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高效液相色谱法测定九节龙中岩白菜素的含量



全 文 :3  讨论
本文采用 HPLC法测定了东风桔中伞形花内酯
的含量 ,为评价其质量提供了依据。实验结果表明:
不同产地东风桔中伞形花内酯的含量差异较大 。
参 考 文 献
[ 1] 广东省食品药品监督管理局编 .广东省中药材标准
(第一册).广州:广东科技出版社 , 2004:72-73.
(2006-08-28收稿)
高效液相色谱法测定九节龙中岩白菜素的含量
宋良科 ,周为民
(西南交通大学药学院 ,四川峨眉 614202)
  摘要 目的:测定九节龙中岩白菜素的含量。方法:高效液相色谱法 , HypersilC18ODS色谱柱 , 柱温 25℃,波长
275nm, 流动相:甲醇-水(20∶80),流速 0.600 ml/min;压强 1400Pa。结果:岩白菜素质量在 0.098 ~ 0.591 μg范围
与峰面积值的线性关系良好(r=0.9998),平均回收率 102.0%, RSD=1.4%(n=6);在该条件下 , 九节龙岩白菜素
含量在 0.59%以上。结论:在本文条件下 ,九节龙中岩白菜素的含量几乎与矮地茶相同。
关键词 九节龙;岩白菜素;高效液相色谱法
中图分类号:R284.1  文献标识码:A  文章编号:1001-4454(2007)04-0422-03
ContentDeterminationofBergenininArdisiapusilabyHPLC
SONGLiang-ke, ZHOUWei-min
(MedicineColegeofSouth-westJiao-tongUniversity, Emei614202, China)
Abstract Objective:TodeterminethecontentofbergenininArdisiapusilla.Methods:HighPerformanceLiquidChromatography
wasperformedonHyersilC18ODS.Thechromatorgraphicconditionswereasfolows:methanol-water(20∶80)asmobilephase, flow
ratebeing0.600 ml/minanddetectingwavelengthat275 nm.Thecolumntemperaturewas25℃.Results:Agoodlinearityofberge-
ninwasshowninrangeof0.098-0.591 μg(r=0.9998), theaveragerecoveryis102.0%, RSD=1.4%(n=6).Thecontentofber-
genininArdisiapusillais59% atleast.Conclusion:ThecontentofbergenininArdisiapusillaandA.japonicaisidentical.
Keywords Ardisiapusila;Bergenin;HPLC
  岩白菜素(bergenin)又称虎耳草素 、矮地茶素 ,
一般是从虎耳草科植物和紫金牛科植物中提取的有
效成分 ,具有良好的止咳祛痰作用。临床多用于治
疗慢性气管炎等。由于岩白菜素生理活性显著 , 20
世纪 90年代对紫金牛属多种植物中岩白菜素含量
的研究虽有报道〔1 ~ 3〕 ,但其研究结果有待进一步证
实 。九节龙(ArdisiapusilaA.DC)系紫金牛科紫金
牛属植物 ,广泛分布于我国南方各省 ,药用历史悠
久 ,资源丰富 ,其有祛风 ,除湿 ,消炎止痛 ,舒筋活络
等功效;现代研究认为九节龙皂苷具有明显增强巨
噬细胞的吞噬作用 ,可以提高人体免疫功能;而在四
川民间医生用九节龙配方止咳 ,效果较好 。因此 ,今
用高效液相色谱法测定九节龙中岩白菜素的含量 ,
并在同一条件下比较矮地茶 〔1〕与九节龙两种药材
的岩白菜素的含量关系 ,为进一步研究九节龙和扩
大其药用范围奠定基础。
1  实验材料与仪器
1.1  药材样品 采收九节龙 Ardisiapusila(2006
年 4月 , 峨眉山伏虎寺附近)、矮地茶 A.japonica
(2006年 4月 ,峨眉山善觉寺附近)各 1 kg,经笔者
鉴定无误;晾至六成干 ,切碎 ,烘干(烘干时温度不
超过 65℃),用小型粉碎机粉碎 ,过筛备用 。
1.2 试剂 双蒸馏水 、甲醇(色谱纯);岩白菜素对
照品:中国药品生物检定所 ,批号:1532-200501。
1.3 仪器 超声仪器:SK7200LH上海科导超声仪
器有限公司;烘箱:101G-3型上海实验仪器厂有限
公司;分析天平:TG332A上海天平仪器厂;高效液
相色谱仪:Waters2487紫外检测器;HypersilC18ODS
色谱柱(4.6×200mm, 5μm);Waters515HPLC泵 ,
美国 waters;Classvp色谱工作站 。
2 方法
2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充
剂;柱温:25℃;以甲醇-水(20∶80)为流动相;检测波
长为 275 nm, 流速为 0.600 ml/min;压强为 1400
Pa。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取岩白菜素对照
·422· 中藥材 JournalofChineseMedicinalMaterials  第 30卷第 4期 2007年 4月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2007.04.018
品 3.97mg,溶于 25ml容量瓶中 ,精密吸取 3.1 ml
于 10ml容量瓶中 ,配置浓度为 49.23 μg/ml的溶
液 ,定容备用 。
2.3  供试品溶液的制备 取九节龙 、矮地茶细粉
各 2份 ,精密称定每份 1.0 g,分别编号;置锥形瓶
中 ,精密加入甲醇 100 ml,称定重量 ,超声提取 ,放
冷 ,再称定重量 ,用甲醇补足失去的重量 ,摇匀 ,滤
过 ,取续滤液 ,即得 ,备用供测定 。
2.4  线性关系的考察 分别精密吸取岩白菜素对
照品 (浓度为 49.23 μg/ml)溶液 2、4、 6、8、 10、 12
μl,依次进样;以岩白菜素的标准浓度为横坐标 ,峰
面积为纵坐标 ,理论板数按岩白菜素峰计算不低于
1500;进行线性回归 , 外标法测定;岩白菜素在
0.0985 μg~ 0.5908μg范围内与峰面积值呈良好线
性关系 。回归方程:Y=19652.10X-1340.25 , r=
0.9998, (n=6)。
2.5  精密度试验 精密吸取岩白菜素对照品(浓
度为 49.23μg/ml)溶液每次 20μl,连续进样 5次测
定峰面积值 ,计算得岩白菜素的 RSD为 0.19%(n
=5)。
2.6  稳定性试验 配制的岩白菜素对照品溶液常
温下保存 ,每 4 h进样一次 ,每次进样 20 μl, RSD=
0.32%(n=6);岩白菜素在 24 h中稳定性良好 。
2.7  加样回收率试验 取已知含量的供试品溶液
6份 ,每份 20 ml,每份精密加入对照品溶液 5ml,定
溶于 25 ml的容量瓶中 ,精密吸取 20 μl的混合液 ,
依法按上述条件测定 , 计算平均回收率为 102%,
RSD=1.4%(n=6)。
2.8  样品水分测定 分别称取九节龙样品和矮地
茶样品各约 5 g,按 《中国药典 》2005版(一部)附录
Ⅸ H水分测定法 ,测得九节龙的含水量为 11.25%,
矮地茶的含水量为 12.3%。两者基本一致 ,符合要
求 。
2.9  样品岩白菜素的测定 按上述色谱条件 ,精
密吸取各供试样品 5 μl,依次分别进样(n=3),测
定九节龙样品中岩白菜素的峰面积值与矮地茶岩白
菜素的峰面积值 ,按干品计算其含量(见表 1)。
 表 1  各样品岩白菜素含量测定结果
序号 样品名称 编号 保留时间 峰面积 峰高 含量
1 九节龙 a1 5.836 356642 20802 0.59%
2 九节龙 a2 5.839 372521 21421 0.61%
3 矮地茶 b1 5.837 375935 21653 0.61%
4 矮地茶 b2 5.838 375358 21627 0.62%
3 结果与讨论
3.1 岩白菜素在 0.098 ~ 0.591 μg范围与峰面积
积分值呈良好线性关系 ,相关系数为 0.9998,平均
回收率 102.0%, RSD=1.4%, n=6;在该条件下 ,九
节龙和矮地茶的岩白菜素含量几乎一致 ,均符合
《中国药典 》2005版(一部)矮地茶药材要求:岩白
菜素含量不低于 0.50%。
3.2 九节龙和矮地茶是近缘种 ,许多地方的民间
将它用于止咳 ,可能与其岩白菜素含量较高有关 。
3.3 在四川 、重庆等省市 ,九节龙 Ardisiapusila与
矮地茶 A.japonica常混淆使用 ,但在上述完全相同
的实验条件下 ,其色谱图表明矮地茶明显比九节龙
多一个色谱峰 ,而在药材性状上矮地茶茎和叶无毛
或毛很稀少 ,叶缘锯齿较小;九节龙茎和叶上面具糙
毛 ,背面及叶柄具柔毛 ,叶缘具粗锯齿等 ,应区别药
用。
参 考 文 献
[ 1] 刘姩 ,李颖 , 郭济贤 ,等 .中国紫金牛属的分类及其岩白
菜素的含量 .上海医科大学学报 , 1993, 20(1):50-52.
[ 2] 邬家林 ,庞伟 , 宋良科 ,等 .四川紫金牛属药用植物的薄
层层析鉴别 .中药材 , 1994, 17(3):26-27.
[ 3] 张艺 ,赖先容 , 孟宪丽 ,等 .紫金牛属药用植物中岩白菜
素的高效液相色谱法测定及资源利用 .中国中药杂
志 , 1996, 21(8):459-461.
[ 4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 .一部.北京:
化学工业出版社 , 2005:251.
(2006-08-28收稿)
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现有 1990年(50元), 1991年(50元), 1992年(50元), 1995年(70元), 1996年(70元), 1997年(75
元), 1998年(精装 100元), 1999年(精装 100元), 2000年(精装 150元), 2001年 、2002年 、2003年 、2004年
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·423·中藥材 JournalofChineseMedicinalMaterials  第 30卷第 4期 2007年 4月