全 文 ：中 国 药 科 大 学 学 报
Jou m a lo fC i hn aP ham r
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括楼属种子类药材的蛋白电泳鉴别
董婷霞 徐国钧 金蓉变 徐路珊
(生药学教研室 )
瓜萎仁为常用中药 , 商品主要为葫芦科植
物括楼 rT ihc os a nt hes ikr ilo w “ 和中华括楼 .T
or st h or 瓜 i 的干燥成熟种子 . 我国南方以同属
植物种子作药用的有 15 种以上 , 品种比较混
乱 . 日本木岛正夫利用蛋白电泳对杏仁 、 桃仁
进行了生药学分析 1 . 由于蛋白质具有比较稳
定的遗传性和分布广泛性 , 利用蛋白电泳谱图
进行种群鉴定 , 已得到多数分类学家的应
用 I洲 . 根据种子富含蛋白这一特性 , 我们利
用聚丙烯酞胺凝胶电泳对括楼属 rT ihc os a二
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、 丝瓜属 L u fQ 、 苦瓜属 材om o r id c a 、 冬
瓜属 B朋in ca sa lg 种种子的可溶性蛋白进行谱
带分析 . 同时比较了不同贮藏期 、 不同产地种
子的可溶性蛋白谱带 . 并依此谱带对商品药材
进行了鉴定 .
一 、 材料与来源 见表 1 .
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苦瓜
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丝瓜
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二 、 方法 器厂 ) ; 盘状电泳槽 、 垂直板电泳槽各一套 ;
1
. 仪器及试剂 S C R 电泳仪喃京大学仪 岛津 C S一 91 0 双波长薄层扫描仪 . 试剂按文献
19 89 年 12 月2 日收稿 国家自然科学基金资助项 目
25 0 中 国 药 科 大 学 学 报 1 2卷
配制 I’ ; ] 浓缩 胶浓度 3 . 6%, 分 离胶浓 度
.8 5%
, 胶板厚 1 . s m m .
2
. 样品制备 样品 1 . 0 9 去壳后 , 加人稀
释 4 倍量的浓缩胶缓冲液 ( p H .6 7) 10 m l , 研
磨 , 离心 2 4 m i n (4 o o o r / m i n ) , 取上 清液 ,
加人等体积 40 % 蔗糖混匀 , 置冰箱备用 .
3
. 电泳 点样量 50 川 , 以 1% 澳酚兰为
前沿示踪剂 . 电泳开始时 , 控制电压在 1 10
伏 , 电流约 1 m A / 管 (孔 ) , 进人分离胶后调
`电流至 Z m A / 管 (孔 ) , 电泳过程中保持电流
不变 , 待指示剂至距末端 1 c m 时 , 即可停止
电泳 (约需 3 h / 次 , n = 5) .
4
. 染色及脱色 取 出凝胶 , 常温下在 1%
考马斯亮蓝染色液中染色 3 h , 水洗后在 7%
醋酸中脱色 , 直至背景无色 . 记录并拍照 .
5
. 扫描 岛津 C S一9 1;0 扫描波长 580
n m
, 参比波长 4 5 0 n m ; 狭逢 10 x 0 . 2 4 m m ;
胶板扫描与记录纸速度同步 80 m m / m in .
三 、 结果与讨论
1
. 结果表明 , 同属不同样品谱带有明显
差异 , 近缘种间有共同谱带 , 也有不 同谱带 ,
如工瓜亚属的王瓜 、 杏籽括楼 、 全缘括楼 . 各
属间差异较大 . 丝瓜属 ( L u fQ ) 在此条件下 ,
谱带较弱 .
2
. 对 不 同产地 同种 药 材进 行了谱带分
析 . 1 9 8 7 年产于四川南川 、 广西桂林 、 J、 一西
博白 (野 生 ) 的长警括楼种 子 , 电泳谱带相
同 , 但博白产的偏低些 . 同年产于山东 、 浙
江 、 陕西 、 江苏的括楼 , 谱带位置相同 , 但深
浅 、 含量均有差异 .
3
. 对不同贮藏期的种子进行谱带分析 .
19 8 6 年和 19 8 7 年南川产的长警括楼电泳谱图
相同 , 但 19 86 年产的谱带浅 , 扫描峰比 1987
年低 , 蛋白含量变低 .
4
. 花叶括楼 、 湖北括楼 [6] 被归为长曹括
楼 , 作者两次到产地调查 , 发现二者从原植物
到种子外形 、 花粉粒形态 、 电泳谱图与长兽括
楼均有差异 . 花叶括楼和湖北括楼生长环境相
同 , 二者很相近 .
5
. 用聚丙烯酞胺凝胶电泳重现性好 , 不
同次 (三次以上 ) 电泳的谱带基本相同 , 差异
极小 . 两次制样 , 电泳谱带位置基本相同 . 说
明此法可用于种子类药材鉴别 。
6
. 本实验所用截叶括楼已 变质 , 电泳谱
速模糊 , 19 86 年产的括楼谱带发生变化也是
由于变质的缘故 .
关键词 括楼属 ; 种子可溶性蛋白 ; 电泳
致 谢 本文承何执中 、 周荣汉教授审阅 , 并予
以实验指导 .
参 考 文 献
木岛正夫 , 田端 守等 . 尸、 。 属种子类生药 。 研究 ( I )
iD “ 电气泳动法二 去备杏仁 、 挑仁刃研究 (毛。 1) . 生药学
杂志 (口 ) 一9 6 9 ; 23( 2 ) : 7 8一 82
汪恩涛 . S D S一聚丙烯酸胺凝胶电泳用于根瘤菌鉴定的研究 .
徽生物学通报 1 98 7 ; 一4 (2 ) : 8卜 9
胡志昂 . 裸子植物的生化系统学 (四 ). 衫科植物的种子蛋白
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胡之璧 . 垂盆草和狭叶垂盆草的比较研究 . 植物分 类学报
19 8 1; l 9( 3) : 3() 8
衰绍华 , 杨中汉 . 桂物生理生化实脸 . 北京 : 教育出版 社 ,
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路安民 , 陈书坤 . 中国植物志 . v ol . 73 第一分册 . 北京 : 科
学出版社 , 19 8 6 : 2 8 8
E l e e t r o Ph o r e t ie I d e n t i fl e a t i o n o f S o m e S e e d s o f rT i e h o s a n zh e s
D o n g T i n g x i a
,
X u G u o j
u n , J i n R o n g l u a n
,
X u L u o s h a n
D e P a r tm e n t o f P h a r m a e o g n os y
14 k in d s o f sc e d so l u b le P r o te i n s o f rT ic h
o s a n r h“ w e r e a n a 1y sc d b y P o 1y a e y 1a m idc g e l e 1e e t r o Ph o cr t ie (P A G E )
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te r n s o f P r o te i n s e x i s te d a m o n g t h e d i cf re n t g e n e r a a n d s P e e ie s
, a n d t h e P r o te i n e o n t e n t s v a ir e d w i th s to r i n g 石m e .
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e r e w e r e n o d i st i n e t e h a n g e s a m o n g t h e as m e k in d o f s e e d s liv i n g i n d icf r e n t cr g i o n s
.
P A G E 15 a g o o d m e t h do
fo r i d e n ti fy in g t h e C h i n e即 m a te r ia ls , e s P . sc e d s , a n d i t 15 r e P r do u e ib le .
K e y w o r d s rT ic h
o s a n zh e s ; P o l y a e y la m id e g e l e le c t r o p h o r e t i e ; S e e d so l u b l e P r o t e i n s