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钩藤属植物部分品种药材钩藤碱成分的分析



全 文 :[收稿日期] 20120217(006)
[基金项目] 广西科学基金项目应用基础研究专项(桂科基
0991007) ;广 西 壮 药 质 量 标 准 研 究 项 目
(MZY2010074)
[通讯作者] * 黄瑞松,主任药师,硕士生导师,从事中草药化
学分析和质量标准研究,Tel:0771-3130064,E-
mail:hrs. 3130064@ 163. com
钩藤属植物部分品种药材钩藤碱成分的分析
黄瑞松1* ,张鹏1,朱意麟2,严克俭3,覃冬杰1
(1. 广西民族医药研究院,南宁 530001;2. 广西中医学院,南宁 530001;
3. 广西中医药研究院,南宁 530022)
[摘要] 目的:探索钩藤属部分品种钩藤碱成分的含量,为评价这些品种药材质量提供试验依据。方法:应用 HPLC 测
定钩藤属攀茎钩藤、侯钩藤、毛钩藤、倒挂金钩、北越钩藤和华钩藤 33 批不同产地药材钩藤碱含量。采用 Gemini C18色谱柱
(4. 6 mm × 250 mm,5 μm) ,流动相为甲醇-水(含 0. 002 mol·L - 1三乙胺,用冰乙酸调 pH 7. 5) (64∶ 36) ,流速为 1. 0 mL·min - 1,
检测波长 254 nm。结果:攀茎钩藤和侯钩藤有 5 批样品可检出钩藤碱,但含量均较低,其余样品均未能检出钩藤碱。结论:试
验所用钩藤属不同品种质量有所差异,同一品种质量随着产地不同而异。
[关键词] 钩藤属;品种;产地;钩藤碱
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2012)08-0125-04
The Analysis of Rhynchophylline Contents in Part of
Uncaria Schreb. Plant Breeds
HUANG Rui-song1* ,ZHANG Peng1,ZHU Yi-lin2,YAN Ke-jian3,QIN Dong-jie1
(1. Guangxi Academy of Minority Nationality Medicine and Pharmacology,Nanning 530001,China;
2. Guangxi Traditional Chinese Medical University,Nanning 530001,China;
3. Guangxi Academy of Traditional Chinese Medicine,Nanning 530022,China)
[Abstract] Objective:To probe rhynchophylline contents in part of Uncaria Schreb. plant breeds,and
further provide experimental basis for evaluating the quality of medicinal materials. Method:Rhynchophylline in
Uncaria Sandens,U. rhynchophylloides,U. hirsuta,U. lancifolia,U. homomalla and U. sinensis from 33
different producing areas were determined by HPLC. HPLC column was Gemini C18 (4. 6 mm × 250 mm,5 μm) ,
mobile phase was methanol-0. 002 mol·L - 1 triethylomine (pH value 7. 5,adjusted with acetic acid) (64 ∶ 36) ,
flow rate was 1. 0 mL·min - 1,and detection wavelength was 254 nm. Result:5 batches of sample in U. Sandens
and U. rhynchophylloides contained rhynchophylline,but content of rhynchophylline was low. The others do not
contain rhynchophylline. Conclusion:The different breeds of Uncaria Schreb. plant vary in quality,while the
quality of the same breed varies in different producing area.
[Key words] Uncaria Schreb.;breed;producing areas;rhynchophylline
钩藤为中医方剂常用药材,也是许多中药制剂
的原料药材,如“天麻钩藤颗粒”、“复方钩藤片”、
“清脑降压片(胶囊、颗粒)”等。2010 年版《中国药
典》钩藤药材项下规定其基原为茜草科钩藤属的 5
个品种:钩藤 Uncaria rhynchophylla、大叶钩藤 U.
macrophylla、毛钩藤 U. hirsuta、华钩藤 U. sinensis、
无柄果钩藤 U. sessilifructus[1]。文献记载,我国钩藤
属植物有 11 种、1 变型[2]。广西是钩藤属植物的主
产区,该属植物在广西有 10 种,除了《中国药典》规
定的上述 5 个品种以外,广西还有攀茎钩藤 U.
Sandens、侯钩藤 U. rhynchophylloides How、倒挂金钩
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第 18 卷第 8 期
2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 8
Apr.,2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.08.052
U. lancifolia、北越钩藤 U. homomalla 和平滑钩藤
U. laevigata [3]。文献记载,钩藤属植物多含吲哚类
生物碱成分(如钩藤碱和异钩藤碱等)[4]。笔者的
调查表明,钩藤属植物的不同品种在广西壮、瑶民间
中均作为钩藤类药材应用。过去人们对《中国药
典》收载品种的质量关注较多,但对钩藤属其他品
种的质量关注较少。最近笔者分别报道了广西钩藤
属植物大叶钩藤、无柄果钩藤和钩藤等药材中钩藤
碱含量分析[5-7]。为摸清钩藤属其他品种钩藤碱成
分的含量,本文采用 HPLC 对广西不同产地攀茎钩
藤、侯钩藤、毛钩藤、倒挂金钩、北越钩藤和华钩藤等
33 批样品(带钩茎枝)的钩藤碱含量进行测定分析。
1 材料
1. 1 仪器 LC-20AT 高效液相色谱仪(带自动进
样器) ,二极管阵列检测器,LC solution 色谱工作站
(均为日本岛津公司) ;SB3200DTS 双频超声清洗仪
(功率 180 W,频率 40 kHz,宁波新芝生物科技股份
有限公司) ;雷磁 pHS-3CpH 计(上海精科) ;XS205
电子天平(瑞士梅特勒公司) ;EASYPURE Ⅱ超纯水
器(美国热电公司)。
1. 2 药品与试剂 不同品种钩藤药材样品(带钩
茎枝)共 33 批,全部样品的植物标本分别经广西中
医学院刘寿养副教授、朱意麟讲师及广西中医药研
究院严克俭助理研究员鉴定,分别为毛钩藤、华钩
藤、攀茎钩藤、侯钩藤、倒挂金钩和北越钩藤;钩藤碱
对照品为上海融禾医药科技有限公司提供(批号
100603,含量 > 98%) ;甲醇为美国 Fisher Scientific
(色谱纯) ;水为自制(超纯水) ;其余化学试剂为分
析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Gemini C18色谱柱(4. 6 mm × 250
mm,5 μm) ;流动相为甲醇-水(含 0. 002 moL·L - 1三
乙胺,用冰乙酸调 pH 至 7. 5) (64 ∶ 36) ,流速为 1
mL·min - 1,柱温为 35 ℃,检测波长为 254 nm。
2. 2 对照品和供试品溶液的制备 取钩藤碱对照
品适量,精密称定,加 75%甲醇制成约 10 mg·L - 1的
溶液,作为对照品溶液;取钩藤粉末(过 60 目筛)约
0. 2 g,精密称定,置 50 mL 带塞锥行瓶中,精密加入
75%甲醇 15 mL,密闭,称定质量,静置 60 min,超声
提取 40 min,放冷,再称定质量,用 75%甲醇补足减
失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
2. 3 专属性试验 分别吸取 2. 2 项下的对照品、供
试品(15 号样品)溶液各 20 μL 进样,按 2. 1 项色谱
条件试验。结果:供试品溶液色谱图中有与钩藤碱
保留时间相同的吸收峰。说明本方法测定钩藤碱含
量专属性强,见图 1。
1. 钩藤碱
图 1 钩藤碱对照品(A)、供试品溶液(B)的 HPLC 色谱
2. 4 检测限和定量限 分别取钩藤碱对照品甲醇
溶液(约 1. 0 mg·L - 1)进行稀释,以信噪比为 2 ∶ 1时
注入仪器的量作为检测限,以信噪比为 10 ∶ 1时注入
仪器的量作为定量限。结果钩藤碱的检测限为
0. 000 5 μg,定量限为 0. 002 μg。
2. 5 线性关系 分别精密吸取钩藤碱对照品甲醇
溶液(0. 104 5 g· L - 1)0. 1,1,2,4,6,8 mL,各加
75%甲醇定容至 10 mL,即得。分别精密吸取上述
稀释液 20 μL,测定峰面积,以峰面积积分值作为纵
坐标,钩藤碱进样量(μg)作为横坐标,进行直线回
归。回归方程为:Y = 1. 945 × 106X - 2. 232 × 104
(r = 0. 999 8) ,钩藤碱在 0. 020 ~ 1. 670 μg 与峰面
积呈良好的线性关系。
2. 6 精密度试验 取同一供试品溶液(15 号样品)
重复进样测定 5 次。结果 5 次测定供试品溶液钩藤
碱峰面积分别为 80 524,78 458,78 259,79 645,
78 255,RSD 1. 3%。
2. 7 重复性试验 取同一药材平行制备 6 份供试
品溶液(15 号样品)进行测定。结果 6 份样品钩藤
碱 含 量 分 别 为 0. 017%,0. 016%,0. 016%,
0. 017%,0. 016%,0. 016%,RSD 1. 4%。
2. 8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液(15
号样品)分别于 0,2,4,6,8,24 h 进样测定。结果各
次测定钩藤碱峰面积的分别为 80 524,79 645,
79 666,79 010,78 871,79 276,RSD 0. 8%。
2. 9 加样回收试验 采用加样回收法测定。取已
知含量的同一药材粉末(15 号样品)约 0. 1 g 共 6
份,置具塞锥形瓶中,分别加入新配制的钩藤碱甲醇
溶液(0. 001 g·L - 1)15 mL,按照 2. 2 项方法制备供
试液。各精密吸取供试液 20 μL 进样测定。结果钩
藤碱含量平均回收率为 95. 39%,RSD 1. 5% (n =
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第 18 卷第 8 期
2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 8
Apr.,2012
6) ,见表 1。
2. 10 样品的测定 分别取钩藤碱对照品、表 2 中
各药材样品,照 2. 2 项方法制备对照品和供试品溶
液,照 2. 1 色谱条件进行钩藤碱含量测定(以干燥
品计算) ,见表 2。
3 讨论
文献记载,钩藤碱为钩藤药材降血压的有效成
分[7],测定钩藤属植物药材的钩藤碱含量,可从某
个方面探索钩藤药材的药效。由表 2 可知,上述样
表 1 加样回收率试验(n = 6)
No.
样品含量
/mg
加入量
/mg
实测量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
1 0. 015 3 0. 015 4 0. 029 9 94. 79
2 0. 014 6 0. 015 4 0. 029 4 95. 37
3 0. 014 6 0. 015 4 0. 029 6 97. 38
95. 39 1. 5
4 0. 014 8 0. 015 4 0. 029 5 95. 50
5 0. 014 5 0. 015 4 0. 028 9 93. 22
6 0. 014 2 0. 015 4 0. 029 0 96. 08
表 2 不同品种和不同产地钩藤药材钩藤碱含量(n = 2)
编号 植物品种 产地 采集时间 含量 /%
1 毛钩藤 U. hirsuta Havil. 南宁市西乡塘区 2009. 1 -
2 毛钩藤 U. hirsuta Havil. 南宁市兴宁区 2010. 6 -
3 毛钩藤 U. hirsuta Havil. 隆安县龙虎山自然保护区 2010. 8 -
4 毛钩藤 U. hirsuta Havil. 龙州县武德乡 2007. 10 -
5 毛钩藤 U. hirsuta Havil. 龙州县上龙乡1 2010. 3 -
6 毛钩藤 U. hirsuta Havil. 龙州县上龙乡2 2010. 3 -
7 毛钩藤 U. hirsuta Havil. 桂平县金田林场 2010. 4 -
8 毛钩藤 U. hirsuta Havil. 武宣县东乡 2010. 4 -
9 毛钩藤 U. hirsuta Havil. 融水县四荣乡 2010. 11 -
10 毛钩藤 U. hirsuta Havil. 环江县明伦镇 2009. 9 -
11 华钩藤 U. sinensis (Oliv.)Havil. 全州县大西江镇 2010. 4 -
12 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 南宁市兴宁区 2010. 6 -
13 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 南宁市邕宁区 2010. 2 -
14 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 凭祥市友谊乡 2010. 3 -
15 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 龙州县下冻乡 2010. 3 -
16 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 龙州县八角乡 2011. 2 0. 016
17 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 宁明县那楠乡 2010. 3 -
18 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 崇左市江州区 2010. 7 -
19 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 昭平县马江镇 2010. 4 -
20 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 东兰县武篆镇 2010. 4 0. 045
21 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. . 靖西县南坡乡1 2010. 6 0. 013
22 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 靖西县南坡乡2 2010. 6 -
23 攀茎钩藤 U. Sandens(Sm.)Hutch. 靖西县安德乡 2010. 6 -
24 侯钩藤 U. rhynchophylloides How. 邕宁县四塘镇 2009. 4 0. 067
25 侯钩藤 U. rhynchophylloides How. 横县镇龙乡 2010. 5 0. 007
26 侯钩藤 U. rhynchophylloides How. 浦北县小江镇 2010. 5 -
27 侯钩藤 U. rhynchophylloides How. 钦州市钦南区 2010. 8 -
28 侯钩藤 U. rhynchophylloides How. 上思县红旗林场 2010. 8 -
29 侯钩藤 U. rhynchophylloides How. 德保县城关镇 2011. 12 -
30 倒挂金钩 U. lancifolia Hutchins. 靖西县桐德乡 2010. 6 -
31 倒挂金钩 U. lancifolia Hutchins. 那坡县得浮自然保护区 2010. 7 -
32 北越钩藤 U. homomalla Miq. 昭平县马江镇 2010. 4 -
33 北越钩藤 U. homomalla Miq. 上林县大丰镇 2010. 11 -
注:同一产地(市或县)不同地域采集的样品在产地后分别以 1,2……标明;未检出钩藤碱以“ -”表示。
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黄瑞松,等:钩藤属植物部分品种药材钩藤碱成分的分析
品除了攀茎钩藤和侯钩藤的 5 个产地样品可检出钩
藤碱成分外,其余样品未能检出钩藤碱成分。且含
有钩 藤 碱 的 样 品 中,钩 藤 碱 含 量 均 较 低,在
0. 007% ~ 0. 067%。从试验样品的产地看,除了华
钩藤只有 1 个产地,北越钩藤有 2 个产地,它们难以
说明问题以外,其余样品来源均在 3 个或 3 个以上
产地,样品均具有一定的代表性。试验结果提示,试
验所用的毛钩藤、攀茎钩藤、侯钩藤和倒挂金钩药材
与大叶钩藤、无柄果钩藤、钩藤药材的药效作用可能
有差异,特别是在入方剂时降血压作用方面的差异
应该给予足够的重视。
值得关注的是试验所用的毛钩藤 U. hirsuta 和
华钩藤 U. sinensis 虽然均为 2010 年版《中国药典》
收载的品种,但它们在钩藤碱是否含有方面与《中
国药典》收载的钩藤 U. rhynchophylla、大叶钩藤 U.
macrophylla、无柄果钩藤 U. sessilifructus 其他 3 个品
种相差甚大。根据笔者前期报道,广西 21 批大叶钩
藤药材均含有钩藤碱成分,以干燥品计算(余下同)
含量为 0. 143% ~ 0. 642%[5];15 批无柄果钩藤药材
中有 10 批可检出钩藤碱成分,含量为 0. 036% ~
0. 171%[6];28 批钩藤药材中有 11 批可检出钩藤碱
成分,含量为 0. 014% ~ 0. 386%。本文试验所用 10
批毛钩藤药材样品和 1 批华钩藤则均未检出钩藤
碱成分。提示 2010 年版《中国药典》收载的钩藤属
5 个品种在钩藤碱成分和药材质量上是有差异的,
有的品种差异甚至是很大的。2010 年版《中国药
典》在基原上将钩藤、大叶钩藤、毛钩藤、华钩藤和
无柄果钩藤等 5 个品种的带钩茎枝均统一作为钩藤
药材使用是值得商榷的。建议《中国药典》今后应
将上述 5 个品种的部分品种分列使用。
关于钩藤属植物不同品种药材的质量及药用价
值的评价是个复杂的问题,今后在不同品种的各种
主要成分分析结合生物碱类指纹图谱的测定及药效
学试验等方面有待深入研究。
[参考文献]
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[责任编辑 邹晓翠]
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第 18 卷第 8 期
2012 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 8
Apr.,2012