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。
6
夭热产钧研究与开发
衬人 T U R人 LP R OU D CT R ES E人 R l Cl人帕 D O它 V石 L OP M尼加叮 一九九四年十二 月
山碴属主要植物叶子生药学研究
高光跃 秦香芹 李 鸣 冯毓秀
(中国医学科学院药用植物资源开发研究所 北京 1 0 0 09 4)
摘 耍 本文对我国山植属主要植物的叶子进行了光镜及电镜下组织构造的 比较 ,指出
了种间鉴别特征 . 并对黄酮等成分进行分析 ,结果表明山植 、 山里红 、 云南山植 、 湖北山植
的叶子中含有防治心血管系统疾病的牡荆家 、 芦丁和金丝挑贰等有效成分 ,为本属植物
的开发利用提供了依据 .
关扭词 山植属 , 叶子组织特征 , H PcL .黄酮
我国山植属植物资源非常丰富 , 山植 (。 “ 畴卯。 户。 耐汀汤 ) 、 山里红 ( c . 万. ` 了汤 , . o .oj )
的果实 , 除药用外食品工业销量很大 . 近年国内外对山植叶子的药理研究表明 , 叶子的总黄酮
可增加冠脉流量 l[] ; 对实验性心肌梗塞有对抗作用 ,对急性心肌缺血的保护作用 .2[ 3〕 ,牡荆素鼠
李搪贰能降低心肌耗氧量 ,与金丝桃贰等呈协同作用 I[] 。 国内临床试用山植叶总黄酮制剂能缓
解心绞痛 ,降低胆固醉及甘油三醋 .s[ ` , . 国外 已将锐刺山植 c( . 以 ,。二咖 )的叶和花制成 “ E冶加 ir -
ca dr
”药物应用于老年心脏系统疾病 . 从综合利用山植属植物资源考虑 ,本文对山植属植物的
叶子进行了化学分析 、 组织构造以及 HP L c 图谱鉴别的研究 ,为开发利用本属植物资源提供依
据 。
叶子的组织学特征
1
. 山植
叶柄中部横切面 : 表皮细胞一列 , 内有棕色内含物 ,外复角质层 . 皮层外侧为 2 列厚角细
胞 , 向内为类圆形薄壁细胞 , 最内侧薄壁组织中含草酸钙方晶较多 , 直径 15 一 20 卜m , 并有少量
簇晶 , 直径 20 ~ 30 林m 。 韧皮部外侧有纤维束和厚壁细胞组成的半月形维管束鞘 , 叶柄基部及主
脉上部的横切面 ,纤维束和厚壁细胞散在 , 不连成半月形 。 韧皮薄壁组织中有小方晶 .
叶片横切面 :上 、下表皮各有一列排列整齐的细胞 ,栅栏细胞两层 , 海绵组织由类圆形细胞
组成 , 含簇晶及方晶 。
叶片表面观 : 上 、 下表皮细胞类多角形 ,偶见单细胞非腺毛 , 下表面气孔密 , 叶脉处非腺毛
多 ,并有方晶沿脉排列 ,两侧有少量簇晶 。扫描电镜下观察角质层呈突起的波状弯曲 ,气孔外周
有一环状突起 (图 l , 2) .
收稿日期 : 19 9 3 年 一2 月 2 -
DOI : 10. 16333 /j . 1001 -6880. 1994. 04. 006
2 8
V o l
.
6N o
.
4
— 10
一 6
一一 1 1
— 1 2
竺í廖夸
图 1山植叶组织图( 、 · 2礴山
八. 叶柄及 主咏擞 切面简图( 、) 9 1;B. 叶柄横 切面详 图 ;c. 叶片擞 切面详图 ;D. 叶上 表面 ;
E
. 叶下丧面( E. 脉 处 丫 比 。) ; 1. 角质层 : 2. 表皮细胞 内含物 : 3. 厚角组织 ;峨. 皮层 ;5. 纤维 ;
6
. 厚壁细胞 ;7. 韧皮部 ; 8木射线 ;9. 导管 ;0 1. 方晶 ;月. 簇晶 ; 1 2. 表皮细胞
V ol
。
6NO
。
4 2 9
其他 1 0种山植属植物叶子光镜下组织构造的异同见表 1 。
农 l叶子的组织特征比较
植物 徽 切 面 表 面 观
皮层 韧皮部 韧皮部外侧纤维束及厚壁细胞群分布状况 表皮细施垂周璧 气孔 ’升脉处
方晶 簇晶 小方晶 上表面 下表面 (协 m)结晶叶 柄 叶羞部 中部 签部 中部 上部
山梭 + 十 。 唱犷 , 月形 半月形 半月形 器 , , , 曲 . 等蓄 3。一 ` 5
山里 + + ++
W
半月形 半月形嗡 无 平直 鄂 ,卜 ` 5红 + 十 + W 二 W 魏 平直 平直 2 0~ 2 8野山 + + 升 半月形 半月形 半月形 半月形 半月形 翼燕毒 , 直 3 2一 薰植 ” + “ W 半月形 W W W 。 波状 , 。 警蓄 3 2一 亨
+ + 。
W
半月形 半月形 半月形 半月形 . ` 至
万 阳 、 + + 嗡 半月形 半月形 半月形哪 平直 署苗 3 2一 “ 二山植 。 + 。 W 半月形 半月形 半月形 半月形 7叨湖北 “ + ” 哪 半月形 半月形 W 无 平直 豁 28 一“ 纂山植 。 十 + W 半月形 W 无 无 平直 豁 28 一 30 薪甘肃 什 十 十+ 半月形 半月形 半月形 票袭 无 平直 平直 2 4~ 月峨山植 平直 平直 3 2~ 4 4
辽宁 平直 馨酱 3 2一材山植
毛山植
华中山植
绿肉山植
枯红
山植
2
. 山里红
扫描 电镜下表面角质层纹与山植相似 , 层纹脊及凹处略有横向皱褶 ,气孔外周环状突起略
呈波状弯曲 (图 2) .
3
. 野山植
波状角质层纹多 4一 6 条略呈束排列 . 气孔小且密 ,其外有一窄环状突起的角质层纹 , 下表
面非腺毛较多 ,主要集中在叶脉上 (图 2 ) .
4
. 云南山植
角质层纹呈粗的波状突起 ,突起脊处呈大小不等的疙瘩状乳突 。气孔外周有一宽环状角质
层纹 ,表面不平坦或略呈乳突状 (图 2 ) 。
5
. 湖北山植
角质层纹略呈网状 。 气孔外周有一宽环状突起 (图 2 ) 。
6
. 甘甭山植
细角质层纹稀疏微波状排列 ,气孔外围有 2~ 3 条平行或扭曲状层纹环状围绕 (图 2 ) 。
V ol
.
6 N o
.
43 0
薰翼毓ù黝撇
图 2叶子下表面扫描电镜下特征
A
.山植 .B .山里红 汉 .野山植山 .云南山植邝 .湖北山借 ; F.甘肃山情 ,
G
. 辽山植 ; H . 毛山植 , 1. 枯红山植
V o l
。
6 N o
。
4
7
. 辽宁山植
波状角质层纹的纹脊及凹处布满细密的疙瘩状小乳突 。 气孔外有扭曲状层纹 1一 2条环状
围绕 (图 )2 .
8
.毛山植
角质层纹密集成束 ,有的被突起的层纹横向缠绕 。 气孔外的 2~ 3 条扭曲的层纹环状围绕。
叶表面及脉上非腺毛均多 (图 2 ) 。
9
. 枯红山植
细密的波状角质层纹略呈束状规则分布 . 气孔外周有 2一 3 条扭 曲成束的层纹环状围绕
(图 2 ) 。
H p L C 图谱鉴别
1
. 仪器药品及分析条件
见本文黄酮成分分析项下 。
2
. 样品制备及实验结果
准确称取各种叶子千燥粉末 (扔 目 ) 3 0 0m g ,加 乙醇超声振荡 , 滤液浓缩至干 ,转溶于 30 %
乙醇 ,加石油醚萃取 , 弃去醚层 , 乙醉液通过 eS p一 aP k CI .小柱 , 用 80 %乙醇洗脱 , 浓缩定容于
ZOm l 容量瓶中 。 分别吸取上述样品液 5“ m 进样 ,绘制色谱图 , 结果见图 3~ 4 。
黄酮成分分析
1
. 叶子总黄酮含 t 测定
( 1) 标准曲线的制作
精密称取芦丁 8 . s m g ,置 25耐容量瓶中 , 加入 甲醉溶解至刻度 ,分别取 0 . 5 , 0 . 8 , 1 . 0 , 1 . 5 ,
2
.
0
,
3
.
o m 一于 2 5 m l 容量瓶中 , 加 3 0 % 乙醇使成 1 0时 , 摇匀加 N a N o : 0 . 3 m l , 振摇后 静置 6 分
钟 , 再加 1 0% ^ l ( N o : ) 3 0 . 3m l , 摇匀 , 放置 6 分钟 , 加 4% N a o H 4m l , 振摇 , 加水至刻度 , 放置 1 5
分钟 ,在 s l o n m 测定吸收度 , 以吸收度为纵坐标 、 浓度为横坐标得一标准曲线 ,并计算回归方
程 。
回归方程
( 2) 样品含量测定
A 一 1 9 . 4 9 C一 0 . 0 6 6 7 r 一 0 . 9 8 4
准确称取干燥叶子粉末 ( 40 日 )1 . 05 ,加甲醇 30 ~ 5 0间 ,沙 氏提取器中提取 4 小时 , 回收甲
醇至干 ,加 8 0写乙醉转溶 , 石油醚 ( 60 一 90 ℃ )2 一 3 次脱色 ,弃去醚层 , 醉层加 80 %乙醉定容至
5 0m l 容量瓶中 ,取 s m l 加 30 % 乙醇至 1 0ml , 加 N a N o : 按标准曲线项下测定吸收度 , 依回归方
程计算样品含量 ,结果见表 2 。
2
. 叶子黄酮成分的 H P cL 测定
( 1) 仪器药品及分析条件
仪器 : aB , iln e 81 。 色谱工作站软件系统 , 49 0E 紫外检测器 , w a t er s 51 0 泵 。
色谱条件 : 。一OB dn aP k C拍柱 (3 . 9义 3 0 m m ) , 流动相水 : 异丙醇 : 乙酸 ~ 80 : 17 : 3 , 流速
1
.
4 m l / m i n
, 压力 3 0 0 0详 i , 检测波长 久, : 一 3 4 0 n m ,灵敏度 0 . 0 2 A o F 。
3 2ol V
。
6No
.
4
图 3叶子 P L H c鉴别圈谱
A
.山位叶 . R.山里红 叶 , c . 野山挂叶 . D . 云南山植叶 . E . 湖北山愉叶 ;
5
. 对照 品 ; 1 . 牡荆素 . 2 . 芦丁 , 3 . 金丝挑贰 . 4 . 牡荆家暇李褚贰
V心l 。 6 N o , 4
圈 确 叶子 H P LC 鉴别图进 (续前 )
F
. 甘南山值 ; 0 . 华中山值 . H . 枯红山位声 . 对照品 `
1
. 牡荆素 , 2 芦丁 。 3 . 金丝挑俄 , 4 . 牡荆东鼠李掩贰
对照品 : 牡荆素 ( v i t e山 ) ,芦丁 ( R u桩n ) , 金丝桃贰 ( H y pe r o s id e ) 。
( 2) 标准曲线的制作
精密称取牡荆素 3 . 5 m g , 芦丁 3 . Om s ,金丝桃试 3 . l m g , 混 合置于 2 . 0时 容量瓶中 , 加入
甲醇 : 水 ( 1 : l) 溶解至刻度 ,备用 。
取上述标准溶液 5 0 , 1 0 0 , 1 5 0 , 2 0 0 , 3 0 0 , 4 0 0 , 5 0 0林l ,分别置于 2 , 0而 容量瓶中 , 加甲醇 : 水
( 1
:
l) 至刻度 , 分别取 3· 0川进样 ,依峰面积与浓度绘制标准 曲线 。 所得 回归方程 。
牡 荆 素 c , ( I n」 · V o l ) ~ 5 . 1 8火 1 0 一 2 + 5 . 6 9 5义 1 0一 R
r 一 0 . 9 9 8 7
芦 丁 C * ( I。 』 · V o l ) = l , 5 9 0X 1 0 一 , + 2 . 1 7 3又 1 0一 , R
t = 0
.
9 9 8 7
V o l
.
6 N o
.
金丝桃贰 C , ( 1. , · v o l )二 一 6 . 7 3 9 火 1 0一 3+ 1 . 3 0 9 8 又 1 0一 R
r = 0
.
9 9 9 6
( 3) 样品含量测定
分别称取粉末 (切 日 )1 . 05 , 95 %乙醉超声提取至黄酮提尽 ,提取液回收至干 ,用 30 %乙醉
转溶并使其通过 eS p一 aP k cl .柱 , 80 %乙醉洗脱 ,浓缩洗脱液 ,定客至 2 . Oml 容量瓶中 ,备用 . 分
别吸取 3闪 进样测定 ,结果见表 2 。
农 2 叶子总黄翻及有效成分含 t ( % )
植 物 名 称
山植 e r a at e s u , p in n a t ir 记 a
山里红 c . p i n an 班 i血 v a r . ma 扣 r
野 lIJ 植 c . cu n e a at
云南山植 C . sca br i lo 恤
湖北山植 e . h u详h e n s七
甘肃 LIJ 植 c . k a sn u o n s 妇
华中山植 e . w i肠 n i i
枯红山植 e . 。 u r a n t远
采集地点时间
药 植 所 1 9 8 9 , 1 0
药 植 所 1 9 8 9 , 1 0
陕西丹风 19 9 1 , 6
云南弥渡 1 9 8 9 , 1 0
湖北随州 19 8 9 , 1 0
育海互助 19 9 1 , 9
青海互助 19 9 1 , 9
青海互助 19 9 1 , 9
总黄酮
2
.
1 5
1
。
9 4
3
.
8 3
1
.
8 4
牡荆素
0
.
9 5 3 4
0
.
69 4 5
0
.
6 4 4 8
2
.
0 6
1
.
3 5
5
。
2 6
3
.
2 6
0
.
2 12 7
芦 丁
0
`
15 6
0
.
1 2 2 4
0
.
4 6 3 4
+
0
.
1 2 1 1
0
.
1 5 9 3
十
+
金丝桃贰
0
.
1 6 3 7
0
.
2 3 1 2
0
.
2 3 4 3
0
.
3 3 5 9
0
,
2 4 5 7
0
.
0 0 4 7
0
.
7 8 3 5
0
.
1 1 7 5
+
+ 示徽 t , 一未侧到此成分
结果及讨论
( 1 )八种山植属植物叶子的 H P L c 图谱 , 在峰形 、 峰数上均有不同 ,具一定鉴别意义 。
( 2 ) 叶子的外部形态受环境影响变异较大 ,又粉碎状态难于鉴别 , 组织学研究结果发现叶
柄 及主脉韧皮部外侧纤维 束及厚壁细 胞的分 布状 况 、 扫 描电镜下 叶表面 角质 层纹 饰以及
H P L c 图谱等均有区别 .可 以作为种间鉴定的指标 。
( 3) 山植及云南 山植叶药理实验有降低胆固醇及抗心肌缺血作用 .3[ ’ 〕。 八种山植属植物叶
子中总黄酮含量野 山植最高 (3 . 83 % ) ,其次是山植及湖北山植 。 黄酮成分分析结果 , 山植 、 山里
红 、 云南山植和湖北 山植叶子中均含有牡荆 素 、 芦丁和金丝桃试三种成分 , 其含量 比果实高 2
一 10 倍 ,表明以上数种山植的叶子具有开发利用 前途 ,其 他几种有效成分含量低或资源不多 ,
利用价值较差 。
参 考 文 献
[ l」 N i k o l o v N e r a l . F l a v a o jd e o m l拟〕 s 孟t i o n o f C r a at e g us rn o n o g y n a . 1 Ts o la t i o n o f a f la v o n o id m i x t u r e f r o m th e l e a v es .
F a rm a st i y a
`
19 6 9
,
{ 9 ( 6 )
.
3 2
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g 。 `刘 so u r e es f o r ht e Pr e v e n it o n a n d t r ea t m e n t o f ca r id o v asc u l a r i l l n e浴
.
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o f t h is st ud y w i l be be
n e f i e at l f or ht e reso
u r e e u t i l让之 it o n o f Ch i n麟 C r a at e g u s P la n st .
K e y w o r ds C r a at e gus
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