到与对照品相近浓度 , 按上述色谱条件测定药
多舌飞蓬 百心己~ . o lt lar ida t。
短孽飞蓬 .E 乙eT而 c aP uS
长茎飞蓬 .E el 。昭 a ha
飞蓬乙 aC即
绵毛飞蓬 丑 e 戊oc a lyx
4 讨论
4
.
1 在所实验样品中 ,总黄酮和灯盏乙素含量并非
呈正比关系 ,四川产的多舌飞蓬中总黄酮含量最高 ,
而飞蓬中灯盏乙素含量最高 。
4
.
2 在灯盏乙素 即 一 HPL C 含量测定实验中 , 我
们对药材样品进行了不同溶剂 ( 甲醇 、 甲醇 一 水 ( 1
: l )
、不同提取方法 (超声提取 、 回流提取 )对灯盏乙
素提取效率的比较 , 发现用甲醇 一水 ( 1 : l) 超声提
取 30 m in Z 次 ,提取效率最高。
4
.
3 本实验建立了 IR, 一 HLP C测定飞蓬属植物中
灯盏乙素含量的方法 , 简便可靠 ,易于操作 。
参考文献
1 ChP (中国药典 ) . 19 7 7 . V Ol l (一部 ) : 24 5
2 Y u H O l l g 一 y’u an (俞宏渊 ) , CEH N oZ ng 一 il an (陈宗莲 ) , Stu 衡 。
A比币 ic 己 c u lt u re of E凡g e or n b二幼c aP 。 (灯盏花的家化栽培 .)
A c t a oB
t a n ica uY
n
an
n记 a (云南植物研究 ) , 2X() 2 , 24 ( 3 ) : 1 15
(本文于 2 0 3 年 1 月 20 日修改回 )