全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１４（２４）：８８～９２
第一作者简介：赵玉辉（１９７６－），女，博士，副研究员，现主要从事果
树种质资源鉴定与评价等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｏｙｕｈｕｉ７６＠
１２６．ｃｏｍ．
责任作者：郭印山（１９７７－），男，博士，副教授，现主要从事果树育种
与生物技术等研究工作。
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３１１０１５１５）；沈阳农业大学
青年教师基金资助项目（２０１０１０１７）。
收稿日期：２０１４－０９－０９
山楂属（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｓｐｐ．）种质资源叶片
总黄酮遗传多样性分析
赵 玉 辉，王 岗，苏 凯，郭 印 山，董 文 轩
（沈阳农业大学 园艺学院，辽宁 沈阳１１０１６１）
摘 要：以国家果树种质沈阳山楂资源圃收集的８个种１３５份山楂种质资源为试材，采用
ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ比色法，研究山楂属资源总黄酮含量及遗传多样性水平。结果表明：山
楂属资源黄酮含量具丰富的变异，变异系数为５７．０７％，其变幅为０．２５％～１１．６５％，通过山楂属
植物叶黄酮类成分比较研究，发现了一些有利用价值的叶用资源。
关键词：山楂叶片；总黄酮；遗传多样性
中图分类号：Ｓ ６６１．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１４）２４－００８８－０５
山楂是我国特有的药食两用果树种类，黄酮是山楂
的一大类化合物，是山楂药用质量的重要评价指标，对
人类具有多种保健与药用功能，包括消积健胃、消炎止
咳、降血压、降血脂、清除自由基、抗氧化、抗癌、抗病毒、
保护心血管系统和肝脏、防止骨质疏松等疗效，具有极
大的开发研究价值［１，３，５－１１］。目前我国山楂黄酮资源药
用、加工多集中在少数品种及野生类型上，限制了山楂
黄酮资源的深度开发及利用，因此，在更多种质资源、组
织（如叶、花、根、茎）上开展黄酮性状系统研究是当前山
楂研究中的一个重要课题。早期我国山楂黄酮的研究
以山楂（Ｃ．ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ Ｂｇｅ．）和山里红（Ｃ．ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ
Ｂｇｅ．ｖａｒ．ｍａｊｏｒ Ｎ．Ｅ．Ｂｒ）开展较多，并且研究材料以果实
为主［２］，随着对黄酮类物质研究的深入，众多学者发现
山楂各器官中（叶片、茎、根、花）均含有黄酮成分［４－５，８－９］，
并且叶片中总黄酮含量高于果实及其它组织，因此，２００８
年课题组就初步开展了山楂资源叶片黄酮含量的研究
工作［４］，在此基础上，现以国家果树种质沈阳山楂圃收
集的１３５份山楂属资源为试材，系统的测定其总黄酮含
量，并进行遗传多样性分析，以期为山楂资源的挖掘利
用及评价提供依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试８个种山楂资源共１３５份，由国家果树种质沈
阳山楂圃提供，山楂种分类及品种见中国果树志·山楂
卷［１］，分别为山楂（Ｃ．ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ Ｂｇｅ．）、伏山楂（Ｃ．
ｂｒｅｔｓｃｈｎｅｉｄｅｒｉ Ｓｃｈｎｅｉｄ．）、甘 肃 山 楂 （Ｃ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ
Ｗｉｌｓ．）、阿尔泰山楂（Ｃ．ａｌｔａｉｃａ（Ｌｏｕｄ．）Ｌａｎｇｅ）、准噶尔山
楂（Ｃ．ｓｏｎｇａｒｉｃａ Ｃ．Ｋｏｃｈ）、光叶山楂（Ｃ．ｄａｈｕｒｉｃａ Ｋｏｅ－
ｈｎｅ）、绿肉山楂（Ｃ．ｃｈｌｏｒｏｓａｒｃａ Ｍａｘｉｍ．）和湖北山楂（Ｃ．
ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ Ｓａｒｇ．）。其中山楂品种１１９份，伏山楂地方品
种８份，黑果绿肉资源３份，另外５个种资源各１份，具
体见表１。供试芦丁标准品购自中国药品生物制品检定
所，９５％乙醇等其它试剂均为市售分析纯。
１．２ 试验方法
于２０１２年１０月采山楂成熟叶片，每份山楂资源分
别取３株，每株为１次重复，试验设３次重复。取其树冠
外围大小均一且无病虫害的叶片，洗净后５０℃干燥至恒
重，混合粉碎后过２０目筛得山楂叶粗粉备用。按鲁巍
巍［４］的方法提取和测定山楂叶片中的总黄酮含量。配
制０．２ｇ／Ｌ的芦丁（７０％乙醇溶液）标准液，分别取０、１、
２、３、４、５ｍＬ标准液制成浓度梯度待测液，５００ｎｍ下测
定ＯＤ值，建立标准曲线方程。称取干燥的山楂叶片粗
粉０．３ｇ分别置于容量瓶中，加入７０％乙醇１５ｍＬ，加盖
密封；４０℃下以２２５Ｗ的超声功率超声提取３０ｍｉｎ；减
压抽滤后，转移至２５ｍＬ容量瓶中，用７０％乙醇定容至
刻度，摇匀，制备成供试品溶液。量取１ｍＬ供试品溶液
放置于１０ｍＬ试管中，并加４ｍＬ ７０％乙醇，分别加入
ＮａＮＯ２、Ａｌ（ＮＯ３）３、ＮａＯＨ后，５００ｎｍ下测定ＯＤ值，取３
次重复的平均值。再按下列公式计算测试样品中的总黄
酮含量。总黄酮含量（％）＝［（Ｃ×Ｖ／ａ）／（Ｗ×１０３）］×
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北方园艺２０１４（２４）：８８～９２ ·生物技术·
１００，式中：Ｃ为通过标准曲线方程求得的总黄酮量
（ｍｇ）；ａ为吸取样品溶液体积（ｍＬ）；Ｖ 为样品溶液总体
积（ｍＬ）；Ｗ 为样品干重（ｇ）。
１．３ 数据分析
试验所得数据结果采用ＳＰＳＳ统计软件计算标准
差，并计算变异系数。
２ 结果与分析
２．１ 山楂属植物叶黄酮含量比较
通过山楂属植物叶黄酮含量比较研究，发现了一些
有利用价值的叶用资源。在１３５份资源中，总黄酮含量
最高的是‘海棠山楂’为１１．６５％，其次是‘豫８００３’为
１１．４５％，‘卧龙岗２号’１０．９２％，‘吉林叶赫’１０．７０％，‘彰
武山里红’１０．４７％，‘益都敞口’１０．４０％，‘寒丰’１０．２０％，
‘聂家裕２号’１０．０７％，‘林县上口’９．２７％，‘北京灯笼
红’７．９２％，‘劈破石’７．７５％，‘铜台白野生’７．４７％，‘紫
丰’７．４２％，‘黄宝裕１号’７．２２％，‘黄果’７．０２％。这些
山楂资源体现出较高优势，可作为山楂叶黄酮提取的新
材料。在所测定８个种的资源中，阿尔泰山楂和伏山楂
２个种总黄酮含量较低，阿尔泰山楂为１．４５％，伏山楂
为１．４９％。
表１ 山楂属资源总黄酮含量测定结果
Ｔａｂｌｅ １ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ
分类
Ｓｐｅｃｉｅｓ
资源名称
Ｎａｍｅ ｏｆ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
总黄酮含量
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ／％
资源名称
Ｎａｍｅ ｏｆ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
总黄酮含量
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ／％
资源名称
Ｎａｍｅ ｏｆ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
总黄酮含量
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ／％
山楂
（Ｃ．ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａＢｇｅ．）
‘本溪４号’
‘Ｂｅｎｘｉ ＮＯ．４’
５．０７±０．７４
‘益都小黄面楂’
‘Ｙｉｄｕ Ｘｉａｏｈｕａｎｇｍｉａｎｚｈａ’
２．４０±０．０８
‘秋金星’
‘Ｑｉｕｊｉｎｘｉｎｇ’
３．３７±０．３４
‘二乙子’
‘Ｅｒｙｉｚｉ’
５．１２±０．０９
‘秋丰’
‘Ｑｉｕｆｅｎｇ’
４．９５±０．２２
‘京短１号’
‘Ｊｉｎｇｄｕａｎ ＮＯ．１’
２．３７±０．０６
‘大王庙山楂’
‘Ｄａｗａｎｇｍｉａｏ Ｓｈａｎｚｈａ’
１．３２±０．０６
‘新宾软籽’
‘Ｘｉｎｂｉｎｒｕａｎｚｉ’
２．５５±０．２７
‘豫北红’
‘Ｙｕｂｅｉｈｏｎｇ’
４．６５±０．１４
‘沈２－４’
‘Ｓｈｅｎ２－４’
６．３７±０．２５
‘豫８００２’
‘Ｙｕ８００２’
３．６０±０．２８
‘燕瓤青’
‘Ｙａｎｒａｎｇｑｉｎｇ’
４．９５±０．２７
‘清源磨盘’
‘Ｑｉｎｇｙｕａｎｍｏｐａｎ’
５．４７±０．２９
‘晚秋山里红’
‘Ｗａｎｑｉｕ Ｓｈａｎｌｉｈｏｎｇ’
３．１７±０．０７
‘寒丰’
‘Ｈａｎｆｅｎｇ’
１０．２０±０．２２
‘铜台白野生’
‘Ｔｏｎｇｔａｉ Ｂａｉｙｅｓｈｅｎｇ’
７．４７±０．０３
‘蒙阴半野小金星’
‘Ｍｅｎｇｙｉｎｂａｎｙｅｘｉａｏｊｉｎｘｉｎｇ’
１．６５±０．０７
‘建昌山楂’
‘Ｊｉａｎｃｈａｎｇ Ｓｈａｎｚｈａ’
４．６５±０．３３
‘面楂’
‘Ｍｉａｎｚｈａ’
２．８５±０．１６
‘聂家裕２号’
‘Ｎｉｅｊｉａｙｕ ＮＯ．２’
１０．０７±０．３５
‘滦红’
‘Ｌｕａｎｈｏｎｇ’
１．９５±０．１５
‘华北小山楂’
‘Ｈｕａｂｅｉ Ｘｉａｏｓｈａｎｚｈａ’
２．８０±０．１３
‘临汾１号’
‘Ｌｉｎｆｅｎ ＮＯ．１’
３．３０±０．１７
‘马家粉肉’
‘Ｍａｊｉａｆｅｎｒｏｕ’
３．５０±０．２２
‘百泉７８０１’
‘Ｂａｉｑｕａｎ７８０１’
０．２５±０．０４
‘卧龙岗２号’
‘Ｗｏｌｏｎｇｇａｎｇ ＮＯ．２’
１０．９２±０．８４
‘本溪７号’
‘Ｂｅｎｘｉ ＮＯ．７’
１．５５±０．２６
‘紫丰’
‘Ｚｉｆｅｎｇ’
７．４２±０．４１
‘蟹子石３号’
‘Ｘｉｅｚｉｓｈｉ ＮＯ．３’
３．３７±０．６３
‘平邑山楂’
‘Ｐｉｎｇｙｉ Ｓｈａｎｚｈａ’
５．６７±０．１９
‘７９７２３’ ３．８０±０．０４
‘豫８００１’
‘Ｙｕ８００１’
２．３５±０．１７
‘马家大队’
‘Ｍａｊｉａｄａｄｕｉ’
２．５５±０．２０
‘沈７８２１３’
‘Ｓｈｅｎ７８２１３’
４．１５±０．１１
‘田生山楂’
‘Ｔｉａｎｓｈｅｎｇ Ｓｈａｎｚｈａ’
５．３５±０．１１
‘兴隆实生’
‘Ｘｉｎｇｌｏｎｇｓｈｉｓｈｅｎｇ’
３．０２±０．１２
‘益都红口’
‘Ｙｉｄｕｈｏｎｇｋｏｕ’
１．９７±０．１４
‘平邑早红子’
‘Ｐｉｎｇｙｉｚａｏｈｏｎｇｚｉ’
２．３０±０．１３
‘紫珍珠’
‘Ｚｉｚｈｅｎｚｈｕ’
３．０２±０．２６
‘林县上口’
‘Ｌｉｎｘｉａｎｓｈａｎｇｋｏｕ’
９．２７±０．３８
‘抚顺上砖白楂’
‘Ｆｕｓｈｕｎｓｈａｎｇｚｈｕａｎｂａｉ’
６．０２±０．３４
‘霞金星’
‘Ｘｉａｊｉｎｘｉｎｇ’
３．１５±０．０９
‘晋县小野山楂’
‘Ｊｉｎｘｉａｎ Ｘｉａｏｙｅ Ｓｈａｎｚｈａ’
４．８９±０．２１
‘银野岭９号’
‘Ｙｉｎｙｅｌｉｎｇ ＮＯ．９’
３．１０±０．０９
‘秋艳’
‘Ｑｉｕｙａｎ’
５．９５±０．３２
‘西坟１号’
‘Ｘｉｆｅｎ ＮＯ．１’
３．００±０．１９
‘沈７８２１４’
‘Ｓｈｅｎ７８２１４’
１．９５±０．０９
‘沈７８２０１’
‘Ｓｈｅｎ７８２０１’
２．３２±０．１２
‘垂枝山里红’
‘Ｃｈｕｉｚｈｉ Ｓｈａｎｌｉｈｏｎｇ’
２．２５±０．０８
‘临汾白野生’
‘Ｌｉｎｆｅｎ Ｂａｉｙｅｓｈｅｎｇ’
２．２７±０．０７
‘挂甲峪１号’
‘Ｇｕａｊｉａｙｕ ＮＯ．１’
４．９２±０．１６
‘西坟４号’
‘Ｘｉｆｅｎ ＮＯ．１’
２．２５±０．２２
‘益都敞口’
‘Ｙｉｄｕｃｈａｎｇｋｏｕ’
１０．４０±０．４５ ‘７９５５０７’ ４．３７±０．０６
‘劈破石’
‘Ｐｉｐｏｓｈｉ’
７．７５±０．１２
‘西丰红’
‘Ｘｉｆｅｎｇｈｏｎｇ’
３．３７±０．２８
‘黄果’
‘Ｈｕａｎｇｇｕｏ’
７．０２±０．２６
‘兴红２号’
‘Ｘｉｎｇｈｏｎｇ ＮＯ．２’
３．０５±０．０６
‘百泉７９０１’
‘Ｂａｉｑｕａｎ７９０１’
３．４７±０．２２
‘牛心台１号’
‘Ｎｉｕｘｉｎｔａｉ ＮＯ．１’
４．３５±０．２５
‘子母红’
‘Ｚｉｍｕｈｏｎｇ’
１．７５±０．１７
‘胜利紫肉’
‘Ｓｈｅｎｇｌｉｚｉｒｏｕ’
３．３５±０．０４
‘绛县７９８２０３’
‘Ｊｉａｎｇｘｉａｎ７９８２０３’
５．７５±０．２９
‘红瓤绵’
‘Ｈｏｎｇｒａｎｇｍｉａｎ’
６．１２±０．１０
‘大金星’
‘Ｄａｊｉｎｘｉｎｇ’
２．４７±０．１０
‘亮山红’
‘Ｌｉａｎｇｓｈａｎｈｏｎｇ’
５．８０±０．２２
‘溪红’
‘Ｘｉｈｏｎｇ’
４．２５±０．１４
‘徐州大货’
‘Ｘｕｚｈｏｕｄａｈｕｏ’
５．８０±０．１６
‘赣榆２号’
‘Ｇａｎｙｕ ＮＯ．２’
４．３５±０．０９
９８
·生物技术· 北方园艺２０１４（２４）：８８～９２
续表１
Ｃｏｎｔｉｎｕｅ ｔａｂｌｅ １
分类
Ｓｐｅｃｉｅｓ
资源名称
Ｎａｍｅ ｏｆ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
总黄酮含量
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ／％
资源名称
Ｎａｍｅ ｏｆ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
总黄酮含量
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ／％
资源名称
Ｎａｍｅ ｏｆ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
总黄酮含量
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ／％
‘山东红面楂’
‘Ｓｈａｎｄｏｎｇｈｏｎｇｍｉａｎｚｈａ’
４．５９±０．３３
‘抚顺山楂’
‘Ｆｕｓｈｕｎ Ｓｈａｎｚｈａ’
２．１７±０．１３
‘冯水山楂’
‘Ｆｅｎｇｓｈｕｉ Ｓｈａｎｚｈａ’
３．２５±０．１９
‘吉林叶赫’
‘Ｊｉｌｉｎｙｅｈｅ’
１０．７０±０．０８
‘白里’
‘Ｂａｉｌｉ’
２．６７±０．０６
‘北京灯笼红’
‘Ｂｅｉｊｉｎｇｄｅｎｇｌｏｎｇｈｏｎｇ’
７．９２±０．２５
‘黄宝裕１号’
‘Ｈｕａｎｇｂａｏｙｕ ＮＯ．１’
７．２２±０．１０
‘辽红’
‘Ｌｉａｏｈｏｎｇ’
３．５２±０．１０
‘通化山楂’
‘Ｔｏｎｇｈｕａ Ｓｈａｎｚｈａ’
２．７５±０．１３
‘本溪２号’
‘Ｂｅｎｘｉ ＮＯ．２’
６．５５±０．３６
‘山城子２号’
‘Ｓｈａｎｃｈｅｎｇｚｉ ＮＯ．２’
５．１５±０．０７
‘银野岭７号’
‘Ｙｉｎｙｅｌｉｎｇ ＮＯ．７’
４．５２±０．１２
‘银野岭２号’
‘Ｙｉｎｙｅｌｉｎｇ ＮＯ．２’
２．２９±０．０３
‘海棠山楂’
‘Ｈａｉｔａｎｇ Ｓｈａｎｚｈａ’
１１．６５±０．４５
‘山城子１号’
‘Ｓｈａｎｃｈｅｎｇｚｉ ＮＯ．１’
３．０２±０．３１
‘甜水’
‘Ｔｉａｎｓｈｕｉ’
３．１５±０．１８
‘彰武山里红’
‘Ｚｈａｎｇｗｕ Ｓｈａｎｌｉｈｏｎｇ’
１０．４７±０．５１
‘吉林大旺’
‘Ｊｉｌｉｎｄａｗａｎｇ’
２．３２±０．１６
‘蟹子石４号’
‘Ｘｉｅｚｉｓｈｉ ＮＯ．４’
５．４２±０．０４
‘辉县大红’
‘Ｈｕｉｘｉａｎｄａｈｏｎｇ’
３．３７±０．０７
‘豫８００３’
‘Ｙｕ８００３’
１１．４５±０．２７
‘东陵青口’
‘Ｄｏｎｇｌｉｎｇｑｉｎｇｋｏｕ’
３．０７±０．０４
‘平邑银红子’
‘Ｐｉｎｇｙｉ Ｙｉｎｈｏｎｇｚｉ’
４．２７±０．１４
‘马钢早红’
‘Ｍａｇａｎｇ Ｚａｏｈｏｎｇ’
２．３５±０．２５
‘８１－２’ ２．６９±０．２２
‘集安紫肉’
‘Ｊｉａｎｚｉｒｏｕ’
２．１５±０．１９
‘绛县７９５５０７’
‘Ｊｉａｎｇｘｉａｎ７９５５０７’
６．１７±０．０５
‘涧沟２号’
‘Ｊｉａｎｇｏｕ ＮＯ．２’
２．１２±０．０６
‘鞍山紫肉’
‘Ａｎｓｈａｎｚｉｒｏｕ’
３．６７±０．１７
‘辽阳紫肉’
‘Ｌｉａｏｙａｎｇｚｉｒｏｕ’
２．９２±０．１９
‘聂家裕１号’
‘Ｎｉｅｊｉａｙｕ ＮＯ．１’
４．９９±０．４１
‘益都特大黄面楂’
‘Ｙｉｄｕｔｅｄａｈｕａｎｇｍｉａｎｚｈａ’
３．５２±０．１９
‘福山铁球’
‘Ｆｕｓｈａｎｔｉｅｑｉｕ’
２．４７±０．１０
‘秋丽’
‘Ｑｉｕｌｉ’
２．９９±０．３１
‘北京对照’
‘Ｂｅｉｊｉｎｇｄｕｉｚｈａｏ’
２．４２±０．３３
‘银野岭１号’
‘Ｙｉｎｙｅｌｉｎｇ ＮＯ．１’
３．０５±０．１６
‘思山岭’
‘Ｓｉｓｈａｎｌｉｎｇ’
４．０２±０．１１
‘菏泽山楂’
‘Ｈｅｚｅ Ｓｈａｎｚｈａ’
３．９５±０．３６
‘土谷子１号’
‘Ｔｕｇｕｚｉ ＮＯ．１’
５．０２±０．１３
‘朝新红’
‘Ｃｈａｏｘｉｎｈｏｎｇ’
６．０２±０．１３
‘百泉７９０３’
‘Ｂａｉｑｕａｎ７９０３’
１．９２±０．２６
‘双红’
‘Ｓｈｕａｎｇｈｏｎｇ’
５．０５±０．０４
‘绛县７９８２０２’
‘Ｊｉａｎｇｘｉａｎ７９８２０２’
３．６０±０．０６
‘绛县山楂’
‘Ｊｉａｎｇｘｉａｎ Ｓｈａｎｚｈａ’
２．２７±０．０８
‘绛县７９８２０１’
‘Ｊｉａｎｇｘｉａｎ７９８２０１’
２．８２±０．０７
‘福山７９７２１’
‘Ｆｕｓｈａｎ７９７２１’
４．１５±０．０６
‘蒙阴大金星’
‘Ｍｅｎｇｙｉｎｄａｊｉｎｘｉｎｇ’
４．７５±０．１７
‘通辽红’
‘Ｔｏｎｇｌｉａｏｈｏｎｇ’
２．３７±０．１２
‘平邑甜红子’
‘Ｐｉｎｇｙｉｔｉａｎｈｏｎｇｚｉ’
２．７５±０．０８
‘晋县大红山楂’
‘Ｊｉｎｘｉａｎ Ｄａｈｏｎｇｓｈａｎｚｈａ’
４．９０±０．２８
伏山楂
（Ｃ．ｂｒｅｔｓｃｈｎｅｉｄｅｒｉ Ｓｃｈｎｅｉｄ．）
‘左伏１’
‘Ｚｕｏｆｕ ＮＯ．１’
１．７５±０．２１
‘古红’
‘Ｇｕｈｏｎｇ’
２．４０±０．０８
‘粉色’
‘Ｆｅｎｓｅ’
０．８５±０．１０
‘伏里红’
‘Ｆｕｌｉｈｏｎｇ’
１．７５±０．１２
‘左伏３’
‘Ｚｕｏｆｕ ＮＯ．３’
１．０５±０．１９
‘吉伏４’
‘Ｊｉｆｕ ＮＯ．４’
１．６５±０．１０
‘５５５’ １．２０±０．１０
‘红肉山里红’
‘Ｈｏｎｇｒｏｕ Ｓｈａｎｌｉｈｏｎｇ’
１．３０±０．２５
光叶山楂
（Ｃ．ｄａｈｕｒｉｃａ Ｋｏｅｈｎｅ）
‘光叶山楂’
‘（Ｃ．ｄａｈｕｒｉｃａ Ｋｏｅｈｎｅ）’
５．４７±０．２１
黑果绿肉
（Ｃ．ｃｈｌｏｒｏｓａｒｃａ Ｍａｘｉｍ．）
‘黑果绿肉－２’
‘（Ｃ．ｃｈｌｏｒｏｓａｒｃａ Ｍａｘｉｍ．）－２’
３．２２±０．１４
‘黑果绿肉－１２’
‘（Ｃ．ｃｈｌｏｒｏｓａｒｃａ Ｍａｘｉｍ．）－１２’
２．０２±０．０９
黑果绿肉－７
‘（Ｃ．ｃｈｌｏｒｏｓａｒｃａ Ｍａｘｉｍ．）－７’
３．１７±０．１２
甘肃山楂
（Ｃ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ Ｗｉｌｓ．）
‘甘肃山楂’
‘（Ｃ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ Ｗｉｌｓ．）’
３．５２±０．０６
准噶尔山楂
（Ｃ．ｓｏｎｇａｒｉｃａ Ｃ．Ｋｏｃｈ）
‘准噶尔山楂’
‘（Ｃ．ｓｏｎｇａｒｉｃａ Ｃ．Ｋｏｃｈ）’
５．４０±０．１８
湖北山楂
（Ｃ．ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ Ｓａｒｇ．）
‘佳甜’
‘Ｊｉａｔｉａｎ’
５．６２±０．２０
阿尔泰山楂
（Ｃ．ａｌｔａｉｃａ（Ｌｏｕｄ．）Ｌａｎｇｅ）
‘阿尔泰山楂’
‘（Ｃ．ａｌｔａｉｃａ（Ｌｏｕｄ．）Ｌａｎｇｅ）’
１．４５±０．２２
２．２ 黄酮性状的遗传多样性分析
性状的变异频率是性状遗传多样性的数量化体现，
变异系数越大，说明这些性状在不同品种之间具有丰富
的遗传多样性，在优异资源的选择方面的余地越大。从
表１和表２可以看出，８种山楂属植物叶片总黄酮含量
差异较大，含量在０．２５％～１１．６５％之间，遗传系数为
５７．０７％，具丰富的遗传多样性；该试验测定了１１９份山
楂种内资源，其中栽培品种１１６份，野生资源３份，其变
异系数为５４．７６％，显示了丰富的遗传多样性，《中国药
典》２００５版中规定山楂叶中的总黄酮含量不少于干重的
０９
北方园艺２０１４（２４）：８８～９２ ·生物技术·
７％，在１１９份资源中，有１６份资源达到并超出了这一标
准。而３份野生资源中，‘彰武山里红’较高为１０．４７％，
另外２份含量较低，‘晚秋山里红’总黄酮含量为
３．１７％，‘垂枝山里红’总黄酮含量为２．２５％。
表２ 山楂种质资源总黄酮含量的遗传多样性分析
Ｔａｂｌｅ ２ Ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｈａｗｔｈｏｒｎ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
种类
Ｓｐｅｃｉｅｓ
份数
Ｎｏ．ｏｆ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ
最小值
Ｍｉｎ
最大值
Ｍａｘ
平均值
Ｍｅａｎ
标准差
ＳＤ
变异系数
ＣＶ
山楂Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｓｐｐ． １１９ ０．２５ １１．６５ ４．３１ ２．３６ ５４．７６
山楂Ｃ．ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａＢｇｅ． １３５ ０．２５ １１．６５ ４．１ ２．３４ ５７．０７
从图１可以看出，总黄酮含量小于２％的资源占
１２．５９％；２％～３％资源占２３．７０％；３％～４％资源占
１４．０７％；４％～５％资源占１１．１１％；６％～７％资源占
４．４４％；高于７％的资源占１１．８５％。总黄酮含量在
２％～３％分布频率最高。该试验涉及山楂属８个种的
资源，山楂种内较多的品种资源，其结果为今后山楂资
源总黄酮分级及资源的利用奠定基础。
图１ 山楂总黄酮含量频率分布图
Ｆｉｇ．１ Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔ
３ 讨论与结论
黄酮是一种重要的药用成分，在多种药用植物上都
开展了相关的研究［１４－１７］，山楂因黄酮含量较高，一直被
作为提取黄酮类成分的重要原材料，近些年有关山楂各
器官（根、幼茎、木质茎、叶片、花）黄酮含量的测定已有较
多的开展［４，８－９］，研究表明山楂各器官均含有黄酮化合
物，其中以叶片所含总黄酮量最丰富，该试验所测定的
１３５份资源叶片平均含量达４．１１％，也证明了山楂叶片
在黄酮提取上具较高的利用价值。
该试验首次系统测定了山楂资源总黄酮含量，结果
显示山楂资源间总黄酮的含量差别很大，为今后生产、
育种及药用资源的有效利用提供新的材料。通过山楂
属植物叶黄酮类成分比较研究，发现了一些有利用价值
的叶用资源。总黄酮含量最高的是山楂种内资源‘海棠
山楂’为１１．６５％，其次是‘豫８００３’为１１．４５％，‘卧龙岗２
号’１０．９２％，‘吉林叶赫’１０．７０％，‘彰武山里红’１０．４７％，
‘益都敞口’１０．４０％，‘寒丰’１０．２０％，‘聂家裕２号’
１０．０７％，‘林县上口’９．２７％，‘北京灯笼红’７．９２％，‘劈
破石’７．７５％，‘铜台白野生’７．４７％，‘紫丰’７．４２％，‘黄宝
裕１号’７．２２％，‘黄果’７．０２％。其中‘黄果’为黄色果皮资
源，这些山楂资源体现出较高优势，可作为新的材料进行
山楂叶黄酮的提取。除山楂（Ｃ．ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ Ｂｇｅ．）外，其
它７个种的资源，总黄酮含量均低于中国药典所规定的标
准７％，当然该试验所测定的７个种的资源份数较少，结果
还不能完全代表这７个种内的资源含量水平。
该试验中有个别资源黄酮含量和前人测定结果不
一致，如‘大金星’、‘益都敞口’这２份资源含量与王光全
等［９］报道有所差异，分析主要原因是提取和测定方法不
同造成，同时山楂的栽植地区也会影响到其含量［１２］，也
有报道株龄不同黄酮含量也会有差异［１３］。目前国内外
研究者对山楂叶片总黄酮含量的测定，大多是关于测定
方法的建立，所用资源数量较少且没有确定资源名
称［５，８］，限制了黄酮资源的有效利用。该研究以国家果
树种质沈阳山楂圃收集的１３５份山楂属资源为试材，系
统的测定其总黄酮含量，以期为今后开展山楂黄酮资源
的挖掘利用及评价提供依据。
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［Ｊ］．Ｐａｋ Ｊ Ｂｏｔ，２０１３，４５（５）：１５１５－１５１９．
１９
·生物技术· 北方园艺２０１４（２４）：９２～９８
第一作者简介：李琳玲（１９８１－），女，湖北十堰人，博士，讲师，现主
要从事板栗种质资源评价与改良等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｌｉｎ－
ｌｉｎｇ１４３７＠１２６．ｃｏｍ．
责任作者：程水源（１９６５－），男，湖北天门人，博士，教授，博士生导
师，现主要从事经济林种质资源评价与利用等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：
ｓ＿ｙ＿ｃｈｅｎｇ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ．
基金项目：湖北省自然科学基金重点资助项目（２０１０ＣＢＢ０３９０１）；
湖北省教育厅高校产学研合作重点资助项目（Ｃ２０１００６０）；２０１１中
央财政林业科技推广示范资助项目（２０１１ＢＨ００３２）。
收稿日期：２０１４－０９－０９
板栗ＭＡＤＳ－ｂｏｘ基因的分离及ＲＮＡｉ表达载体构建
李 琳 玲１，２，廖 志 琴１，２，陈 小 玲１，２，程 水 源１，３，程 华１，２
（１．经济林木种质改良与资源综合利用湖北省重点实验室，湖北 黄冈４３８０００；２．黄冈师范学院 生命科学学院，湖北 黄冈４３８０００；
３．武汉轻工大学 生物与制药工程学院，湖北 武汉４３００２３）
摘 要：以中国罗田板栗品种“玫瑰红”的幼叶和花为试材，采用ＥＳＴ数据库分析，结合
ＲＡＣＥ技术从板栗中分离到ＭＡＤＳ基因的ｃＤＮＡ全长序列并构建了其ＲＮＡ干扰载体，研究开
花关键基因对板栗花芽分化的影响。结果表明：ＣｍＭＡＤＳ基因全长为９２２ｂｐ的ＣｍＭＡＤＳ的
ｃＤＮＡ序列，该序列含有１个６８１ｂｐ的可读框，编码２２７个氨基酸序列。生物信息学预测Ｃｍ－
ＭＡＤＳ蛋白的分子质量为２５．８７ｋＤａ，理论等电点为６．２７，Ｎ端具有 Ｍ盒保守序列，其二级结
构主要由α?螺旋和无规则卷曲组成。蛋白质同源分析表明，ＣｍＭＡＤＳ含有 Ｍ盒和Ｋ盒２个
特征性序列区域。同源建模分析显示ＣｍＭＡＤＳ序列与苹果ＭＡＤＳ蛋白的三维结构及活性位
点高度相似。系统进化分析表明，板栗 ＭＡＤＳ蛋白归属植物进化分支，且与太行花的 ＭＡＤＳ
蛋白归为一支。将ＣｍＭＡＤＳ基因２段相同长度（２８３ｂｐ）的反向互补片段ＲＭＡＤＳ和ＦＭＡＤＳ
连入载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ ｐｌｕｓ，构成中间载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ ｐｌｕｓ－ＦＲ。用ＢａｎＨＩ和ＫｐｎＩ同时酶
切中间载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ ｐｌｕｓ－ＦＲ和植物表达载体ｐＣｌ３０１－ｕｂｉ，回收ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ ｐｌｕｓ－ＦＲ的
酶切小片段，连入ｐＣ１３０１－ｕｂｉ大片段中，构成植物表达载体ｐＣ１３０１－ｕｂｉ－ＣｍＭＡＤＳ－ＲＮＡｉ。下一步
拟用构建好的ＲＮＡ干扰载体转化农杆菌并由其介导将重组质粒转入烟草，为深入研究该干扰载
体的功能及ＣｍＭＡＤＳ基因的功能提供参考。
关键词：板栗；ＭＡＤＳ－ｂｏｘ基因；开花；成熟期
中图分类号：Ｓ ６６４．２０３．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１４）２４－００９２－０７
板栗（Ｃａｓｔａｎｅａ ｍｏｌｉｓｓｉｍａ）属壳斗科栗属，是我国传
统的特产干果之一，分布于北半球的亚洲、欧洲、非洲和
美洲大陆［１－２］。中国板栗营养价值丰富，口感良好，囊皮
易于脱落，在国际市场上具有较强竞争力。发展板栗生
产不仅具有较高的经济效益，而且具有良好的生态效
益［３］。虽然我国是板栗生产的传统大国，在板栗栽培技
术方面积累了较为丰富的经验，但对板栗生产中长期存
在的雄花量过大、雌花量不足（雌雄花比例通常为１∶２
０００～１∶３ ０００）的问题一直未能得到很好地解决，导致单
产低、效益差，严重制约了板栗产业的健康发展［４］。
开花是高等植物从营养生长转向生殖生长的一个
重要的生理过程，开花既受外界环境因素的影响，又受
内在基因的调控，研究表明，在植物成花转变过程中，植
物的ＭＡＤＳ－ｂｏｘ基因网络起着非常关键的作用，植物依
Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｈａｗｔｈｏｒｎ（Ｃｒａｔａｅｇｕｓｓｐｐ．）
ＺＨＡＯ Ｙｕ－ｈｕｉ，ＷＡＮＧ Ｇａｎｇ，ＳＵ Ｋａｉ，ＧＵＯ Ｙｉｎ－ｓｈａｎ，ＤＯＮＧ Ｗｅｎ－ｘｕａｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ １１０１６１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ １３５ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｗｈｉｃｈ ｂｅｌｏｎｇ ｔｏ ８ｋｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｅｓ ｃｏｍｅ ｆｒｏｍ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｈａｗｔｈｏｒｎ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ
Ｎｕｒｓｅｒｙ ｏｆ Ｓｈｅｎｙａｎｇ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｕｓｉｎｇ ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒｙ ｔｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｔｈｅ
ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｈａｗｔｈｏｒｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｈａｗｔｈｏｒｎ ｐｏｓｓｅｓｓｅｓ ａｂｕｎｄａｎｔ ｖａｒｉａｔｉｏｎ，
ａｎｄ ｔｈｅ ｖａｒｉａｂｌｅ ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ ｗａｓ ５７．０７％，ｔｈｅ ｖａｒｉａｔｂｌｅ ａｍｐｌｉｔｕｄｅ ｗａｓ ０．２５％－１１．６５％．Ｉｔ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ｓｏｍｅ ｖａｌｕｂｌｅ
ｌｅａｆ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｈａｗｔｈｏｒｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｈａｗｔｈｏｒｎ ｌｅａｖｅｓ；ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ；ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
２９