全 文 ：青海畜牧兽医杂志
四种篙草属植物叶片醋酶和过氧
化物酶同工酶分析
祁如虎 李有忠 ( 青海畜牡兽医学院 , 西宁 , 81 0 0 0 3 )
摘 要 采用聚丙烯酞胺凝胶垂直板电泳技术 , 对四种禽草属植物一小篙草 (K 。 b、 。 。 尹y g m -
a e a )
、矮禽草 (尤 . 无: 。 1215 ) 、 线叶禽草 (尤 . 。 a p `22汀 0 11。 )和篙草 (犬 . 6 e l l a 过 : : )的叶片醋酶和过氧化物酶
同工酶进行分析 。 试验结果显示 , 四个种的醋醉同工酶泳动成两大区域 , R f 值分别为 0 . 38 一 0 . 86
和 0 . 0 5 ,过氧化物酶同工酶泳动形成 5 个区域 , R r 值分别为 0 . 9 7 , 0 . 6 8~ 0 . 7 7 , 0 . 5 2一 0 . 6 3 , 0 . 2 9
~ 0
.
37 和 0 . 08 。 醉谱比较结果表明 ,篙草和线叶禽草亲缘关系较近 ,而二者同小篙草 、 矮篙草间 ,
以及小禽草同矮篙草之间亲缘关系较远 。
关位词 禽草 醋酶同工酶 过氧化物醉同工酶
I s o z y m e A n a l ys i s o f E s t e r a s e a n d P e r o x i d a s e i n L e a v e s
o f F o u r K d b er s诬a S P e e i e s
Q 1 R u h u e t a l
( Q i n g h a i A n im a l H u s b a n d r y a n d V e t e r i n a r y M e d i e i n e C o 一 e g e , x i n in g , 8 1 0 0 0 3 )
A b s t r a c t : L e a f i s o z y m e s o f e s t e r a s e a n d P e r o x i d a s e i n f o u r K o b尹e 砚 a s P e e ie s 一 K . P歹g -
仍 a e a , K . h以仍坛l七s , K . e a 尹乞11汀 o l ia a n d K . b e l l a d ;云一 w e r e a n a l y s e d b y v e r t i e a l P o l y a e r y l a m i d e
g e l e l e e t r o P h o r e s is
.
T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t e s t e r a s e i s o z y m e s o f t h e s e f o u r s P e e i e s m i g r a t e d
i n t o t w o r e g io n s w i t h R f v a l u e 0
.
3 8~ 0
.
8 6 a n d 0
.
0 8
, a n d p e r o x i d a s e i s o z y m e s m i g r a t e d in t o
if ve r e g i o n s w i t h R f v a l u e 0
.
9 7
,
0
.
6 8~ 0
.
7 7
,
0
.
5 2~ 0
.
6 3
,
0
.
2 9~ 0
.
3 7 a n d 0
.
0 8 r e s p e e t iv e ly
.
T h e P r e l im i n a r y e o m P a r a t i v e r e s u l t s o f t h e f o u r z y m o g r a m s in d i e a t e d t h a t a e l o s e r r e l a t io n
e x i s t e d b e t w e e n K
.
b e l l
a
d i i a n d K
·
e a 尹云11汀0 1: a a n d a f a r t h e r r e l a t io n a m o n g K · 尹y g m a e a , K ·
h u m 云l 乞5 a n d t h e o t h e t t w o .
K e y w o r d s : K
o
b尹 e 邵 a s P P . , E s t e r a s e is o z y m e , P e r o x id a s e i s o z y m e
以篙草属 ( K 。 b、 。 。 )植物为建群种的高寒草甸是青藏高原面积最大 、 分布最广的草地类
型 ,是重要的放牧草地 。 近年来 ,对高草属植物从分类 l[] 、 形态及生态特性阁 、 生理 3[, `〕等多方面
进行了研究 ,然而生化及遗传研究还属空白 。 在探讨物种种间关系及种质演化时 , 已有越来越
多的人采用了同工酶分析手段 。 由于编码同工酶的基因大多是共显性的 , 可在不需杂交的情况
下 ,根据电泳表型估算基因频率和基因型频率 ,从而直接在品种间 、 种群间或种间比较遗传变
异分布 ,进而探讨种质演化关系阁 。 我国学者种广炎困对柑桔 , 汪祖华 v[] 对桃 ,曲路平 s[] 对蔓越
桔分别进行同工酶分析 ,探讨了种质演化关系及分类 。 本文旨在从同工酶分析入手 ,探讨四种
篙草属的种间关系 ,为开展上述工作提供基础资料 。
l 材料与方法
1
.
1 植物材料来源及粗提酶液制备 : 小高草 ( K . 尹” m 。 。 。 )和矮高草 ( K . 如 m 讥 s) 来 自铁 卜加
草改站邻近山坡 (海拔高度 3 3 0 o m ) ,线叶高草 (尤 . 。 a , 122汀 0 2` 。 )和篙草 (尤 . o e zz。 ` i` )采自玛沁县
大武滩江壤沟 (海拔高度 3 6 8 0 m ) 。 幼嫩叶片剪碎后 ,加等体积 0 . l m ol / L T r i s 冷缓冲液 (P H
7
.
5) 冰浴研磨 。
1
.
2 凝胶及缓冲系统 : 聚丙烯酞胺凝胶系统 ,分离胶浓度 7% ,浓缩胶 3% ,分别用 p H S . 9 和
1 9 95 年第 2 5 卷第 4 期 (总第 1 1 8 期 )
p H 6
.
7 的 T r is 一H el 缓冲液配制 。
1
.
3电泳系统 : 电极缓冲液用 p H g . O 的硼砂一硼酸缓冲液 , 电泳仪为 D Y Y 一 l 型 (北京六一仪
器厂生产 ) ,先在 I O0v 条件下电泳 ,待指示剂刚过浓缩胶时 ,再升至 20 0 v 。 电泳在 4℃进行 , 直
到指示剂迁移至离胶板底部 1~ 1 . sc m 时停止 。
1
.
4 染色 : 胶板用蒸馏水冲洗后 ,置染色液中染色 。
过氧化物酶采用醋酸联苯胺法 9j[ 染色 。
酷酶染色 :预热的 I O0m l 0 . Zm ol / L 磷酸缓冲液 ( p H 6 . 4) 中 , 加入 1% a 一乙酸蔡醋 6 m l , 固
蓝 B 盐 0 . 2 9 充分摇匀后 ,放入经电泳的凝胶板 , 在 37 ℃暗处染色至酶带清晰为止 。
1
.
5 结果记载 :根据酶带及指示剂迁移距离求出对应 R f 值 ,绘出酶谱图 。胶板制成干板保存 。
2 结果
四种篙草醋酶和过氧化物酶同工酶谱如
. . 吕 . . 曰曰.
ù一,ùō一一ù1ù三ē} 一 -…一 ’ 一泛
{ 一一 二 一
`日刀困 .
二二二 , . . . .
:
. 二 . . ` 二二 ,
` . . J`刀 .
. . . . . . . . ` 二二
二
` 二二二 ` 二二刁 ` 二二刁 ` 二二刁 ` 二二翻 .二 二二翻 ` 二二翻 . . . .
2 3 4 5 6 7 8
过氧化物酶 l( ~ 4) 和醋酶同工酶酶谱图
(纵轴为 R f 值 )
1
,
5一高草 2 , 6一线叶高草 3 , 7一矮高草
4
,
8一小 高草
图所示 ,可以看到 :
2
.
1 四个种的醋酶同工酶泳动为两大区域 ,
R f 值为 0 . 38 ~ 0 . 86 的区域和 0 . 08 的单酶
带区 。高草和线叶高草有一条主带 、 两条次级
带 和两条三级带相 同 ( 占酶 带条数 50 %以
上 ) 。 而小高草和矮高草间酶带泳动情况不
同 。 小高草只有一条次级带同矮篙草的相 同 ,
R f 值 0 . 08 的单酶带在小篙草为主带 ,矮篙
草中为三级带 (相同酶带条数不到 10 % ) 。 小
高草 、 矮高草同线叶篙草 、 篙草相 比 ,主次带
位置明显不同 。矮高草 , 线叶篙草和篙草三者
主带位置比较一致 ( R f 值 0 . 42 一 0 . 50 ) ,而泳
动较快的次级带与三级带位置刚好相反 。
2
.
2 四个种的过氧化物酶同工酶泳动成 5
个 区域 : R f 值为 0 . 97 的单酶带区 , 0 . 68 一
0
.
7 7 的扩散带区 , 0 . 5 2 ~ 0 . 6 3区 , 0 . 2 9 一
0
.
37 区和 0 . 8 的单酶带区 。 0 . 08 的单酶带
四个种皆同 。 高草和线叶篙草只有扩散带不
同 (相 同酶带数 占 67 % ) , 小篙草 、 线叶篙草
和高草只有一主带相同 ,其它带均不同 。而矮
篙草除还有一次级带与小高草相同外 , 其它
带明显有区别 。
3 讨论
3
.
1 从四个种两酶系统酶谱初步比较可见 ,
线叶篙草和篙草亲缘关系较近 , 而小篙草同
矮高草之间 , 小篙草 、 矮高草同线叶篙草和高
草之间亲缘关系较远 。
3
.
2 王承斌等 l0[ 〕对三种冰草 、 无芒雀麦及 g 个首楷品种经过氧化物酶同工酶分析后得出酶
带条数越多越抗寒的结论 , 从而认为过氧化物酶带条数可做为不同牧草抗寒性的一个生化指
标 。 本试验中 ,小篙草和矮篙草分别有 9 条和 7 条酶带 ,而线叶篙草和篙草都只有 3 条 。 前两
种材料取自铁 卜加山坡 (海拔高度 3 3 0 0 m ) ,后两种材料来自玛沁县大武滩江壤沟 (海拔高度
3 6 8 Om )
。 刘鸿先等〔” 〕对黄瓜 、 水稻进行零上低温和常温两个处理 ,发现低温处理使过氧化物酶
同工酶带条数增多 ,这是对遗传基础相同的同一品种作比较后得出的结论 , 还进一步说明植物
的抗寒力是与同工酶的一定类型有关 ,而不是和同工酶的总的数量有关 。耐寒性是所有篙草的
青海畜牧兽医杂志
共 同特点 ,篙草属于耐寒中生植物范畴图 。 不同的物种 , 遗传基础不同 ,将有不同的同工酶谱反
映 ,形成同工酶谱的种属专一性 。 而且其酶谱很少受环境影响 lz[ 〕。 本试验 中 , 四种篙草过氧化
物酶同工酶带条数的差异 ,可能反映了种所固有的酶谱特点 ,而究竟是否反映了抗寒性的差异
还有待通过不同环境条件大样本的分析 比较作进一步探讨 。
4 参考文献
1
. 杨永昌 . 植物分类学报 , 1 9 7 6 , 1 4 ( l ) : 4 1一 5 0
2
. 周兴民 . 植物学报 , 1 9 7 9 , 2 1 ( 2 ) : 1 3 5一 1 4 2
3
. 张树源等 . 高寒草甸生态系统国际学术讨论会论文集 . 19 8 8 : 103 一 1 08
4
. 沈振西等 . 高寒草甸生态系统 , 1 9 9 1 , 3 : 5 ~ 62
5
.
H a m r i e k J L
.
i n s e h o n e w a l d 一 C o x C M e t a l e d s . G e n e t i e s a n d C o n s e r v a t i o n , 1 9 8 3 : 3 3 5一 3 4 8
6
. 钟广炎等 . 植物分类学报 , 1 9 9 1 , 2 9 ( 5 ) : 4 1 8~ 4 2 2
7
. 汪祖华 . 园艺学报 , 1 9 9 0 , 1 7 ( 4 ) : 2 4 1~ 2 4 8
8
. 曲路平等 . 吉林农业大学学报 , 19 9 1 , 1 3 (3 ) : 23 ~ 25
9
. 胡能书等 . 同工酶技术及其应用 . 长沙 :湖南科学技术出版社 , 1 9 8 5 : 7峨
1 0
. 王承斌等 . 中国草地 , 1 9 8 9 ( 5 ) : 7 2~ 7 4
1
. 刘鸿先等 . 植物生理学通讯 , 1 981 (6 ) : 6~ n
1 2
. 陈丽颖等 . 四川草原 , 2 9 8 9 ( 2 ) : 2 6~ 2 9
致谢 : 本文试验材料小 高草和矮高草由孙海松 ,李希来二位老师提供 , 高草和线叶高草由
乔有明老师提供 ,谨致谢意 。 (修 回时 间 : 1 9 5 一 04 一 03 )
· 经验交流 ·
一例牛产前截瘫的诊疗经过
董晓玲 阁伯仁 郭小琴
(青海省涅源畜收学校兽医院 , 涅源 , 81 2 1 0 0)
病例和诊疗 : 1 9 9 3年 6 月 3 日 ,徨源县光华村农民马某的一头怀孕 5 个月的黑白花奶牛 , 突然全身出汗 ,
不吃草料 , 不反当 , 卧地不起 。 临床检查 :病牛精神沉郁 , 呈伏卧姿势 , 瘤胃蠕动每 Zm in 一次 , 波长 4 5 , 并有轻
度朦气 , 鼻镜干燥 , 鼻端发冷 , 后躯针刺反应正常 ,初步诊断为产前截瘫 。 治疗 : 用 5 %氛化钙 2 50 m l , 25 %葡萄
糖 l 0 0 0ml , 0 . 5%氢化可的松 3 0m l , 5 %维生素 c 25 m l , 混合静注 ,头两天每 日两次 ;乳房送风 (用 1次 ) 。 连续
治疗 5 天 , 患牛精神状况有所好转 , 食欲增加 ,但仍不能站立 。
为了查明截瘫原因 , 第 6天进行血检 ,结果 :血清葡萄糖 4 0 0m 8 / L (正常乳牛参考值为 45 0一 130 0m g / L ) ,血 清钙 Z o m g / L (正常乳牛参考值为 8 8一 1 1 4 m g / L ) ,血清无机磷 5 m 8 / L (正常乳牛参考值 5 3 . 3一 1 0 5 . 0
m g / )L
. 血检结果表明 , 患牛以缺钙 、 磷为主 , 并兼有低血糖等综合症 。 治疗以继续补钙 、 磷 、 糖 ,并内服活血补
肾 , 祛风舒筋中药 。 用磷酸二氢钠粉 10 呢 , 分 2次内服 。 25 %葡萄 1 0 o oml , 5 %葡萄糖酸钙 3O0ml , 复方盐水
50 0ml
,
10 %安那加 Z Om l , 10 %维生素 c 2 5m l , 混合一次静注 。 灌服加味麒麟散 , 血竭 2 05 , 炒当归 6 05 , 白术
6 0 5
, 山药 5 0 9 , 秦芙 409 , 木瓜 3 5 9 , 拘祀 3 0 5 , 桑寄生 4 0 9 , 巴戟天 2 5 5 , 故纸 3 09 , 甘草 2 5 9 , 天麻 209 ,党参 6 0 9 ,
黄蔑 50 9 , 龙骨 4呢 , 红枣为引 。 口服补液盐 ( o R s ) 。 经上面处理 , 次日患牛自行站立 ,行动自如 ,症状完全消失
而愈 。
体会 : 引起孕牛产前截瘫的原因 目前尚未完全清楚 , 一般认为与缺钙 、磷 、 糖 、 镁 、钾等元素及维生素不足
有关 。 临床上治疗截瘫时 , 一般用钙糖疗法 , 内加氢化可的松 , 注射速度宜缓慢 , 同时应密切注意心脏情况 。 肌
注维丁胶性钙 , 连用 2 天 (在心脏机能正常的情况下 ,第 3天还可采用 ) , 如还无效 , 第 3 天用 10 %盐水 30 一
4 0 0m l
, 低分子右旋糖醉 5 0 0 一 l o o om l , 0 . 5%氢化可的松 3 0m l , 庆大霉素 5 0一 12 0 万单位 , 混合静注 , 只用 -
次 。 如还不站立 ,第 4 天可考虑补磷与钾 。 我们在临床诊疗未见疗效的情况下 ,进行了血检 ,根据检查结果重
新拟订治疗方药 ,做到 了对症下药 ,缩短 了病程 , 治愈病畜 。
(修回时间 : 1 9 9 5 一 0 6 一 2 0 )