全 文 ：正交试验法优选杨梅叶提取工艺的研究
冀小君1 王淑君2＊ 梁延寿1 李宝霞1 廖 栩2 杨 瑞2
(1.山西生物应用职业技术学院 , 山西 太原 030031;2.沈阳药科大学 , 辽宁 沈阳 110016)
【摘 要】目的:以杨梅苷含量为考查指标 , 优选杨梅叶的提取工艺。方法:正交试验法。结果:杨梅叶粗粉加 75%乙醇 10倍
量 , 提取 3次 , 每次 60min , 浓缩后加入 3倍量的水沉淀 , 静置 , 过滤 , 减压干燥得到干膏粉。结论:用正交试验优选该工艺合
理 、 重现性好。
【关键词】杨梅叶;提取工艺;杨梅苷
中图分类号:R282.71 文献标识码:A
＊为通讯作者
杨梅科杨梅 (Myrica rubra Sieb.et Zucc.)叶中
所含的杨梅苷有较强的抑制醛糖还原酶活性[ 1] ,
具有明显的降压活性[ 2] , 较其它黄酮类物质 (如
芸香苷)具有更强抗氧化能力 , 对水溶性食品和
脂溶性食品均能发挥很好的抗氧化作用 , 特别在
护色 、防止油脂酸败和香气劣化等方面 , 具有很
强优越性[ 3] , 但至今尚未见到以杨梅苷作为指标
成分 , 优选杨梅叶提取工艺的研究报道。本文采
用正交试验法优选杨梅苷提取工艺 , 旨在为杨梅
苷产业化研究提供依据。
1 实验仪器与试药
1.1 仪 器
LC-2010AHT高效液相色谱仪 (日本岛津公
司), LC-solution色谱工作站 (日本岛津公司)。
1.2 试 药
杨梅科杨梅 (Myrica rubra Sieb.et Zucc.)叶
(山西生物应用职业技术学院刘茵华教授鉴定)7
月份采自浙江绍兴 , 阴干;杨梅苷 (纯度 98%)
自制 , 甲醇为色谱纯 (天津市科密欧化学试剂开
发中心 , 磷酸为分析纯 (沈阳正信高科技研究
所)。
2 方法与结果
2.1 杨梅苷含量测定方法
2.1.1 色谱条件与系统适应性试验
色谱柱为 Hypersil ODS C18 (4.6mm×250mm ,
5μm);流动相为甲醇-0.02%磷酸水 (35∶65 , v
v);检测波长 254nm;流速 1.00mL·min-1;柱温
30 ℃。在此条件下 , 杨梅苷可以和其它杂质得到
很好分离 , 分离度 R>1.5 , 理论塔板数在 6000
以上 。HPLC 图见图 1 的 A 、 B。结果表明该色谱
条件下方法专属性符合规定 。
第 30卷 第 2期
2010年 4月
农 业 与 技 术
Agriculture&Technology
Vol.30 No.2
Apr.2010 ·30 ·
A杨梅苷对照品溶液
B提取物
图 1 系统适应性试验
2.1.2 对照品溶液的制备
精密称取减压干燥至恒重的 10mg 杨梅苷对照
品 , 用甲醇溶解并定容至 25mL , 制成每 1mL 含
0.4mg的杨梅苷对照品溶液 。
2.1.3 供试品溶液的制备
精密称取减压干燥至恒重的杨梅叶提取物干
膏粉适量 , 用甲醇溶解 , 制备成样品溶液。
2.1.4 标准曲线的制备
精密量取 1.0 , 1.5 , 2.0 , 2.5 , 3.0 , 3.5mL
杨梅苷标准品溶液适量 , 置于 25mL 容量瓶中 ,
用甲醇定容 , 配制成系列对照品溶液;分别精密
量取 10μL 注入高效液相色谱仪 , 以杨梅苷为横坐
标 , 吸光度为纵坐标 , 按最小二乘法进行线性回
归 , 回归方程为:A =25857C -383.35 (r =
0.9994), 在 16μg·mL-1 ～ 56μg·mL-1内呈良好的线
性关系。
2.1.5 精密度试验
精密量取供试品溶液 10μL , 按上述色谱条件
连续重复测定 6次 , RSD为 0.37%。
2.1.6 稳定性试验
·31 · 2010年 4月 农 业 与 技 术 Vol.30 No.2
精密量取杨梅苷供试品溶液 10μL , 分别在溶
液制备后的 0 , 1 , 2 , 4 , 6 , 8h进行测定 , 结果
RSD为 0.35%, 显示供试品溶液至少在 8h之内稳
定。
2.1.7 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品粉末 5份 , 分别精
密加入杨梅苷对照品溶液 1mL , 用甲醇定容于
10mL容量瓶中 , 每次进样 10μL 进行测定 , 平均
加样回收率为 98.6%, RSD为 1.08%(n=5)。
2.2 杨梅苷提取工艺研究
2.2.1 杨梅叶中杨梅苷含量测定
精密称取 1g 杨梅叶细粉 , 加入 50mL乙醇回
流提取3次 , 每次 2h , 合并滤液 , 减压浓缩至浸
膏 , 移入 25mL 容量瓶中 , 用甲醇稀释至刻度 。
精密量取 10μL注入高效液相色谱仪 , 测得杨梅叶
中杨梅苷的含量为 1.26%。
2.2.2 杨梅苷提取工艺的优化
精密称取供试品 , 加入乙醇提取 3次 , 减压
浓缩至相对密度为 1.14的浸膏后加入 3倍量的水
沉淀 , 24h 后过滤 , 得到提取液 。采用 L9 (34)
正交试验 , 以乙醇浓度 (A)、乙醇量 (B)、 提取
次数 (C)为考察因素 , 杨梅苷含量为评价指标 ,
确定其工艺。见表 1 、 表 2。
表 1 实验因素水平
水平
A
乙醇浓度
(%)
B
乙醇倍量
(V)
C
提取时间
(min)
1 50 6 60
2 75 8 90
3 95 10 120
表 2 L9(34)正交试验和测定结果
1 2 3 4
乙醇浓度 乙醇体积 提取时间 空白
杨梅苷含量
(μg·mL-1)
1 1 1 1 1 33.10
2 1 2 2 2 38.15
3 1 3 3 3 44.38
4 2 1 2 3 39.51
5 2 2 3 1 40.46
6 2 3 1 2 53.58
7 3 1 3 2 33.20
8 3 2 1 3 38.59
9 3 3 2 1 34.98
K1 115.63 105.81 125.27 118.54
K2 133.55 117.20 112.64 124.93
K3 106.77 132.94 118.04 122.48
R 8.926 9.043 4.210 3.463
Vol.30 No.2 农 业 与 技 术 2010年 4月 ·32 ·
直观分析结果表明 , B>A>C 因素 , 即乙醇
浓度和乙醇量对杨梅苷的提取率有显著影响 , 提
取时间对实验结果影响较小 。最佳提取工艺条件
为A2B3C1 , 即杨梅叶细粉加 75%乙醇 10倍量 ,
提取 3次 , 每次 60min , 浓缩至浸膏后加入 3倍量
的水沉淀 , 24h后过滤 , 得到提取液 。
2.2.3 工艺验证试验
为考察上述优选提取工艺的稳定性 , 按上述
最佳工艺条件重复试验 3次 , 分别测定提取液中
杨梅苷的含量 , 结果见表 3。3次测定结果说明该
杨梅苷的提取工艺稳定可行。
表 3 工艺验证试验结果
序号 杨梅苷含量(μg·mL-1)
杨梅苷含量
(μg·mL-1) RSD%
1 45.21
2 46.71
3 45.61
45.84 1.69
2.2.4 提取物中杨梅苷的含量测定
将提取液减压浓缩 、 干燥后得到提取物浸膏 ,
精密称取浸膏粉适量置容量瓶中 , 加甲醇溶解并
定容 , 进样 10μL 进行测定 , 根据回归方程计算杨
梅苷含量 。结果见表 4。
表 4 样品中含量测定 (%)
序号 杨梅苷 平均含量
1 12.77
2 13.48
3 13.85
13.37
3 讨 论
3.1 以乙醇浓度 、 乙醇量 、 提取次数为因素
采用正交试验法优选杨梅苷提取工艺 , 结果
表明 , 乙醇浓度和乙醇量对杨梅苷的提取率有显
著影响 , 其提取的最佳工艺为:杨梅叶细粉加
75%乙醇 10倍量 , 提取 3次 , 每次 60min , 减压
浓缩至浸膏后加入 3倍量的水沉淀 。
3.2 试验发现
采用高效液相色谱法对杨梅叶提取物中的杨
梅苷进行含量测定 , 方法简便快速 , 结果可靠 。
用正交优选后的最佳工艺重被提取 3次 , 其提取
物中杨梅苷平均含量可以达到 13.37%, 如进一
步研究有希望将杨梅叶开发为一种新的药用植物
资源 。
参考文献
[ 1] Chaudhry P S ,Cabrera J , Juliani H R , et al.Inhibition of human lens al-
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[ 2] 张秀桥 ,沈伟 ,陈树和 , 等.大叶蛇葡萄提取物对肾性高血压大
鼠降压作用的实验研究[ J] .中国医院药学杂志 , 2008 , 28(24):
2095
[ 3] 凌关庭.杨梅提取物及其抗氧化作用[ J] .粮食与油脂 , 2009 ,
(4):38
作者简介:冀小君 , 女 , 讲师 , 从事中药制剂工艺及质量标准研究 。
王淑君 , 女 , 副教授 , 研究方向:药物新剂型及药物动力学研究。
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