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高效液相色谱法测定岩白菜中岩白菜素含量



全 文 :·1180· 中国中医急症 2010 年 7 月第 19 卷第 7 期 JETCM. Jul. 2010,Vol. 19,No. 7
岩白菜为虎耳草科岩白菜属植物岩白菜 Bergenia pur-
purascens (Hook. f. et Thoms. ) Engl. 或云南岩白菜 Bergenia pur-
purascens (Hook. f. et Thoms. ) Engl. var. delavayi ( Franch. ) Engl. et
Irm. 的干燥根茎或全草。其具有收敛止泻、止血止咳、舒筋活络
之功效,临床用于腹泻,痢疾,食欲不振,内外伤出血,肺结核咳
嗽,气管炎咳嗽,风湿疼痛,跌扑损伤 [ 1 ]。岩白菜主要成分为岩白
菜素 [ 2 ],本实验采用高效液相色谱 (HPLC)法对其进行测定。
1 仪器与试药
美国 Waters 公司 2695 全自动高效液相色谱仪,Waters
2487紫外检测器;TU - 1901 双光束紫外分光光度计(北京普析
通用仪器有限责任公司); 超声波清洗仪(型号:AS5150);
XS205DU十万分之一电子天平 (梅特勒 -托利多仪器上海有限
公司);优普超纯水制备仪。岩白菜素对照品 (中国药品生物制品
检定所提供,批号:111532 - 200202 ); 样品为自采对口药材,经
四川省雅安食品药品检验所鉴定。甲醇为色谱纯,水为超纯水,
其余试剂均为分析纯。
2 色谱条件 [2 - 4 ]
色谱柱:Kromasil C18 柱(250 × 4. 6mm,5μm); 流动相为甲
醇 ∶水(32∶ 68);流量1. 0mL /min;柱温30℃;检测波长275nm。
样品及对照品进样量为 5μL,理论塔板数以岩石菜素计不低于
4000。在上述色谱条件下,对照品有较好的峰形;样品中岩白菜
素与其他杂质获得较好的分离。见图 1。
3 溶液制备
3. 1 对照品溶液制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥 12h
的岩白菜素对照品 11. 90mg,加甲醇制成 19. 04μg /mL对照品
溶液。
3. 2 供试品溶液制备 取样品细粉约 0. 2g,精密称定,置具塞
锥形瓶中,精密加入甲醇 25mL,称定质量,超声处理 30min,放
冷,再称定质量,用甲醇补充减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,
即得。
t / mint / min
0. 016
0. 012
0. 008
0. 004
0. 000
0. 12
0. 08
0. 04
0. 00
0. 00 4. 00 8. 00 12. 00 0. 00 4. 00 8. 00 12. 00
AU AU
4. 535 4. 463
对照品溶液 供试品溶液
图 1 高效液相色谱图
1四川省雅安食品药品检验所 (雅安 625000)
2雅安市人民医院 (雅安 625000)
3重庆医药高等专科学校 (重庆 400030 )
4雅安三九药业有限公司 (雅安 625000 )
△通信作者
高效液相色谱法测定岩白菜中岩白菜素含量
程培秀 1 魏银贵 1 余志刚 2△ 杨 艳 3 张 彬 4 周学兴 4
中图分类号:R285. 5 文献标志码:A 文章编号:1004 - 745X(2010 )07 - 1180 - 02
【摘要】 目的 建立岩白菜中有效成分岩白菜素的 HPLC测定方法,测定其含量。方法 采用反相 HPLC法,色
谱柱为 Kromasil - C18 柱(250mm × 4. 6mm,5μm),流动相为甲醇 ∶水(32∶ 68),流量 1. 0mL /min,柱温 30℃。结
果 岩白菜素在 0. 0381 ~ 0. 1904μg范围内具有良好的线性关系 (r = 0. 9998),平均加样回收率为 98. 9%,
RSD = 2. 0%。结论 该方法操作简单、准确、重现性好,可用于岩白菜药材的含量测定。
【关键词】 地产药材 岩白菜 岩白菜素 HPLC法
Determination of Bergenin in the Rhizoma Bergeniae by High Performance Liquid Chromatography
CHENG Pei-xiu1, WEI Yin-gui1, YU Zhi-gang2,et al
1 Ya  an Institute for Food and Drug Control ( Ya  an 625000 )
2 Ya  an People Hospital ( Ya  an 625000 )
【Abstract】 Objective: To establish the method of the high performance liquid chromatography (HPLC) for de-
termining the bergenin in the rhizome bergeniae. Methods: It was used the RH-HPLC determination with the 5μm
Kromasil C18 column ( 4. 6 mm × 150 mm) and the mobile phase of the formaldehyde-water ( 32 ∶ 68 ) . The flow
volume of the mobile phase was 1. 0mL / min and the temperature of it was 30℃ . Results: It was good linear range
of bergenin in the range from 0. 3810μg to 0. 1904μg. The average recovery was 98. 9% and the RSD was 2. 0% .
Conclusion: This method is simple, accurate and reproducible. It could be used for the of rhizoma bergeniae de-
termination.
【Key words】 Estate Medical Material; Rhizoma bergeniae; Bergenin; High performance liquid chromatography
(HPLC) method
·实验研究·
中国中医急症 2010 年 7 月第 19 卷第 7 期 JETCM. Jul. 2010,Vol. 19,No. 7 ·1181·
(上接第 1156页 )
型 H1N1流感症状表现与“时行感冒”相似,大多表现
有发热、咳嗽、头痛、咽喉不适等证候特点,特别是发热
明显,有风热毒邪侵犯肺卫,表卫证轻,里热证重,肺失
宣肃咳嗽症多见的病因病机特点存在。至于其中医诊
治,一般认为,可基本按温病“卫气营血”理论去辨证施
治。国家中医药管理局甲型 H1N1流感中医辨证治疗
方案 (第 4版 )中轻症第 2型“毒袭肺卫”证也是在结合
中医药疫病理论、季节性流感的中医药治疗研究和甲
型 H1N1流感的临床特点等研究后由专家共识而总结
出的,可以说是有一定临床基础的理性认识。而“毒袭
肺卫”型用药就是以《伤寒论》麻杏石甘汤加减而成的,
在此取其功效主要是清肺解毒。
笔者在甲型 H1N1流感诊治中曾遇一“毒袭肺卫”
病例,深感若辨证恰当,真是效若桴鼓。现介绍如下。
樊某,女性,2010年 1月 5日来诊。初诊见发热,
体温最高 39. 0℃,鼻塞,干咳无痰,全身肌肉酸痛,疲
劳,轻度头痛,自觉发热、口渴,无咽痛、汗出、腹泻、呕
吐等,舌红苔薄黄,脉浮细数。2010年 1月 5日查甲型
流感快检(+ +),次日甲型 H1N1核酸检查(+)。确诊
甲型 H1N1流感。治以清肺解毒。方以麻杏石甘汤加
减: 炙麻黄3g,苦杏仁 10g,甘草粒 10g,石膏 30g(先
煎),知母 10g,浙贝母 10g,桔梗 15g,黄芩 15g,柴胡
15g。水煎服。1剂后体温即明显降低,最高 38. 2℃;2
剂后体温已正常,后仍有干咳,以宣肺止咳方善后: 金
荞麦 10g,金莲花 10g,蝉蜕 8g,枇杷叶 10g,川贝母
10g,杏仁 10g,牛蒡子 10g,大青叶 10g,前胡 10g,五味
子 10g,桔梗 10g,甘草 6g。前后共服 5剂后咳嗽全止,
而如常人。
按: 近代中医大家张锡纯曾说“石膏之凉,虽不如
冰,而其退热之力,实胜远甚”,验之此例患者,当不虚
言。本例患者冬月病温,有高热、鼻塞、肌肉酸痛、无汗
等寒郁热的表现,结合 H1N1流感病毒的中医病机认
识,故采用麻杏石甘汤联合清热辛宣透发药,效果颇
佳。“有是证,用是药”,真如柯韵伯所说“提纲可见,只
是正面,读者又要看出底板; 再细玩其四旁,参透其隐
曲,则良法美意,始得了然”,只要多读书临证,才能慨
然“良法美意”之妙。
参 考 文 献
[ 1 ] 李培生著,李家庚,李家康整理 . 李培生医书四种 [M ] . 北
京:人民卫生出版社,2009:33 ~ 47.
[2 ] 黄洁 . 经方临证验录 [ J ] . 江西中医药,2004,35(8):54.
[3 ] 王玉光,王晓静,杜宏波,等 . 6 例甲型 H1N1 流感确诊病
例中西医证治报告 [ J ] . 北京中医药,2009,28(6):403 ~
406.
(收稿日期 2010 - 02 - 25 )
表 1 加样回收试验结果 (n = 6)
样品量(g)
0. 1066
0. 1132
0. 1078
0. 1096
0. 0979
0. 1302
加入量 (mg )
3. 8
2. 2
2. 2
3. 6
2. 1
3. 0
测得量 (mg )
6. 80
5. 40
5. 28
6. 60
4. 84
6. 56
回收率 (% )
99. 70
100. 10
101. 57
97. 33
98. 78
96. 06
平均回收率 (% )
98. 92
RSD (% )
2. 0
4 方法学考察
4. 1 线性关系考察 精密吸取岩白菜素对照品溶液 2、4、6、8、
10μL,依次进样,记录峰面积。以进样量(X)为横坐标,峰面积
( Y ) 为纵坐标进行线性回归,得回归方程: Y = 2. 67 × 104 X -
3. 00 × 103(r = 0. 9998)。结果表明岩白菜素进样量在 0. 0381 ~
0. 194μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
4. 2 精密度试验 精密吸取岩白菜素对照品溶液 5μL,重复进
样 5次,测得岩石菜素峰面积的 RSD为 0. 2%,表明精密度良好。
4. 3 稳定性试验 ( 1 )样品稳定性考察: 取重复性试验项下试
验的供试品溶液,室温下放置,于 0、2、4、6、8h进样 5μL,测定其
峰面积,RSD为 0. 9%。( 2 )对照品稳定性考察:精密吸取浓度为
19. 04μg / mL岩白菜素对照品溶液,室温下放置,于 0、2、4、6、8h
进样 5μL,测定其峰面积 RSD为 0. 7%。结果表明,样品和对照
品溶液在 8h内稳定性较好。
4. 4 重复性试验 取样品细粉,按供试品溶液的制备方法制
得溶液,平行操作 6次,测定峰面积的 RSD为 0. 9%,表明本法
具有良好的重复性。
4. 5 回收率试验 见表 1。精密称取已测知含量的样品细粉约
0. 1g,精密称定,共 6份,分别加入对照品,进行回收率试验。表
明分析方法具有良好的准确度。
4. 6 样品含量测定 取 3批样品,制备供试品溶液,分别进样
5μL测定,结果岩白菜素含量分别为 28. 22、17. 97、28. 09mg / g。
5 讨 论
本研究对岩白菜素进行紫外全波长扫描,发现该化合物在
220、275nm有两个最大吸收峰,根据参考文献 [ 3 - 4 ],选择
275nm为检测波长。分别考察超声 20、30、40、60min的提取效
率,结果 20min提取不完全,30、40、60min提取率无明显差别,
故超声时间选择为 30min。
本研究建立了对岩白菜中岩白菜素的 HPLC法,该方法简
便、准确、重现性好,可用于其质量评定。
参 考 文 献
[ 1 ] 四川省卫生厅 . 四川省中药材标准 [ S ] . 1987:133 ~ 135.
[ 2 ] 中国医学科学院药物研究所 . 中药志 [M ] . 北京: 化学工业出版
社,1977:444.
[ 3 ] 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典 [M ] . 北京: 化学工业出
版社,2005:278.
[ 4 ] 张文珠,师彦平,刘霞,等 . 中药岩白菜素的反相高效液相色谱分
析 [ J ] . 分析科学学报,2003,19 (6 ) : 525 ~ 527.
(收稿日期 2010 - 03 - 11 )