全 文 ：杨树花为杨柳科植物毛白杨 Populus tomentosa
Carr、加拿大杨 Populus canadensis Moench或同属数
种植物雄花序。苦，寒。归肝、胆、大肠经。具有清热
解毒化湿止泻的功能，用于湿热下痢，幼畜泻痢[1]。
含有较丰富的营养成分：蛋白质、多种氨基酸、多
糖、磷、钙和药物成分甙，强化甙，黄酮类化合物和
酚类，其中黄酮类化合物是其主要活性成分[2]。对杨
数花的提取药典采用了水煎煮法，但是提取液沉淀
较多，而黄酮类化合物溶于乙醇，所以本试验拟用
水煮醇沉的方法对杨树花进行提取[1,3]。并用紫外 -
可见分光光度法对其总黄酮的含量及其稳定性进
行检测[1]。
1 材料
1.1 仪器 UV- 1800PC型紫外分光光度剂，上海谱
达仪器有限公司。数显 HH- 6 恒温水浴锅，国华
电器有限公司。雷磁 PHS- 3C精密 PH计，上海雷磁
仪器厂。
1.2 试药芦丁对照品，中国生物药品生物制品检定
所，批号：100080- 200707。硝酸铝、亚硝酸钠、甲醇
等为分析纯。
2 方法
2.1总黄酮含量测定方法的建立
杨树花提取工艺研究
杨海涵 1，房春林 2，李超 2，周小平 3，周联 3
（1.成都乾盛昌动物药业有限公司四川成都 611130；
2.四川省新兽药工程技术研究中心四川成都 611130；
3重庆市垫江县动物卫生监督所重庆垫江 408300）
摘 要：通过正交试验设计得出杨树花的最佳水提工艺为：用 pH 值 8.0的水，提取 2次，每次提取 1h，
过滤，合并滤液，浓缩至适量，再加入乙醇浓度至 75%的沉淀，挥发乙醇至无味，调 pH 值即得。这样提
得的杨树花溶液澄明，杂质较少，有利于提取液的稳定。
关键词：杨树花；正交试验；总黄酮；含量测定
Abstract : The best water extraction technology of poplar is obtained by orthogonal experimental design as
follows: the water was pH 8.0, extraction of 2 times , 1h of each time, filtration, combined filtrate, concen-
trated to the amount, then add 75% ethanol of precipitation, evaporation of ethanol to the tasteless, adjust-
ing pH. The solution obtained from the poplar flowers by this means is clarity, fewer impurities, and is con-
ducive to the stability of the extract.
Key words : poplar flowers; orthogonal test; total flavonoids; content
Research on the Extraction Technology of Poplar Flower
Yang Haihan 1,Fang Chunlin 2,Li Chao 2,Zhou Xiaopin 3, Zhou Lian 3
（1. Chengdu Qian shengchang Animal Medicine Co., Ltd. Jianyang city , Sichuan Province
2．Engineering Research Center of NewVeterinary Drugs, Chengdu ,Sichuan Province
3. Dianjiang Animal Health Authority ,Dianjiang ,Chongqing City)
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学术研究
参照《中国兽药典》中收载的黄酮的检测方法对杨
树花总黄酮进行检测[1]。
2.1.1对照品溶液的制备精密称取 120℃干燥至恒
重的芦丁对照品 50mg，置于 25mL量瓶中，加甲醇
适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，
摇匀。精密量取 10mL，置 100mL两瓶中，加水至刻
度，摇匀，即得（每 mL含无水芦丁 0.2mg）。
2.1.2标准曲线的制备精密量取对照品溶液 1mL、
2mL、3mL、4mL、5mL与 6mL，分别置于 25mL量瓶中
各加水至 6mL，加 5%的亚硝酸钠 1mL，混匀，放置
6min，加 10%硝酸铝溶液 1mL，摇匀，放置 6min，加
氢氧化钠试液 10mL，加水至刻度，摇匀，放置
15min，以相应试剂为空白，照紫外 - 可见分光光度
法在 500nm波长处测定吸光度。
2.1.3精密度试验取“2.1.2”中的 1号芦丁标准溶
液，重复进样 5次，检测。数据代入方程计算浓度，
分析结果得此法精密度良好。
2.1.4回收率实验精密称取芦丁苷对照品 0.25 mg、
0.50mg、1.0mg、1.5mg分别放入 4个 5mL的容量瓶
中，加入甲醇置水浴上微热使溶解，加甲醇至刻度，
各取 4mL入 25mL量瓶中，照“2.1.2”的方法稀释至
刻度，检测。
2.1.5稳定性试验取“2.1.2”中的 3号芦丁对照品溶
液，分别放置 1h、3h、6h、18h、24h后检测。
2.2 杨树花总黄酮的提取
正交试验设计 根据有关文献资料和预试验，
选择 pH值、乙醇浓度、提取时间、提取次数四个因
素，每个因素选取 3个水平的实验方案。溶剂 pH
分别设为 7.0、8.0、9.0，乙醇浓度分别为 55%、65%、
75%，提取时间设计为 1h、2h、3h，提取次数为 3次、
2次、1次。[4,5,6]见表 1。
2.3 杨树花溶液的制备及含量测定
2.3.1溶液制备称取杨树花药材 1kg，于 pH值调至
8.0 的水中煎煮 2 次，每次 1h，过滤，滤液浓缩至
1000mL，加乙醇至浓度为 75%，静置 12h，过滤，蒸
发乙醇至无味，加入吐温 - 80 5mL，调 pH值为 7.0，
用注射用水定溶至 1000mL，分装，100℃灭菌
30min即得。
2.3.2 含量测定方法 精密量取样品 1mL，置于
100mL量瓶中，用水稀释至刻度，量取 10mL置于
100mL量瓶中，摇匀，用水稀释至刻度，量取 3mL，置于
25mL量瓶中，加水至6mL，再加 5%的亚硝酸钠 1mL，
混匀，放置 6min，加 10%硝酸铝溶液 1mL，摇匀，放
置 6min，加氢氧化钠试液 10mL，最后加水至刻度，
摇匀，放置 15min，以相应试剂为空白，照紫外 - 可
见分光光度法在 500nm波长处测定吸光度[1]。
3 结果
3.1 含量测定方法的建立。
3.1.1标准曲线绘制以吸光度为纵坐标，浓度为横
坐标，得标准曲线为 A=11.321429C- 0.000533，r=0.
9993，线性范围为 0.0088mg/mL至 0.0528mg/mL，见
表 2。
3.1.2精密度试验结果将芦丁标准品溶液重复进样
5次，检测。数据代入方程计算浓度，分析结果得此
法精密度良好。结果见表 3。
3.1.3回收率试验结果按照紫外 - 可见分光光度法
在 500nm波长处测定吸光度，数据代入方程计算
含量，并计算回收率。得平均回收率为 100.1%，变
22 CAH 04/2011
异系数为 0.54，回收率良好。见表 4。
3.1.4稳定性试验结果将芦丁标准品溶液分别放置
1h、3h、6h、18h、24h后检测，数据代入标准曲线方
程计算含量。结果显示，芦丁对照品溶液的稳定性
良好。见表 5。
3.2 杨树花总黄酮的提取
选用 L9(34)正交试验表安排实验，用紫外 - 可见
分光光度法对其总黄酮进行测定并计算结果见表 6。
通过直观分析（见表 6）得 R（C）﹥R（A）﹥R
（D）﹥R（B），通过方差分析（见表 7）得提取时间和
提取次数为影响杨树花提取物中总黄酮含量的主
要因素。因此可确定提取时间为影响杨树花提取物
中总黄酮含量的主要因素，乙醇浓度和溶剂 pH值
为次要因素。次序为：提取时间﹥提取次数﹥溶剂
的 pH值﹥乙醇浓度。得杨树花最优提取方法为：
用 pH值 8.0的水，提取 2次，每次提取 1h，过滤，合并
滤液，浓缩至适量，再加入乙醇浓度至 75%的沉淀，
挥发乙醇至无味，调 pH值，定溶，分装，灭菌即得。
3.3 样品检测结果
通过正交试验优选的杨树花提取物，通过检测
得吸收度，代入标准曲线方程计算其含量得杨树花
提取物的含量为 28.19mg/mL。
4 小结
4.1通过对芦丁对照品的标准曲线的绘制、精密度
试验、回收试验、稳定性试验结果表明，在该系统条
件下，对芦丁进行含量测定，精密度高，稳定性好，符
合直线回归方程应达到的标准，测得的数据准确可靠。
4.2 通过正交试验设计得出杨树花的水提工艺为
pH值 8.0的水，提取 2次，每次提取 1h，过滤，合并
滤液，浓缩至适量，再加入乙醇浓度至 75%的沉淀，挥
发乙醇至无味，调 pH值即得。提取时间是影响杨树花
提取物中总黄酮含量的主要因素，其次是提取的次
数，溶剂的 pH值和乙醇浓度对总黄酮的含量影响较
小，但是对溶液的澄明度和稳定性影响较大。■HF
参考文献：
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2005:169,444.
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2005,6.
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