全 文 ：★成分分析★
*国家科技支撑计划项目(2011BAI03B01) ;国家公益性行业科研专项(201303111) ;吉林省科技发展计划项目(20126046，20130303094，
2014020413YY，YYZX201258，20140311050YY) ;吉林省产业技术体系项目(201218) ;吉林省中医药产业发展专项(YYZX201258，
2009GJB10031) ;国家自然科学基金(31000154)
＊＊ 通讯作者 赵 岩 Tel:13404325685;E － mail:zhyjlu79@ 163． com
张连学 Tel:13844847715;E － mail:zlx863@ 163． com
第一作者 Tel:13604336672;E － mail:zmlhyy@ 126． com
ＲP － HPLC同时测定杨树花和杨树叶中 3 个植物甾醇含量*
侯莹莹1，赵岩1＊＊，唐国胜1，蔡恩博1，王士杰2，张连学1＊＊
(1．吉林农业大学中药材学院，长春 130118;2. 吉林农业科技学院中药学院，吉林 132101)
摘要:建立一种同时测定杨树花和杨树叶中豆甾醇、麦角甾醇、β －谷甾醇含量的反相高效液相色谱法。方法:以甲醇为流动
相，测定杨树花和杨树叶中豆甾醇、麦角甾醇、β － 谷甾醇的含量。结果:杨树花和杨树叶中 3 个植物甾醇的线性范围为
0. 00008 ～ 0. 08 μmol·mL － 1，r ＞ 0. 9990。杨树花中麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇的加样回收率分别在 92. 6% ～ 100. 0%、
93. 9% ～ 100. 1%、94. 0% ～ 100. 0% 之间，ＲSD(n = 6)分别为 2. 8%、2. 2%、2. 8%;杨树叶中各甾醇加样回收率分别在
91. 3% ～ 100. 0%、91. 2% ～ 100. 0%、92. 5% ～ 100. 1%之间，ＲSD(n = 6)分别为 2. 7%、2. 7%、2. 5%。结论:该方法稳定、快
速，精密度高，线性范围宽，适合杨树花和杨树叶中的豆甾醇、麦角甾醇、β －谷甾醇含量测定。
关键词:杨树花;杨树叶;植物甾醇;豆甾醇;麦角甾醇;谷甾醇;含量测定;反相高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2014)12 － 2150 － 04
Determination of three phytosterols in Flos Populi Canadensis
and leaves of Populus canadensis Moench by ＲP － HPLC*
HOU Ying － ying1，ZHAO Yan1＊＊，TANG Guo － sheng1，
CAI En － bo1，WANG Shi － jie2，ZHANG Lian － xue1＊＊
(1. Chinese Medicine Material College of Jilin Agricultural University，Changchun 130118;
2. College of Chinese Medicine，Jilin Academy of Agricultural Science and Technology，Jilin 132101，China)
Abstract Objective:To establish a method for determination of the contents of three phytosterols(stigmasterol，
ergosterol，β － sitosterol)from Flos Populi Canadensis and leaves of Populus canadensis Moench by ＲP －
HPLC. Methods:With methanol as the mobile phase，HPLC method was adopted to determine contents of phytos-
terols in Flos Populi Canadensis and leaves of Populus canadensis Moench. Ｒesults:The three phytosterols had
good linearity in their ranges of 0． 00008 － 0. 08 μmol·mL － 1(the coefficients of correlation were all over
0. 9990)． The average recoveries of stigmasterol，ergosterol，β － sitosterol in Flos Populi Canadensis were 92. 6% －
100. 0%，93. 9% －100. 1%，94. 0% －100. 0%，and ＲSDs(n = 6)were 2. 8%，2. 2%，2. 8%，respectively;the av-
erage recoveries(n = 6)of the three phytosterols in leaves of Populus canadensis Moench were 91. 3% － 100. 0%，
91. 2% －100. 0%，92. 5% －100. 1%，and ＲSDs were 2. 7%，2. 7%，2. 5%，respectively. Conclusion:The meth-
od is sensitive，accurate and reproducible，and reliable for the determination of phytosterols in Flos Populi Canaden-
sis and leaves of Populus canadensis Moench．
Key words:Flos Populi Canadensis;leaves of Populus canadensis Moench;phytosterol;stigmasterol;ergosterol;si-
tosterol;content determination;ＲP － HPLC
—0512— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(12)
杨树(Populus spp)为落叶乔木，是杨柳科(Sali-
caceae)杨属(Populus L．)植物的统称。杨树花为杨
柳科植物加拿大杨 Populus canadensis Moench、毛
白杨 P． tomentosa Carr． 或同属其他多种植物的干
燥雄花序，于 1977 年被中国药典收载［1］;杨树花
资源丰富，化学成分多样［2］。杨树叶占树木总重
量 10%左右，是一种宝贵的资源，有抗菌、抗炎、镇
痛、抗病毒、活血化瘀等多种生物活性及祛风、行
痕、消炎等功效［3］，临床应用十分广泛。植物甾醇
是天然存在于植物中的一类微量活性成分，被誉
为“生命的钥匙”，主要包括豆甾醇、β －谷甾醇、麦
角甾醇等，与胆固醇有着相似的甾核结构。植物
甾醇具有降血脂、抗肿瘤、抗炎、抗氧化活性［4 － 9］
等多种生物活性并，得到了一定的开发利用，包
括:1)用于生产固醇类药品［10］，2)通过植物甾醇
降低胆固醇等特性来开发营养和功能食品［11］，
3)作为表面活性剂用于化妆品、口红等［12］。目前
还没有关于杨树花和杨树叶中植物甾醇的相关报
道，本实验采用高效液相色谱法对杨树花和杨树
叶中 3 个植物甾醇的含量进行了测定，为杨树花
和杨树叶的开发利用提供参考。
1 材料与仪器
1. 1 材料
杨树花和杨树叶采自吉林农业大学校园内，经
吉林农业大学张连学教授鉴定为加拿大杨 Populus
canadensis Moeneh的雄花序和叶子，阴干，粉碎，过
20 目筛备用。
1. 2 仪器与试剂
CXTH －3000 高效液相色谱仪(北京创新通恒
科技有限公司) ;DHG － 9140A 型恒温干燥箱(上海
精宏实验设备有限公司) ;2XZ － 4 型旋片式真空泵
(上海博一泵业制造有限公司) ;DZF6020 真空干燥
器(上海一恒科学仪器有限公司) ;ABS 320 － 4N 型
分析天平(上海岛韩实业有限公司)。对照品麦角
甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇，纯度均为 95%(高效液相
色谱法检测) ，上海莱雀生物科技有限公司。甲醇
为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 溶液的配制
2. 1. 1 氢氧化钾乙醇溶液 在氮气的保护下，将氢
氧化钾 14. 0 g 溶解在无水乙醇中，冷却至室温后，
用无水乙醇定容至 100 mL，即得浓度为 2. 5 mol·
L －1氢氧化钾乙醇溶液。
2. 1. 2 混合对照品储备液的配制 分别精确称取
对照品麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇适量，加甲醇配
制成浓度均为 0. 08 μmol·mL － 1的混合对照品储备
液，4 ℃保存。
2. 1. 3 供试品溶液 取杨树花和杨树叶的粉末各
1. 5 g，精密称定，分别加入氢氧化钾乙醇溶液6 mL
后加塞密封，剧烈振摇 30 s，置于 70 ℃的水浴锅中
皂化 1 h，每隔 10 min 振摇 1 次，冷却至室温后打
开瓶塞，加超纯水 1 mL 和正己烷 5 mL，密封后剧
烈振摇 30 min，静置，将上层(正己烷层)转移至
25 mL小烧杯中，水层再用正己烷萃取 3 次，每次
5 mL，合并正己烷提取液，挥干，残留物加甲醇溶
解，定容于 10 mL 量瓶，过 0. 45 μm 微孔滤膜，
备用。
2. 2 样品分析方法的建立
2. 2. 1 色谱条件 色谱柱:大连江申分离科学技术
公司 C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相:甲醇;
流速:1. 0 mL·min －1;检测波长:210 nm;柱温:35
℃;进样量:20 μL。色谱图见图 1。
图 1 高效液相色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms
a．对照品(reference substances) b．杨树花(Flos Populi Canadensis)
c．杨树叶(leaves of Populus canadensis Moench)
1. 麦角甾醇(ergosterol) 2. 豆甾醇(stigmasterol) 3. β － 谷甾醇
(β － sitosterol)
2. 2. 2 线性关系考察 取混合对照品储备液
0. 01、0. 10、0. 20、0. 4、0. 6、0. 8、1. 00 mL，分别
置 1 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得
系列浓度对照品溶液。分别精密量取对照品溶
液20 μL，注入液相色谱仪，以各植物甾醇浓度
(X，μmol·mL － 1)为横坐标，峰面积积分值(Y)
为纵坐标，进行回归计算分别得回归方程，3 个植
物甾醇的线性回归方程及相关系数见表 1。3 个
植物甾醇的检测浓度在 0. 00008 ～ 0. 08 μmol·
mL － 1范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性
关系。
—1512—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(12)
表 1 3 个植物甾醇的线性回归方程
Tab 1 Linear regression equation of three phytosterols
植物甾醇
(phytosterols)
回归方程
(regression equation)
r
麦角甾醇(ergosterol) Y =6 ×10 － 7X +5 ×10 － 4 0. 9998
豆甾醇(stigmasterol) Y =7 ×10 － 7X －2 ×10 － 4 0. 9998
β －谷甾醇(β － sitosterol) Y =3 ×10 － 7X +7 ×10 － 4 0． 9995
2. 2. 3 精密度试验 取混合对照品溶液，连续进样
5 次，测定峰面积。结果麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾
醇峰面积的 ＲSD 在 0. 43% ～ 1. 2%之间，表明仪器
精密度良好。
2. 2. 4 稳定性试验 取杨树花和杨树叶的供试品溶
液，分别于 0、1、2、4、6、8、12 h进样，测定峰面积。结果
麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇峰面积的 ＲSD在 0. 61%
～1. 9%之间，表明供试品溶液在 12 h内比较稳定。
2. 2. 5 重复性试验 取同一批杨树花和杨树叶粉
末，分别平行测定 6次，按照上述色谱条件进样，测定
峰面积，并计算植物甾醇含量。结果杨树花中麦角甾
醇、豆甾醇、β －谷甾醇百分含量分别为 0. 0138%、
0. 3642%、0. 2591%，其 ＲSD在 0. 85% ～2. 22%之间;
杨树叶中麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇百分含量分别
为 0. 221%、0. 1234%、0. 1341%，其 ＲSD 在 0. 69% ～
2. 17%之间，表明本方法重复性良好。
2. 2. 6 杨树花植物甾醇加样回收率 取已测知含
量的杨树花粉末 0. 75 g(约含麦角甾醇、豆甾醇、
β －谷甾醇 0. 10、2. 75、1. 94 mg) ，精密称定，加入混
合对照品溶液(麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇三者的
质量浓度分别为 1、20、20 mg·mL －1)0. 1 mL，并挥干
溶剂，按“2. 1. 3”项下方法制备供试溶液，平行 6 次，
进样测定，计算各植物甾醇的回收率。结果杨树花中
麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇的加样回收率分别在
92. 6% ～ 100. 0%、93. 9% ～ 100. 1%、94. 0% ～ 100. 0%
之间，平均回收率(n = 6)分别为 98. 0%、96. 4%、
96. 5%，ＲSD分别为 2. 8%、2. 2%、2. 8%。
2. 2. 7 杨树叶植物甾醇加样回收率 取已知含量的
杨树叶粉末 0. 75 g(约含麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇
1. 66、0. 96、0. 98 mg)，精密称定，加入混合对照品溶液
(麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇三者的质量浓度分别为
20、10、10 mg·mL －1)0. 1 mL，并挥干溶剂，按“2. 1. 3”
操作，平行 6次，计算各植物甾醇的回收率。结果杨树
叶中的麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇加样回收率分别
在 91. 3% ～100. 0%、 91. 3% ～100. 0%、 92. 5% ～
100. 1%之间，平均回收率(n = 6)分别为 97. 5%、
95. 6%、97. 3%，ＲSD分别为 2. 7%、2. 7%、2. 5%。
2. 3 样品测定
取 3 批杨树花和杨树叶样品，按上述方法处理，
分别测定麦角甾醇、豆甾醇、β －谷甾醇的含量。结
果见表 2。
表 2 杨树花及杨树叶中 3 个植物甾醇的含量(mg·g －1，n =3)
Tab 2 Species and contents of the phytosterols in Flos Populi Canadensis and leaves of Populus canadensis Moeneh
样品(sample) 批次(batch) 麦角甾醇(ergosterol) 豆甾醇(stigmasterol) β －谷甾醇(β － sitosterol)
杨树花 1 0. 1361 3. 652 2. 581
(Flos Populi Canadensis) 2 0. 1279 3. 721 2. 472
3 0. 1434 3. 580 2. 613
杨树叶 1 2. 205 1. 280 1. 305
(leaves of Populus canadensis Moeneh) 2 2. 281 1. 301 1. 354
3 2. 180 1. 192 1. 275
由表 2 可见:无论是杨树花中还是杨树叶中，植
物甾醇含量丰富而全面;在杨树花中，豆甾醇含量最
高，平均含量为 3. 651 mg·g －1;在杨树叶中，麦角
甾醇的含量最高，平均含量为 2. 222 mg·g －1。
3 讨论
本实验发现并检测了杨树花和杨树叶中麦角甾
醇、豆甾醇和 β －谷甾醇的含量。本文之所以选择
皂化法提取，是因为植物甾醇主要以游离态、甾醇酯
(脂肪酸酯和酚酸酯)、甾基糖苷和酰化甾基糖苷等
形式存在，皂化后可充分提取。在植物甾醇的提取
过程中，针对皂化时的水浴锅温度和皂化时间进行
了考察，结果发现温度为 70 ℃、皂化时间 1 h 时提
取的效果最好。植物甾醇的检测条件在赵英永
等［13］检测条件的基础上做了改善，最终确定了最优
的色谱条件为流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 210
nm，柱温 35 ℃。高效液相色谱法测定植物甾醇具
有选择性高、分析速度快和灵敏度高等优点，已成为
较为理想的检测植物甾醇的方法。故本文建立了利
用反相高效液相色谱测定杨树花和杨树叶中麦角甾
醇、豆甾醇和 β －谷甾醇含量的方法。该方法稳定、
—2512— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(12)
快速，精密度高，线性范围宽，适用于杨树花、杨树叶
的植物甾醇的含量测定。杨树花和杨树叶来源广
泛，价格低廉，同时实际利用价值也很大，本实验为
杨树花和杨树叶中植物甾醇的深入开发提供了理论
支撑。
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(本文于 2014 年 4 月 2 日收到)
—3512—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(12)