全 文 ：　 　JTCVM
2007年第 4期
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实验技术
chitosan on ra t knee ca rtilage s[ J] . B iom a te ria ls, 1999,
20(20):1937 - 1944.
[ 14] 刘万顺 ,陈西广 , 张学成 ,等. 羧甲基壳多糖毒理学研究
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杨树花及其复方制剂对兔大肠杆菌的体外抑菌试验
董发明 ,王天奇 ,夏海林
(河南科技大学动物科技学院 ,河南洛阳　471003)
　　中图分类号:S853.74　 　　　　　　文献标识码:A　　文章编号:1000 - 6354(2007)04 - 0035 - 02
　　杨树花在民间被作为草药广泛应用 , 用其水煎剂治疗人
的急性肠炎 、细菌性痢疾疗效显著 ,且未发现有毒副作用;对
皮肤瘙痒及荨麻疹等也有满意疗效。潘继兰用杨树花防治
羔羊痢疾 ,疗效可达 90%以上 [ 1] , 潘立辉等 、王宪超 、梁峰用
杨树花治疗羊腹泻 , 效果很好 [ 2 - 4];黄旭明用杨树花与鱼腥
草 、苦参等组成复方治疗仔猪白痢也收到很好疗效 [ 5] , 笔者
等将杨树花与其它中药组成 “腹泻康”防治兔腹泻疗效明
显 [ 6] 。但是 ,由于对杨树花的使用效果缺乏药理学理论依
据 ,使得其未被充分开发利用。该试验对杨树花及其复方制
剂进行体外抑菌试验 ,旨在探讨杨树花及其复方制剂对兔大
肠杆菌的抑制效果 ,优化其复方配伍效果。
1　材料与方法
1. 1　材料
1. 1. 1　菌种　兔大肠杆菌:河南科技大学动物饲养室 (兔
场)分离提取 , 微生物实验室鉴定。
1. 1. 2　试验仪器　无菌操作台 (SW. CJ. IF型 苏净集团安
泰公司)、手提式灭菌消毒器(CRDX - 280型 上海申安医疗
器械厂)、微量振荡仪(TL - 2000MM - I型 姜堰市天力医疗
器械有限公司)、光学显微镜(XSZ - 81型 梧州市光学仪器
厂)、微量移液器(WKY型 上海荣泰生化工程有限公司 );微
量反应板 、平皿 、吸管 、试管 、三角瓶 、玻棒 、移液管等 (高压蒸
汽灭菌处理);试管架 、接种环 、酒精灯等。
1. 1. 3　试验药物　杨树花 , 产于河南洛阳的杨树落花花序 ,
经鉴定为加拿大杨;白头翁 、黄柏 、大青叶 、穿心莲等由洛阳
市医药公司购买;指示剂 TTC, 即 0. 5%氯化三苯四氮脞 , 实
验室自配。
1. 2　方法
1. 2. 1　杨树花单味药液制备　将杨树花烘干 , 取 250 g加水
至 2 500 m l, 浸泡 20 m in, 武火煮沸后文火煎 30 m in, 滤出煎
液。共煎 3次 ,合并 3次滤液 ,浓缩至 250 m l(药液中生药含
量为 1 g /m l), 高压灭菌 , 4 ℃冰箱保存待用。
1. 2. 2　杨树花复方制剂　杨树花 30 g,黄柏 15 g,白头翁 30 g,
穿心莲 30 g,大青叶 15 g, 混合加水 1 200 m l,浸泡 20 m in, 武
火煮沸后文火煎 30 m in, 滤出煎液。共煎 3次 , 合并 3次滤
液 ,浓缩至 120m l(药液中生药含量为 1 g /m l),高压灭菌 , 4℃
收稿日期:2007 -01 - 18
作者简介:董发明(1964 - ),男 ,副教援 ,主要从事中兽医药研究与教
学。
冰箱保存待用。
1. 2. 3　无杨树花复方制剂　黄柏 15 g, 白头翁 30 g,穿心莲
30 g, 大青叶 15 g,混合加水 900 m l, 浸泡 20 m in,武火煮沸后
文火煎 30 m in, 滤出煎液。共煎 3次 ,合并 3次滤液 , 浓缩至
90 m l(药液中生药含量为 1 g /m l), 高压灭菌 , 4 ℃冰箱保存
待用。
1. 2. 4　培养基制备　肉汤培养基:取牛肉膏 2. 5 g, 蛋白胨
5. 0 g,磷酸氢二钾 0. 5 g, 氯化钠 2. 5 g, 蒸馏水 500 m l, 放入
烧杯中混合加热溶解 ,用 0. 1 m ol /lNaOH溶液校正 pH值至
7. 4,再加热 10 m in, 滤纸过滤 , 滤过后的肉汤须完全透明 , 分
装于三角瓶中 ,包装 , 手提式灭菌消毒器 15磅 (121 ℃)灭菌
30 m in。伊红美兰琼脂培养基:取 2%无糖琼脂基础培养基
(pH 7. 6)100 m l加热溶化 , 待冷至 60℃时加入无菌 20%乳
糖溶液 2 m l, 无菌 2%伊红水溶液 2m l, 无菌 0. 5%亚甲蓝水
溶液 1 m l, 混匀后调整 pH值为 7. 0 - 7. 2,分装于三角瓶中 ,
116 ℃灭菌 30 m in, 冷却至 60℃左右以无菌操作法倾注灭菌
平皿中备用。
1. 2. 5　菌种活化 、分离 、培养大肠杆菌　将病兔粪便稀释
后 ,用接种环接种于伊红美兰培养基中培养 24 h(长成圆形 、
凸起 、光滑 、湿润 、紫黑色 、中等稍大菌落);经涂片 、染色 、镜
检(无芽孢直杆菌 , 革兰氏阴性 ,两端钝圆 , 散在或成对 ,大多
有周生鞭毛 ,通常无可见荚膜 , 碱性染料有良好着色性 ,菌体
两端偶尔略深染)、V -P(阴性)和甲基红(阳性)生化检验确
定后 ,在普通肉汤中增菌培养(混浊), 备用。
1. 2. 6　菌落计数　吸取菌液 1 m l,用生理盐水作 10倍顺序
稀释为 10- 1 , 10- 2 , 10- 3 , …… 10- 8。取稀释度为 10- 5 - 10- 8
的菌液各 0. 1 m l在营养琼脂平板上涂匀(每一稀释度作 2个
平板), 于 37 ℃培养 18 h。挑取菌落数在 30 - 300个之间的
平板计数 ,取两个平板的平均菌落数进行计算。根据菌液的
稀释倍数 ,计算每 m l菌液的活菌数(cfu /m l)。
根据平板计数结果 ,将试验菌液用生理盐水稀释成含菌
量为 105 cfu /m l,备用。
1. 2. 7　药敏试验　大肠杆菌对杨树花单味制剂及其复方制
剂和无杨树花复方制剂的敏感性试验采用试管二倍稀释法。
取灭菌试管 27支排于试管架上 ,用移液管吸取营养肉汤至
每支试管中各 2 m l;吸取制备好的药物原液 2 m l加入第 1
管 ,混匀后 , 吸取 2 m l移入第 2管 ,混匀后 ,再由第 2管吸取 2
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实验技术
m l于第 3管 ,依此类推 , 直至第 8管 , 吸取 2 m l弃去 ,第 9管
不加药液作对照;在每个试管中加入培养的稀释后的菌液各
0. 2 m l,将试管液按稀释顺序用微量移液器依次转入 100 μl
于对应板孔内 ,做好标记 ,再滴注指示剂 TTC 5μl于各孔内 ,
在微量振动仪上摇匀后 ,置 37℃恒温箱中培养 16 - 18 h, 观
察结果。无细菌生长的平板孔的稀释倍数即为该药液对菌
株的最低抑菌浓度(M IC)。试验重复 3次 ,结果取平均值。
2　结果
大肠杆菌对杨树花单剂及其复方制剂和无杨树花复方
制剂的敏感性见表 1。
表 1　杨树花各制剂抑菌效果对比(M IC /m g m l- 1)
　　药　物 大肠杆菌
杨树花单味 125
杨树花复方制剂 >62. 5
无杨树花复方制剂 >62. 5
　　注:“ >”表示该稀释倍数孔有极少细菌生长。
由表 1可看出 ,杨树花单味与其他两复方制剂都有抑菌
作用, M IC值分别为 125 mg /m l和 62. 5 mg /m l,但抑菌效果有
差异;杨树花复方与无杨树花复方相比 , 两者效果基本等同。
3　讨论
3. 1　利用试管二倍稀释法结合平板法加指示剂测定杨树花
及其复方制剂对大肠杆菌的体外抑菌作用 , 其结果判定直
观 、简单。从体外抑菌作用观察看 , 杨树花单味制剂与其复
方制剂和无杨树花复方均有抑菌作用 , 但抑菌效果上有差
异 ,杨树花复方与无杨树花复方两者效果等同。
3. 2　杨树花复方制剂用于兔腹泻治疗效果较好 , 从本次药
敏试验看 ,体外抑菌效果不是非常理想 , 我们认为 , 组方中各
药物除有抑菌作用外 ,更有调整机体非特异免疫系统增强机
体免疫功能的效用 ,从而提高机体抗病能力 , 达到防病 、治病
的目的。
参考文献:
[ 1] 潘继兰. 杨树花防治羔羊痢疾 [ J] . 当代畜禽养殖业 ,
2005(4):22.
[ 2] 潘立辉 ,孟广章. 杨树花 、叶 、皮治疗羊腹泻效果好 [ J] .
当代农业 , 2002(4):29.
[ 3] 王宪超 . 中草药治羊腹泻 [ J] . 农业科技与信息 ,
2 003(7):32.
[ 4] 梁　峰. 中草药治羊腹泻 [ J] . 河北畜牧兽医 , 2004 ,
20(1):39.
[ 5] 黄旭明.仔猪白痢的中草药单方辨证治疗 [ J] . 福建畜牧
兽医 , 2005, 27(1):29 - 30.
[ 6] 董发明 ,王天奇 , 白喜婷.中药 “腹泻康”防治兔腹泻病试
验 [ J] .中兽医医药杂志 , 2005, 24(4):29 - 30.
大承气汤及组分对兔离体十二指肠张力影响的比较
吕锦芳 ,宁康健 ,金光明 ,杜明莉
(安徽科技学院 ,安徽凤阳　233100)
　　中图分类号:S853.74　 　　　　　　文献标识码:A　　文章编号:1000 - 6354(2007)04 - 0036 - 04
　　大承气汤由大黄 、厚朴 、枳实 、芒硝四味药组成 , 用于阳
阴热结之证 [ 1] 。目前研究证明大承气汤具有泻热 、通便 、抗
菌 、排毒 、解痉 、增加胃肠道蠕动及胃肠道容积 、改善胃肠道
血液循环和降低毛细血管通透性等作用 , 可用于治疗多种疾
病 ,尤其是实热结甚 , 腹气阻闭 , 患畜可任攻伐者 , 皆可用大
承气汤而取效 [ 1] 。笔者旨在进一步观察大承气汤及各组分
对兔离体十二指肠张力的影响 ,比较大承气汤和其各组分作
用特点 ,为临床用药提供实验依据。
1　材料与方法
1. 1　动物
选用体重 2. 00 -2. 25 kg健康的青紫蓝家兔 6只 ,雌雄
收稿日期:2007 -01 - 18
基金项目:安徽省 2006年重点科研项目(06023087C);安徽省教育厅
自然科学基金(2005 - k j160)
作者简介:吕锦芳(1956 - ),女 ,教授 ,主要从事动物生理及药理学的
教学与研究。
不拘(安徽科技学院实验动物中心提供)。
1. 2　仪器
计算机 (联想天开 2800CPU, P4 /1. 8G);BL - 410 New
Century生物信号采集与处理系统 (成都泰盟科技有限公
司);TDL80 - 2B型台式离心机 (上海安亭科学仪器厂 );
FA1004型电子天平 (上海天平仪器厂);HW - 400S恒温平
滑肌槽(成都泰盟科技有限公司);JH - 2型张力换能器(成
都泰盟科技有限公司)等。
1. 3　药材与试剂
1. 3. 1　药材　大黄 、厚朴 、枳实 、芒硝购于凤阳药材公司 , 经
安徽科技学院中药实验室鉴定为正品。
1. 3. 2　试剂　氯化钠(江苏徐州试剂总厂);氯化钾(上海试
剂一厂);硫酸镁(上海金山县兴塔化工厂);硫酸二氢钠(广
东汕头金砂化工厂);葡萄糖(中国医药集团上海化学试剂公
司);无水氯化钙(淮南市化学试剂厂)。
1. 3. 3　大承气汤的制备 [ 3]　称取生大黄 12 g, 厚朴 15 g,
枳实 12 g, 芒硝 9 g;先将厚朴 、枳实加水浸泡 30 m in, 后煎