全 文 ：园　艺　学　报　2008, 35 (8):1147-1154
ActaHorticulturaeSinica
收稿日期:2008-02-29;修回日期:2008-05-12
基金项目:国家自然科学基金项目 (30671419; 30700541);国家高技术研究发展计划专项项目 (2006AA100108;
2006AA10Z108);教育部高校博士点青年教师基金项目 (20070307034)
＊通讯作者 Authorforcorrespondence(E-mail:jfchen@njau.edu.cn)
黄瓜属 Ty1-copia类逆转座子逆转录酶序列的克隆
及分析
江　彪 , 娄群峰 , 刁卫平 , 陈龙正 , 张万萍 , 陈劲枫＊
(南京农业大学园艺学院 , 作物遗传与种质创新国家重点实验室 , 南京 210095)
摘　要:根据 Ty1-copia类逆转座子逆转录酶的保守区设计简并引物 , 通过 PCR扩增 , 从黄瓜属野生
种酸黄瓜 (CucumishystrixChakr.)和栽培黄瓜 (CucumissativusL.)中均扩增出 260 bp左右的目标条带。
扩增产物经纯化后克隆于 pGEM-TEasy质粒载体 , 选择阳性克隆 , 再经菌落 PCR鉴定 , 然后进行测序及序
列分析 , 获得了 21条来源于酸黄瓜和栽培黄瓜的逆转录酶序列 , 通过核苷酸聚类分为 5个家族。这些核苷
酸序列具有较高的异质性 , 主要表现为缺失突变 , 序列长度变化范围为 255 ～ 272 bp, 同源性范围为
27.0% ～ 98.1%。翻译成氨基酸后 , 有 4条序列出现终止密码子突变 , 6条序列表现出移框突变。 将这些
逆转录酶的氨基酸序列与已登录的不同物种同一类型逆转录酶的氨基酸序列进行聚类分析 , 表明它们可能
有共同的起源。
关键词:黄瓜;Ty1-copia类逆转座子;逆转录酶;异质性
中图分类号:S642.2　　文献标识码:A　　文章编号:0513-353X(2008)08-1147-08
TheCloningandAnalysisofReverseTranscriptaseofTy1-copia-likeRetro-transposonsinCucumis
JIANGBiao, LOUQun-feng, DIAOWei-ping, CHENLong-zheng, ZHANGWan-ping, andCHENJin-
feng＊
(ColegeofHorticulture, NanjingAgriculturalUniversity, StateKeyLaboratoryofCropGeneticsandGermplasmEnhancement,
Nanjing210095, China)
Abstract:UsingdegenerateoligoncleotideprimerscorrespondingtoconserveddomainsoftheTy1-copia
retrantransponreversetranscriptase, afragmentof260bpwasamplifiedbyPCRfromCucumishystrixandC.
sativus.TheampliconswereclonedintopGEM-TEasyvectorafterpurification, positiveclonesselectedand
identifiedbycolonyPCR, thensequencedandanalyzed.Twenty-onediferentsequencesofreversetran-
scriptasefromCucumishystrixandC.sativus`BeijingJietou wereobtained, andfivefamiliesweredistin-
guishedafterclusterandalignmentanalysesoftheirnucleotidesequences.Thesesequencesshowedhigh
heterogeneitymainlycharacterizedbydeletionmutation.Thelengthofthenucleotidesequencesvariedfrom
255to272 bp, andhomologyrangedfrom 27.0% to98.1%.Whentranslatedintoaminoacids, fourse-
quencespresentedstopcodonmutation, andsixsequencespresentedframeshiftmutation.Theaminocluster
andalignmentanalysesofthesesequenceswithotherreversetranscriptasesequencesfromotheraccessions
showedthattheymayhavethesameorigin.
Keywords:Cucumis;Ty1-copia-likeretrotransposons;reversetranscriptase;heterogeneity
DOI :10.16420/j.issn.0513-353x.2008.08.008
园　　艺　　学　　报 35卷
逆转座子 (retrotransposon)是真核生物中种类最多 、 分布最广的转座因子 , 其特殊的转座方式
使其成为植物核基因组的重要组成部分 , 通常占 DNA总量的一半以上 (Kumar＆Bennetzen, 1999),
有的物种如玉米中逆转录转座子甚至占到核基因组的 70% ～ 85% (Bevanetal., 1998), 在普通小麦
中甚至高达 90%以上 (Flavel, 1986)。由于逆转座子在基因组中的重要地位 , 其序列的克隆与分析
研究对于植物基因组组成 、进化与基因的表达调控研究均有重要的意义。
逆转座子包括长末端重复逆转录转座子 (longterminalrepeat, LTR)和非长末端重复逆转录转座
子 (non-longterminalrepeat, non-LTR)(Kumar, 1996;Grandbastien, 1998)。 LTR又可分为 Ty1-co-
pia类和 Ty3-gypsy类 (Voytasetal., 1992;Suoniemietal., 1998), 其中 Ty1-copia类在植物界广泛
分布 , 是研究最多的一类 (Flaveletal., 1992)。
迄今已在多种主要作物中研究分析了逆转座子的种类和组成 (Pearceetal., 1996;Rogers＆
Pauls, 2000;Alixetal., 2005)。目前黄瓜属中关于逆转座子的研究很少 。作者最近克隆获得了 Ty1-
copia类逆转子的 LTR区序列 , 并开发出了黄瓜属基于 Ty1-copia-LTR的 SSAP标记系统 (Lou＆Chen,
2007)。而有关该逆转座子具转录活性的部分 , 即逆转录酶序列尚未见报道 , 而逆转录酶序列的分离
克隆是深入研究逆转座子是否具有转录活性的关键 。
作者以 Ty1-copia类逆转录酶的保守序列设计简并引物 , 采用 PCR方法进行黄瓜属植物逆转录酶
序列的分离克隆 , 首次从黄瓜属植物基因组 DNA中分离克隆了 Ty1-copia类逆转座子部分逆转录酶序
列 , 并通过序列分析初步研究其变化特点 。
1　材料与方法
1.1　试验材料
共选用了黄瓜属中的 6个材料。一个为黄瓜属珍稀野生种———酸黄瓜 (CucumishystrixChakr.,
2n=24), 与栽培黄瓜的杂交亲和 , 采集于云南西双版纳 (Chenetal., 1997)。其余 5个均为栽培黄
瓜 (CucumissativusL.), 其中 `北京截头 由中国农业科学院蔬菜花卉研究所戚章春研究员提供 ,
经本实验室多代自交保存; 长`春密刺 购于新疆农业科学院园艺研究所 , 经本实验室多代自交保
存; 翠`玉 、 津`春 和 `津绿 等购自南京市蔬菜种子公司 。
1.2　DNA提取及逆转录酶扩增
植株长至第 5片真叶时 , 取刚展开的新叶 , 采用 CTAB法 (Murray＆ Thompson, 1980)提取基
因组 DNA, 利用琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭显色进行 DNA浓度的定量 。
参照文献 (Kumaretal., 1997)设计逆转座子的逆转录酶引物。上游引物为:5′-ACNGCNTTPy-
PyTNCAPyGG-3′;下游引物为 5′-APuCATPuTCPuTCNACPuTA-3′, 其中 N=A+T+C+G, Py=A+G,
Pu=T+C。
PCR反应体系为:DNA20 ng, 0.2 mmol· L-1 dNTPs, 2.0 μL10 ×Bufer(含 MgCl2), 1 U的
TaqDNA聚合酶 (购自 TaKaRa公司), 加双蒸水至 20μL。
扩增程序为:94 ℃ 1min;94 ℃ 1 min, 45℃ 1min, 72 ℃ 1 min, 40个循环;最后 72 ℃延伸 7
min;整个 PCR反应在 PTC-100TMPCR仪上完成。
1.3　PCR产物的回收 、克隆及转化
用 1%琼脂糖凝胶检测 PCR产物 , 并从凝胶上回收酸黄瓜和 北`京截头 两种材料的 PCR扩增
产物 , 用 BioSpin胶回收试剂盒回收。
回收产物经纯化后连接于 pGEM-TEasy载体 (Promega)上 , 转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞 ,
37 ℃培养 16 ～ 20 h后 , 蓝白斑筛选 , 挑取白色单克隆 , 在含有 100mg· L-1氨苄青霉素的 LB液体培
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　8期 江　彪等:黄瓜属 Ty1-copia类逆转座子逆转录酶序列的克隆及分析　
养基中培养过夜后 , PCR鉴定阳性克隆。
1.4　逆转录酶序列测定及序列分析
将鉴定为阳性的菌液送往上海英骏生物技术有限公司测序 。利用 DNAStar和 DNAMAN软件对获
得的逆转录酶序列进行分析。
2　结果与分析
2.1　PCR扩增结果 、 重组质粒的鉴定及测序
以逆转座子逆转录酶区域保守位点设计引物 , PCR结果表明 , 在酸黄瓜和 5个栽培黄瓜中均检测
到了逆转录酶序列 , 长度一致 , 均为 260bp左右 (图 1), 这与前人的报道 (Voytasetal., 1992)一
致 , 表明 Ty1-copia类逆转座子在酸黄瓜和栽培黄瓜中普遍存在 。
图 1　酸黄瓜和 5种栽培黄瓜中逆转录酶序列的 PCR扩增
M.Marker;1.酸黄瓜; 2.北京截头;3.津春; 4.津绿; 5.翠玉;6.长春密刺。
Fig. 1　PCRamplificationofreversetranscriptasefromCucumishystrixChakr.
andfivespeciesofCucumissativusL.
M.Marker;1.Cucumishystrix;2.BeijingJietou;3.Jinchun;4.Jinlǜ;
5.Cuiyu;6.ChangchunMici.
将以酸黄瓜和栽培黄瓜 `北京截头 为模板扩增得到的 260 bp左右的片段回收纯化 , 克隆测序
后 , 共得到 21条不同的序列 , 其中 6条来自酸黄瓜 (编号以 Chrt开头), 15条来自 北`京截头
(编号以 Csrt开头), 均与已报道的其它物种的 RT保守区域吻合 。
2.2　Ty1-copia类逆转录酶的异质性
所有 21条序列均与已知植物 Ty1-copia类逆转座子的逆转录酶序列有很高的同源性 , 说明其逆转
座子是真实的。
这些序列已提交到 GenBank中 , 登录号分别为:EU162101 ～ EU162106、 EU162109 ～ EU162122
和 EU162124。所有序列富含碱基 AT, AT与 GC的比例范围为 1.02 ～ 1.83, 与 Stergiou等 (2002)的
试验结果一致。
21条逆转录酶的核苷酸序列变化范围为 255 ～ 272 bp(表 1)。而前人的研究结果表明该序列长
度为 273bp(Voytasetal., 1992), 21条序列长度均少于 273bp, 都有不同程度的缺失 , 说明缺失是
造成黄瓜逆转录酶序列长度变化的主要原因。
从表 2可以看出 , 酸黄瓜中逆转录酶序列间同源性范围为 27.0% ～ 57.6%, 北京截头序列间为
30.1% ～ 98.1%, 两者所有序列间同源性范围为 27.0% ～ 98.1%。由此可看出 , 由同一简并引物获
得的逆转座子的逆转录酶序列并不完全一致 , 它们在长度 、 碱基变化上的多态性表明黄瓜属同一类逆
转座子存在高度的异质性 。
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表 1　黄瓜中逆转录酶序列的组成
Table1　Basecompositionofreversetranscriptaseincucumber
序列号 SequenceNo. 大小 /bpSize AT/GC 登录号 GenBanknumber
chrt1 266 1.66 EU162101
chrt2 260 1.43 EU162102
chrt3 255 1.63 EU162103
chrt4 263 1.35 EU162104
chrt5 272 1.62 EU162105
chrt6 261 1.51 EU162106
csrt1 258 1.69 EU162109
csrt2 265 1.76 EU162110
csrt3 263 1.44 EU162111
csrt4 263 1.33 EU162112
csrt5 266 1.80 EU162113
csrt6 257 1.02 EU162114
csrt7 264 1.72 EU162115
csrt8 263 1.59 EU162116
csrt9 264 1.72 EU162117
csrt10 264 1.69 EU162118
csrt11 263 1.33 EU162119
csrt12 263 1.46 EU162120
csrt13 263 1.29 EU162121
csrt14 266 1.83 EU162122
csrt15 266 1.83 EU162124
表 2　黄瓜中逆转录酶的序列差异百分率 (左下方)和同源性 (右上方)
Table2　Thedivergence(belowthediagonal)andpercentidentity(abovethediagonal)
ofreversetrancriptaseincucumber
chrt1 chrt2 chrt3 chrt4 chrt5 chrt6 csrt1 csrt2 csrt3 csrt4 csrt5 csrt6 csrt7 csrt8 csrt9 csrt10csrt11csrt12csrt13csrt14csrt15
1＊ 41.3 34.0 48.9 33.8 37.6 56.9 87.6 50.6 49.6 90.6 33.0 54.9 49.2 55.6 54.948.9 48.1 49.2 87.2 90.6
2 112.1 39.0 45.5 35.2 57.6 41.2 42.0 46.2 34.5 42.4 35.2 42.4 45.1 42.8 41.344.7 36.7 45.5 40.9 42.0
3 155.1 123.1 35.5 27.0 43.2 35.5 34.4 34.4 34.7 32.8 46.7 37.5 34.4 36.7 36.335.1 34.0 34.7 32.4 32.0
4 84.2 96.9 143.4 33.3 44.6 42.7 47.9 96.2 53.9 49.4 36.0 41.6 95.1 41.2 40.496.6 53.9 96.3 47.6 49.1
5 160.4 145.6 257.1 167.4 36.6 31.9 34.7 34.0 37.7 35.8 29.9 33.3 33.7 33.2 32.534.0 39.7 33.7 34.1 34.4
6 131.0 63.2 103.3 103.0 134.2 43.1 38.4 43.8 34.0 39.9 34.9 48.1 41.9 48.9 47.442.5 35.2 43.1 36.9 38.8
7 63.3 115.7 146.2 107.0 220.0 105.5 58.1 42.7 44.6 57.3 36.2 51.2 42.3 52.7 51.243.8 42.7 42.7 58.5 56.9
8 13.7 108.4 152.0 87.7 151.5 129.3 60.4 48.3 46.6 88.4 33.0 53.0 48.7 53.0 52.248.9 45.7 49.1 92.2 88.1
9 79.6 94.6 152.3　3.9 164.1 104.5 107.1 86.5 50.4 50.6 35.2 40.4 95.5 40.4 39.695.8 54.0 96.2 48.3 50.6
10 82.6 155.1 149.2 74.9 133.3 175.0 100.2 94.3 73.5 49.3 33.3 40.1 53.6 39.6 37.754.5 93.3 54.7 48.9 49.6
11 10.2 106.9 165.0 83.0 144.1 120.0 62.7 12.8 79.6 86.4 30.1 52.2 50.2 53.0 51.150.0 49.8 50.2 86.9 97.8
12 164.0 148.8 93.9 140.2 198.1 148.5 147.6 166.6 145.4 161.7 184.0 31.0 35.2 30.3 29.935.6 33.0 36.0 32.2 30.7
13 68.1 107.3 131.5 116.4 165.0 89.2 77.9 73.8 120.0 136.4 76.2 241.4 40.4 97.8 98.141.8 37.8 40.1 51.9 51.9
14 83.0 98.9 151.9　5.1 161.7 114.9 108.7 85.3　 4.7 75.9 80.7 145.4 121.7 40.4 40.195.5 54.7 96.3 49.8 50.9
15 66.1 105.6 135.9 118.0 161.9 86.6 73.7 75.8 120.0 127.1 74.0 247.8 　2.3 121.7 97.841.4 38.2 39.7 52.2 51.5
16 68.1 112.3 138.3 122.1 168.4 91.7 77.9 75.9 123.5 138.5 79.4 251.4 　1.9 123.1　2.3 40.7 37.1 39.3 51.9 50.7
17 84.2 99.5 146.3　3.5 158.7 113.2 102.3 85.3　 4.3 73.7 81.8 152.7 115.9　4.7 117.6 121.5 55.1 97.4 48.1 48.9
18 87.7 142.0 157.6 74.7 119.7 156.7 108.1 97.2 73.3　7.2 83.0 163.6 136.2 72.5 133.7 141.471.3 54.7 46.8 49.4
19 83.0 96.9 149.5　3.9 162.8 110.0 106.9 84.2　 3.9 72.9 80.7 140.2 123.3　3.9 125.2 127.1 2.7 72.4 49.1 50.2
20 14.2 114.5 168.4 89.0 154.4 138.5 59.7　 8.4 86.5 88.2 14.7 172.7 78.2 81.9 76.0 77.187.7 93.9 84.1 87.8
21 10.1 108.6 172.5 84.2 151.9 126.2 63.5 13.2 79.6 86.2　2.3 188.5 78.3 78.5 78.3 80.785.4 84.5 80.7 13.7
　　＊ 1:chrt1;2:chrt2;3:chrt3;4:chrt4;5:chrt5;6:chrt6;7:csrt1;8:csrt2;9:csrt3;10:csrt4;11:csrt5;12:csrt6;13:csrt7;
14:csrt8;15:csrt9;16:csrt10;17:csrt11;18:csrt12;19:csrt13;20:csrt14;21:csrt15.
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　8期 江　彪等:黄瓜属 Ty1-copia类逆转座子逆转录酶序列的克隆及分析　
2.3　逆转录酶的核苷酸序列和氨基酸序列分析
为阐明黄瓜中 Ty1-copia类逆转座子间的相互关系 , 利用 DNAStar对分离到的 21条逆转录酶序列
进行聚类分析 , 构建黄瓜中该类逆转座子的系统发育进化树 (图 2)。
根据进化树 branch的长度将把这 21条 RT序列分成 5个家族 (Family1 ～ 5), 代表由同一祖先而
来的遗传家系。其中 Family5只有一个序列 , 把它各自单独列为一族 , 与其余家族的遗传距离较大。
Family1、 Family2和 Family3分别包括 5个 、 4个和 9个序列 , 这 3个家族约占克隆总数的 86%, 说明
这 3个家族是构成黄瓜逆转座子的主要成分。
图 2　黄瓜逆转录酶序列进化树
Fig. 2　Phylogenetictreeofseqencesofreversetranscriptaseincucumber
将这 21个逆转录酶翻译氨基酸 , 参照 Ty1-copia类逆转座子逆转录酶基因的氨基酸保守序列 , 在
翻译过程中有 6条序列发生了移框突变 , 分别是:chrt3 (第 39个氨基酸处)、 chrt6 (第 48个氨基酸
处)、 csrt1 (第 57个氨基酸处)、 csrt7 (第 37个氨基酸处)、 csrt9 (第 37个氨基酸处)、 csrt10 (第
37个氨基酸处)。有 4条序列即 chrt3、 chrt5、 chrt6和 csrt3发生了终止密码子突变 , 其中 chrt3在第
25、 26、 57、 62和 72个氨基酸处发生了 5个终止密码子突变;chrt5在第 76个氨基酸处发生了 1个
终止密码子突变;chrt6在第 75个氨基酸处发生了 1个终止密码子突变;csrt3在第 23个氨基酸处发
生了 1个终止密码子突变 (图 3)。因此推测 , 移框突变和终止密码子突变也可能是逆转座子异质性
的重要原因 。
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园　　艺　　学　　报 35卷
图 3　黄瓜中逆转录酶氨基酸序列比较
＊终止密码子;“.” 为优化联配而产生的缺口;下划线的氨基酸为移框翻译的位点。
Fig.3　Theaminosequencealignmentofreversetranscriptanseincucumber
＊ Stopcode;“.” Gapsintroducedforoptimalalignment;
Frameshiftmutationsareunderlined.
从 GenBank中搜索到已登录的来源于不同生物的逆转录酶的氨基酸序列 , 与作者从黄瓜属中克
隆的 21条逆转录酶的氨基酸序列用 DNAMAN软件构建有根进化树 (图 4)。结果显示作者所克隆到
的逆转录酶氨基酸序列与苹果 、马铃薯 、 番茄 、拟南芥 、水稻等有较高的同源性。
图 4　黄瓜与其它植物部分逆转录酶的氨基酸序列的进化树
Fig. 4　Phylogenetictreeofaminosequencesofpartialreversetranscriptaseincucumberandotheraccessions
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　8期 江　彪等:黄瓜属 Ty1-copia类逆转座子逆转录酶序列的克隆及分析　
3　讨论
本研究首次对黄瓜属植物中的 Ty1-copia类逆转座子逆转录酶序列进行 PCR扩增 , 从野生种酸黄
瓜和五个栽培黄瓜中均扩增出 260bp左右的目标片段 , 说明 Ty1-copia类逆转座子在黄瓜中广泛存在。
逆转座子的增殖方式是以 DNA※RNA※DNA的方式依靠其自身携带的逆转录酶进行的 , 由于该酶没
有校对功能 , 其碱基错配率比 DNA聚合酶高 10 000倍以上 , 此外寄主的防御机制也会促使逆转座子
变异 , 因此在长期进化过程中 , 逆转座子形成了高度异质性的群体 (Steinhauer＆Holand, 1986)。
从酸黄瓜和栽培黄瓜 北`京截头 中获得了 21条逆转录酶序列 , 这些序列表现出很大的变异性 , 其
核苷酸序列变化范围为 255 ～ 272 bp, 而前人的研究结果表明该序列长度为 273 bp(Voytasetal.,
1992), 说明黄瓜中 Ty1-copia类逆转座子存在缺失突变;翻译成氨基酸后 , 6个序列发生了移框突
变 , 4个序列发生了 1 ～ 5个不同程度的终止密码子突变。因此缺失突变 、 移框突变以及终止密码子
突变可能是造成逆转座子异质性的重要原因。
分析黄瓜中所获得的 21条逆转录酶序列的同源性 , 可将它们分为 5个家族 。不同家族含有的逆
转录酶序列数不同 , 反应了各家族逆转座子转座过程的差异 , 家族内所含克隆数越多 , 表明该家族存
在的历史越久远 , 其逆转座子具有转座活性的可能性就越大 。
逆转座子在植物界的广泛分布及其序列的高度异质性表明 , 逆转座子在早期的植物中已出现 , 是
一个较为古老的转座元件 。作为基因组的成分之一 , 它们能在世代间遗传给下一代 (Doolitleetal.,
1989)。此外 , 逆转座子还可在物种间进行横向传递 (Kumar, 1998)。通过与其它作物逆转录酶的氨
基酸聚类分析 (图 4), 发现黄瓜 Ty1-copia类逆转录酶与苹果 、马铃薯 、 番茄 、 拟南芥 、水稻等其它
植物有较高的同源性 , 表明它们可能有共同的起源 , 这可能是不同物种间逆转座子横向传递的结果 ,
进一步说明了生物界有共同的起源。
本实验室利用黄瓜属野生种酸黄瓜与栽培黄瓜杂交获得了许多种间材料 , 下一步将利用本研究中
获得的酸黄瓜逆转录酶序列为探针进行原位杂交 , 研究酸黄瓜的染色体片段在这些种间中间材料中的
分布 , 这对于基因组组成 、进化及优良基因发掘将具有重要意义 。
References
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中国园艺学会番茄分会
2008年年会通知
中国园艺学会番茄分会 2006年 8月在沈阳召开了首次会议 , 参会 62人;2007年 9月在合肥召开了第二次年会 ,
参会 123人。经研究 , 决定于今年 10月 30日至 11月 1日在广东省珠海市召开中国园艺学会番茄分会 2008年年会。
1.会议时间和地点
10月 30日 (星期四)全天报到 , 31日全天会议交流 , 1日上午离会。会议地点暂定珠海市石景山大酒店。请计
划参加会议的人员务必在 8月 31日前与会议联系人联系 , 以便安排食宿和告知最后选定的酒店信息。
2.会议内容
(1)围绕番茄遗传资源与育种 、 栽培生理与栽培技术 、 采后处理与流通 、 种子生产与经营等内容进行研讨和交
流。会议采用多媒体形式大会交流 , 每人发言 10— 15分钟。
(2)召开分会理事会 , 商定 2009年年会的举办地点。
3.参会人员
科研院所 、 大专院校 、 生产管理和技术推广部门以及企业中从事番茄科研 、 生产 、 流通的有关科研与技术人员
(包括研究生)、 管理与经营人员。特别欢迎企业的人员参加。
4.会议费用
参会人员每人会务费 500元 , 住宿统一安排 , 费用自理。
5.会议组织
组织单位:中国园艺学会番茄分会;承办单位:广东省农业科学院蔬菜研究所。
6.会议联系单位及联系人:
广州市五山广东省农业科学院蔬菜研究所 , 邮编:510640;
黎振兴:020-38469456;13922793784;E-mail:lizhxgaas@163.com;
李庆怀:020-38469427;13503093659;E-mail:vrigaas@163.com;传真:020-38469605, 020-38469591。
北京市中关村南大街 12号 , 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 , 邮编:100081;
王孝宣 , 010-68919538, E-mail:wxxlhy@yahoo.com.cn;
国艳梅 , 010-68919538, E-mail:yanmeiguo@163.com;传真:010-62174123;010-62146160。
中国园艺学会番茄分会
广东省农业科学院蔬菜研究所
2008年 6月 25日
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