全 文 ：高效液相色谱测定开喉剑喷雾剂中岩白菜素的含量
＊
王珍珍1，张景照1，许乾丽2* ，茅向军2，郑丽会3，夏玉吉3
(1．贵阳医学院 药学院，贵州 贵阳 550004;2．贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳 550004;3．贵州师范大学，贵州 贵阳 550001)
［摘 要］目的:建立开喉剑喷雾剂中八爪金龙主要成分岩白菜素含量的测定方法。方法:采用高效液相色
谱法，色谱柱为 Hypersil ODS2-C18柱 (5 μm，200 mm ×4. 6 mm) ，流动相为甲醇－水(17∶ 83) ，检测波长为 275 nm，
流速为 1. 0 ml /min。结果:岩白菜素进样量在 0. 050 55 ～ 1. 365 00 μg线性关系良好(r = 0. 999 9) ，平均回收率
为 99. 5%，RSD为 2. 1%。结论:该方法简便、准确、重现性好，可用于该制剂中岩白菜素含量的测定。
［关键词］开喉剑喷雾剂;岩白菜;色谱法，高压液相
［中图分类号］R927． 2 ［文献标识码］A ［文章编号］1000-2707(2012)03-0267-03
Determination of Bergenin Content in Kaihoujian Spray
with High Performance Liquid Chromatography
WANG Zhenzhen1，ZHANG Jingzhao1，XU Qianli2* ，MAO Xiangjun2，ZHENG Lihui3，XIA Yuji3
(1． School of Pharmacology，Guiyang Medical College，Guiyang 550004，Guizhou，China;2． Institute for
Food and Drug Quality Control of Guizhou Province，Guiyang 550004，Guizhou，China;
3． Guizhou Normal University，Guiyang 550001，Guizhou，China)
［Abstract］Objective:To establish a method for content determination of bergenin in Kaihoujian
Spray． Methods:The HPLC method was performed on Hypersil ODS2-C18 (5 μm，200 mm ×
4. 6 mm)column with methanol-water (17∶ 83)as mobile phase． Detection wavelength was 275 nm，
and the flow rate was 1. 0 ml /min． Results:The linear range of bergenin was 0. 050 55 ～ 1. 365 00 μg
(r = 0. 999 9)． The mean recovery was 99. 5%，and RSD was 2. 1% ． Conclusions:The method is
simple and accurate for determination of bergenin content in this drug．
［Key words］kaihoujian spray;bergennia purpurascens;chromatography，high pressure liquid
开喉剑喷雾剂由八爪金龙、山豆根、蝉蜕、薄荷
脑等四味药材组成，具有明显的抑制病毒作用，能
显著抑制革兰阳性菌和革兰阴性菌的生长，具有清
热解毒、消肿止痛的功效［1］。八爪金龙是方中君
药，岩白菜素是八爪金龙的主要成分之一。岩白菜
素又称虎耳草素和矮地茶素，一般是从虎耳草科植
物和紫金牛科植物中提取的有效成分，属于异香豆
精类化合物，具有良好的止咳祛痰作用。此外，还
具有良好的抗炎、抗心律失常、抗病毒和护肝作
用［2］。八爪金龙中化学成分的含量测定，文献报
道较多的是岩白菜素的含量测定，测定的方法有薄
层扫描法、高效液相色谱法(high performance liquid
chromatography，HPLC)等。目前已有多篇文献报
道 HPLC测定岩白菜素在片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊
剂、糖浆剂等中的含量［3 ～ 5］。本实验于 2010 年 12
月 ～ 2011 年 1 月对开喉健喷雾剂中的岩白菜素含
量进行了测定，并对测定的方法学进行了研究。
1 材料与方法
1. 1 试剂和药品
甲醇为色谱纯、分析纯，水为纯净水，其余试剂
均为分析纯;岩白菜素对照品(中国药品生物制品
检定所提供，供含量测定用，批号 1532 － 200202)。
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第 37 卷 第 3 期
2012 年 6 月
贵 阳 医 学 院 学 报
JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE
Vol． 37 No． 3
2012. 6
* * 通讯作者 E-mail:1500368608@ qq． com
样品和阴性样品由贵州三力制药有限责任公司生
产企业提供，方法研究所用样品为成人型。
1. 2 仪器
岛津 LC-20A高效液相色谱仪，包括 SPD-20A
紫外检测器、SIL-20A自动进样装置、LC-solution 色
谱工作站、LC-20AT 输液泵和 TCQ-250 超声波清
洗器(北京医疗设备二厂)。
1. 3 色谱条件
色谱柱为大连依利特 Hypersil ODS2-C18 柱
(5 μm，200 mm ×4. 6 mm) ，流动相为甲醇－水(17∶
83) ，检测波长 275 nm，流速为 1. 0 ml /min，进样量
10 μl。本实验条件下岩白菜素与其他组分分离完
全(分离度 ＞ 1. 5) ，理论板数以岩白菜素峰计算为
3 000，阴性对照品溶液无干扰。见图 1。
a．对照品溶液;b．供试品溶液;c．缺八爪金龙阴性样品
图 1 开喉剑喷雾剂的 HPLC色谱结果
Fig． 1 HPLC chromatograms of Kaihoujian spray
1. 4 溶液的制备
1. 4. 1 对照品溶液的制备 精密称取岩白菜素对
照品 10. 11 mg，置 50 ml 量瓶中，加 50%甲醇溶解
并稀释至刻度，得对照品贮备液。精密量取 5 ml
贮备液置 20 ml量瓶中，加 50%甲醇稀释至刻度，
制成每 1 ml含岩白菜素 0. 050 55 mg 的对照品溶
液。
1. 4. 2 供试品溶液的制备 取本品 5 瓶，倾出药
液、搅匀，精密量取 5 ml，置 50 ml 量瓶中，加 50%
甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液 5 ml，置 25 ml
量瓶中，加 50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
1. 4. 3 阴性样品溶液的制备 参照“1. 4. 2”项方
法制得缺八爪金龙药材阴性样品溶液。
2 结果
2. 1 线性关系考察
精密吸取对照品贮备液 5 ml置 20 ml量瓶中，
加 50%甲醇稀释至刻度，精密吸取该对照品溶液
1、3、9、15、21、27 μl，分别注入液相色谱仪，记录色
谱图，以峰面积 A 对质量数(μg)进行线性回归计
算，得线性回归方程为:A = 1 302 225. 8C －
3 495. 7，r =0. 999 9，岩白菜素在 0. 050 55 ～ 1. 365 μg
线性关系良好。
2. 2 精密度试验
取岩白菜素对照品溶液，重复进样 6 次，测定
峰面积，结果为岩白菜素的平均峰面积为 663 824，
RSD为 0. 24%。
2. 3 重复性试验
取本品(成人型，批号 20100905) ，按“1. 4. 2”
项供试品溶液的制备方法，平行制备 6 份供试溶
液，分别进样 10 μl，测定峰面积，计算结果为岩白
菜素的平均含量为 2. 325 6 mg /g，RSD为 1. 1%。
2. 4 稳定性试验
取重复性试验中的第一份供试液，分别于 0、
1、2、4、6、8 h进样测定岩白菜素峰面积，结果为岩
白菜素平均峰面积为 606 706，RSD 为 0. 77%，说
明供试液在 8 h内稳定性良好。
2. 5 加样回收率试验
分别精密称取 6 份已测定含量的样品(批号
20100905，岩白菜素含量 2. 312 7 g /L)2. 5 ml，置于
50 ml量瓶中，精密加入岩白菜素溶液(0. 572 3 g /L)
对照品混合溶液 10 ml，加 50%甲醇至刻度，摇匀，
滤过，取续滤液 5 ml，置 25 ml量瓶中，加 50%甲醇
至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液，精
密吸取 10 μl，测定峰面积，计算结果见表 1，岩白
菜素的平均回收率为 99. 5%，RSD为 2. 1%。
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贵 阳 医 学 院 学 报 37 卷
表 1 开喉剑喷雾剂中岩白菜素的回收率
Tab． 1 Test results of bergenin
recovery in Kaihoujian spray
试验
次数
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 11. 2674 95. 85
2 11. 5644 101. 04
3 11. 5814 101. 34
99. 5 2. 1
4 11. 4929 99. 79
5 11. 4173 98. 47
6 11. 5252 100. 36
注:含岩白菜素均为 5． 781 8 mg，加入岩白菜素均为 5． 723 mg。
2. 6 样品的含量测定
按照“1. 4. 1”、“1. 4. 2”项方法分别制备对照
品和供试品溶液，进样各10 μl，测定峰面积，计算
样品中岩白菜素的含量，20 批样品结果见表 2。
表 2 20 批样品中岩白菜素测定结果
Tab． 2 Bergenin contents tested in
20 batches of samples
成人型
批号
规格
(ml /瓶)
岩白菜素含
量(g /L)
儿童型
批号
规格
(ml /瓶)
岩白菜素含
量(g /L)
20090801 20 2. 3 20090501 15 2. 28
20091101 10 2. 3 20090603 15 1. 55
20100103 10 3. 2 20090803 10 1. 70
20100801 20 1. 4 20091201 30 1. 91
20100905 30 2. 4 20100102 15 2. 38
20100908 30 2. 2 20100201 15 1. 95
20100909 30 2. 3 20100503 15 2. 06
20100912 30 2. 4 20100804 30 1. 22
20100913 30 2. 3 20100810 30 0. 43
20100914 30 2. 4 20101107 10 0. 50
3 讨论
根据岩白菜素的性质，在甲醇中溶解，在乙醇
或水中微溶，再结合制剂为水提取的水溶液，可用
水、含水乙醇或含水甲醇作溶剂，考虑样品过滤等
处理的操作容易进行，故采用 50%甲醇作为提取
溶剂。经过超声及直接稀释溶解两种方法的对比，
两种方法效果基本一样，故采用直接稀释至刻度即
可。根据相关文献资料选择 275 nm作为该实验的
检测波长［2 ～ 6］。岩白菜素的 HPLC 含量测定的流
动相一般有甲醇－水系统、甲醇－冰醋酸系统、乙腈
－磷酸系统等几种不同的系统。本实验试用了多种
组成及比例的流动相，峰形及分离情况无差别，出
于简捷考虑，采用了甲醇－水(17 ∶ 83)的组成。本
方法稳定性、精密度、重复性均符合定量分析要求，
操作简便，色谱分离良好，结果准确可靠，可有效进
行该制剂的质量检测。
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(2012 － 03 － 20 收稿，2012 － 04 － 20 修回)
编辑:潘
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3 期 王珍珍等 高效液相色谱测定开喉剑喷雾剂中岩白菜素的含量