全 文 ：196　
傅燕玲 ,张　英 ,吴晓琴＊
(浙江大学生物系统工程与食品科学学院 ,浙江杭州 310029)
摘　要:采用 DPPH法、ABTS法 、Rancimat法及血液体系总抗氧化能力测定法研究杨梅叶 、枝和树皮提取物的抗氧化
活性 。结果表明 ,杨梅叶 、枝和树皮提取物清除 DPPH· 、ABTS+·能力显著强于阳性对照。杨梅枝提取物清除 DPPH·
能力最强 ,为 1907.5±6.40mgTEAC/g,叶次之 ,皮最弱;杨梅叶提取物清除 ABTS+·能力最强 ,为 1692.90±31.81mg
TEAC/g,枝次之 ,皮最弱 。提取物对山茶油的抗氧化能力与其添加剂量呈量效关系 ,在 0.02%添加剂量下 ,各提取物
对山茶油的抗氧化能力表现为 TBHQ>皮提取物 >叶提取物 >枝提取物 >VE。血液体系总抗氧化能力从强到弱的排
序依次为 VC >枝提取物 >叶提取物 >皮提取物 。
关键词:抗氧化活性 , DPPH· , ABTS+· ,山茶油
StudyonantioxidantactivityofMyricaRubraleaves,
branchesandbarksextract
FUYan-ling, ZHANGYing, WUXiao-qin＊
(ColegeofBiosystemEngineeringandFoodScience, ZhejiangUniversity, Hangzhou310029 , China)
Abstract:2 , 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH), 2 , 2′-Azino-bis-(3-ehylbenzothiazoline-6-sulfonicacid
(ABTS), Rancimatandtotalantioxidantabilityinbloodassayswereusedtoanalyzetheantioxidantabilityof
MyricaRubraleaves, branchesandbarksextract.Itshowedthat, MyricaRubraleaves, branchesandbarksextract
showedstrongerabilitytoscavengefreeredicalswhencomparingtothecontrolsample.Amongthem, withthe
abundanceof1907.5±6.40mgTEAC/g, thebranchesextractshowedthestrongestabilitytoscavengeDPPH· ,
thenfolowedbyleavesandbarks, whilewiththeabundanceof1692.90 ±31.81mgTEAC/g, theleavesextract
showedthestrongestabilitytoscavengeABTS+· , folowedbybranchesandbarks.Itwasadosage-dependent
efectbetweentheantioxidantcapabilitytocameliaoilandtheaddingamount, withtheaddingamountof0.02%,
theantioxidantabilitytocameliaoilofextractswasasfolows:TBHQ>barksextract>leavesextract>branches
extract>VE, andthetotalantioxidantcompetenceinthebloodconditionwasasfolows:VC >branchesextract>
leavesextract>barksextract.
Keywords:antioxidantability;DPPH· ;ABTS+· ;cameliaoil
中图分类号:TS255.1　　　　文献标识码:A　　　　文 章 编 号:1002-0306(2010)03-0196-04
收稿日期:2009-04-03　＊通讯联系人
作者简介:傅燕玲(1984-),女 ,硕士研究生 ,研究方向:天然产物的研
究与开发。
　　杨梅(MyricarubaSieb.etZucc)系杨梅科杨梅属
植物 ,它的果实 、叶和树皮含有丰富的多酚类物质 。
杨梅叶中含多种酚类化合物 ,主要由黄酮类化合物
及花色素类化合物组成 ,这两类化合物均有显著的
生理活性 [ 1 ] 。杨梅树皮可分离出杨梅素 、槲皮素及槲
皮素-o-α-L-鼠李糖苷等黄酮类化合物 [ 2] ,且味苦 、
性温 ,具有散瘀止血 、止痛之功效 ,民间用于治疗跌
打损伤 、骨折 、痢疾 、胃和十二指肠溃疡 、牙痛等 [3 ] 。
人体内的氧化和抗氧化处于动态平衡 ,当这种平衡
被打破就会发生氧化应激。人体能通过自身的调节
耐受轻度的氧化应激 ,但严重的氧化应激则需要补
充抗氧化剂来补救 。许多现代文明病与人体缺乏抗
氧化营养物质有关 ,而补充抗氧化营养物质则有助
于对这些疾病的预防治疗 ,因此寻找天然 、安全 、有
效的抗氧化剂资源就显得尤为重要。本文采用热回
流法提取杨梅叶 、枝和树皮中的有效成分 ,通过清除
自由基 ,对油脂的抗氧化及全血体系抗氧化等方法
对提取物抗氧化作用进行研究 ,以期为综合开发利
用杨梅非果部位资源提供一定的参考 。
1　材料与方法
DOI :10.13386/j.issn1002-0306.2010.03.100
197　
1.1　材料与仪器
荸荠杨梅叶 、枝和树皮 　2007年 7月份采于浙
江余姚 , 40℃烘干 ,粉碎后过 20目筛;鲜榨山茶油;
DPPH(2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)、ABTS[ 2, 2′-
azino-bis-(3-ehylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)、
Trolox　Sigma,美国;总抗氧化能力试剂盒　南京建
成生物工程研究所;过硫酸钾 、特丁基对苯二酚
(TBHQ)、维生素 E、维生素 C、硝酸铝 、氢氧化钠 、亚
硝酸钠 、福林-酚试剂 、碳酸钠 、芦丁 、杨梅素 、没食子
酸 、无水乙醇 、甲醇等　均为分析纯试剂。
Rancimat743食用油脂氧化稳定性测定仪　瑞
士 Metrohm公司;TU-1810紫外-可见(UV-VIS)分
光光度计　北京普析通用仪器有限公司;FA1004型
电子天平(万分之一)　上海精密科学仪器有限公
司;R-201型真空旋转蒸发仪 　上海申科机械研
究所。
1.2　实验方法
1.2.1　杨梅叶 、枝和树皮有效成分的提取 　采用
70%乙醇热回流浸提杨梅叶 、枝和树皮中有效成分 。
浸提温度为 80℃,料液比为 1∶10,回流提取 2次 ,每
次 2h,除去残渣后旋转蒸发回收溶剂 。浓缩液溶于
一定量水中 ,用石油醚除去蜡质 、色素 、油脂等弱极
性物质 ,再以 1∶3溶剂量的乙酸乙酯萃取 ,取乙酸乙
酯萃取物 ,旋转蒸发除去溶剂 ,经冷冻干燥分别得到
杨梅叶 、枝和树皮提取物(MLE、MBR、MBA)样品 ,放
入干燥器中备用 。
1.2.2　DPPH·清除能力测定　在 Bao等 [ 5]所建立方
法的基础上进行改良 ,配制质量浓度为 0、0.4、0.8、
1.6、2.4、3.2、4.0mg/L的 Trolox溶液 ,分别取 50μL与
5mL浓度为 1×10-4mol/L的 DPPH·甲醇溶液混合
测定 517nm处的吸光值 ,建立标准曲线。配制一定
浓度的样品甲醇溶液 ,样品的测定同标准曲线 ,以不
加样品的 DPPH·甲醇溶液为空白 ,每个样品平行测
定三次 。自由基清除率按下式进行计算:
DPPH·清除率(%)=[ (Acontrol-Asample)/Acontrol)]
×100%
式中:Acontrol为空白的吸光值;Asample为样品吸
光值。
1.2.3　ABTS+·清除能力测定　先将 ABTS溶于甲
醇中制备成 7mmol/L的储备液 ,然后取 5mLABTS
储备液和 88μL140mmol/L的过硫酸钾溶液混合 ,得
到 2.45mmol/L的 ABTS+·贮备液;将该溶液于 20℃
下避光放置 12～ 16h。最后将生成的 ABTS+· 储备
液用甲醇稀释 , 使其在 734nm波长下的吸光值为
0.70±0.02,即得到 ABTS+·工作液。
参考 Re[ 6]等和 Cai[ 4]等的方法 ,配制浓度为 0、
0.4、0.8、1.2、 1.6、2.0mmol/L的 Trolox溶液 , 分别取
40μL与 4mLABTS+·溶液混合 , 摇匀 , 6min后于
734nm下测定其吸光值 ,建立标准曲线。配制一定
浓度的样品甲醇溶液 ,样品的测定同标准曲线 ,以不
加样品的溶液为空白 ,每个样品平行测定三次。自
由基清除率按下式进行计算:
ABTS+ · 清除 率 (%)=[ (Acontrol-Asample)/
Acontrol)] ×100%
式中:Acontrol为空白的吸光值;Asample为样品吸
光值 。
1.2.4　对油脂抗氧化能力测定　采用 Rancimat法 ,
其基本原理是基于向一定温度的油样中通入一定流
量的空气 ,使油样加速氧化 ,将氧化产生的挥发性小
分子(如醛 、酮 、酸等)导入装有蒸馏水的瓶中 ,记录
瓶中水的电导率变化情况 , 并求出诱导时间 , 记为
Ip。诱导时间越长 ,表明油样抗氧化稳定性越好。
参考 Sun等 [ 7] 的方法 , 分别取 3g油样至
Rancimat仪的样品管 ,调节空气流量为 20L/h,设定
温度为 120℃。准确称取杨梅叶 、枝和树皮提取样
品 ,用少量甲醇溶解 ,并将其加入到山茶油样品中 ,
配制成样品添加量分别为 0.02%、 0.03%、 0.04%、
0.05%的油样 。以山茶油中添加相应量的溶解样品
的溶剂为空白 , 以相同剂量的 TBHQ、VE为阳性对
照 ,分别测定空白 、阳性对照和提取样品对山茶油的
诱导时间 ,并计算各阳性对照和试样的相对抗氧化
能力 ,每个样品平行测定三次 。
1.2.5　全血体系总抗氧化能力测定　原理:利用抗
氧化物质能使 Fe3 +还原成 Fe2 + ,后者可与斐林类物
质形成稳定的络合物的性质 ,从而可以通过比色法
测定受试样品在全血体系中抗氧化能力的强弱。
取一定量的血清 ,取一定浓度的样品 ,按照总抗
氧化能力试剂盒 (T-AOC)操作说明进行测试。以
VC作为阳性对照。全血总抗氧化能力(TAC)计算方
法如下:
　TAC(U/mL)=[ (A1 -A0)×V0 ] /[ 0.01×30×V1 ]
其中 , V0 =3.8mL, V1 =0.1mL;A1 为加入提取物
后反应体系的吸光度;A0为空白反应体系吸光度。
1.2.6　数据统计　采用 Excel和 SPSS16.0软件进行
数据处理和统计分析。所有样品均平行测定三次 ,
测定结果以平均值 ±标准偏差(mean±SD)表示 ,显
著性界值 p=0.05。
2　结果与讨论
2.1　清除 DPPH·能力
DPPH法 [ 8]自上世纪五十年代开始就用于天然
产物的 H-供体的测定 ,后用于单一抗氧化物或天然
物质的抗氧化能力测试。 DPPH·是一种性质较为
稳定的自由基 , 溶于甲醇 、乙醇等极性溶剂中 , 在
517nm处有最大吸收 ,当有自由基清除剂存在时 ,
DPPH·的单电子由于被配对 ,会发生脱色反应 ,因
此可用吸光度的变化并以 Trolox等作为对照体系量
化抗氧化物质的抗氧化能力。本研究利用该法来比
较杨梅叶 、枝 、树皮提取物对 DPPH·清除能力 ,以芦
丁作为阳性对照来评价其抗氧化能力 ,结果如图 1、
表 1所示 。
图 1显示 ,在低浓度范围内 ,随着试样浓度的增
大 ,自由基的清除率呈线性增长 ,当达到一定浓度时 ,
自由基的清除率趋于平缓。提取物中清除 DPPH·
的能力为枝最强 ,其半抑制浓度达 1907.5±6.40mg
TEAC/g,其次是叶和皮 ,都明显强于阳性对照芦丁 ,
这说明杨梅叶 、枝和树皮乙酸乙酯萃取物都有较强
198　
表 1　杨梅叶 、枝 、树皮提取物清除 DPPH·和 ABTS+·的抗氧化能力
MLE MBR MBA 芦丁
DPPH· (mgTEAC/g) 1324.40±5.51a 1907.5±6.40b 979.29±3.69c 822.03±6.78d
ABTS+· (mgTEAC/g) 1692.90±31.81a 1575.90±11.76b 1522.50±2.79c 415.09±7.85d
注:数据以平均值 ±偏差的形式表示(n=3);同一行中不同字母(a, b, c, d)表示显著性差异(p<0.05);TEAC表示 Trolox等价
抗氧化能力。
的清除 DPPH·能力。 DPPH·有一定选择性 ,它不
和 B-环上无羟基的黄酮类物质发生反应 ,也不与芳
香酸(aromaticacid)反应 [9 ] ,因此 ,相对于杨梅叶和树
皮提取物来说 ,杨梅枝提取物的 B-环上无羟基的黄
酮类物质和芳香酸含量可能相对较少 。
图 1　杨梅叶 、枝 、树皮提取物和阳性
对照芦丁清除 DPPH·的浓度依赖关系(n=3)
2.2　清除 ABTS+·的能力
ABTS法是使用最广泛的间接检测方法 ,可用于
亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定。 ABTS经氧
化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基 ABTS+· ,能
溶于水相或酸性乙醇介质中 ,在 734nm处有最大吸
收 。当有自由基清除剂存在时能与 ABTS+·发生反
应而使反应体系褪色 。在 ABTS+·的最大吸收波长
检测吸光值的变化 ,并与 Trolox比较从而换算出被
测物质总的抗氧化能力 。杨梅叶 、枝 、树皮提取物清
除 ABTS+·情况如图 2、表 1所示 。由图 2可见 ,随
着试样和阳性对照浓度的增加 ,其 ABTS+·清除率
呈稳步增大 ,当试样浓度达到一定浓度时 , ABTS+·
清除率呈缓慢增长趋势 。由表 1可看出 ,杨梅叶 、枝
和树皮提取物清除 ABTS+·能力显著强于阳性对照
芦丁 , 其中以杨梅叶最强 , 为 1692.90 ±31.81mg
TEAC/g,其次是枝 ,皮最弱 。据文献报道 [ 10] ,天然植
物提取物清除 ABTS+·能力与其总酚含量呈正相
关 ,杨梅叶 、枝与树皮提取物清除 ABTS+·能力存在
显著差异 , 这种差异可能就是由其总酚含量差异
所致。
图 2　杨梅叶 、枝 、树皮提取物和阳性
对照芦丁清除 ABTS+·的浓度依赖关系(n=3)
2.3　杨梅叶 、枝和树皮提取物的抗油脂氧化能力
取一定量山茶油 ,分别加入油样量的 0.02%、
0.03%、0.04%、0.05%的杨梅叶 、枝和树皮提取物 ,置
于 Rancimat743仪中 ,通过电导率的变化来确定诱导
时间的长短 。杨梅叶 、枝和树皮提取物及阳性对照
TBHQ、VE对山茶油抗氧化作用测定结果如表 2所
示 ,其中各种抗氧化剂的抗氧化能力用保护系数 Pf
表示 , Pf=Ip样品 /Ip空白。
表 2　120℃时不同添加量的杨梅叶 、
枝 、树皮提取物对山茶油的保护系数 Pf
添加
成分
添加量(%)
0.02 0.03 0.04 0.05
MLE 1.80±0.04bc2.36±0.03b2.21±0.04bc2.90±0.03b
MBR 1.74±0.03c 2.14±0.01c 2.17±0.03c2.62±0.19b
MBA 1.90±0.04b2.26±0.11bc2.43±0.02b 2.72±0.05b
TBHQ 2.38±0.04a 3.08±0.02a 3.55±0.07a3.79±0.14a
VE 0.99±0.03d 0.97±0.04d 1.06±0.00d 0.96±0.06d
注:山茶油空白诱导期 3.52 ±0.12h;数据以平均值 ±偏差的
形式表示(n=3);同一列中不同字母(a, b, c, d)表示显著性
差异(p<0.05)。
由表 2可知 ,杨梅叶 、枝 、树皮提取物加入到山
茶油都能明显延长山茶油诱导时间 ,而且随着添加
量增加 ,其诱导时间增长 ,这表明提取物添加剂量与
其抗氧化活性之间存在量效关系 。当添加量在
0.03%以上 ,其 Pf都大于 2,表明杨梅叶 、枝 、树皮提
取物对山茶油具有很好的抗氧化能力。当添加量为
0.02%时 ,各物质对山茶油的抗氧化能力表现为
TBHQ>皮提取物 >叶提取物 >枝提取物 >VE。
2.4　总抗氧化能力测定
评价提取物总抗氧化能力的方法因其作用机理
的差异可分为直接法和间接法 。直接法是研究含有
抗氧化物质的样品对整个测试系统的氧化降解性 ,
氧化的对象可能为单一脂类 、脂混合物 、蛋白质 、
DNA或者是含脂的混合物 ,如血浆 、低密度脂蛋白和
生物膜等 [ 10 ] 。直接法研究抗氧化物质在自由基的引
发 、传递 、清除等过程中所起的作用 ,在理论上更为
充分 。因此为了更好更全面评价杨梅叶 、枝和树皮
提取物抗氧化能力 ,采用血体系液总抗氧化能力来
评价 。该种方法实质是测试样品在生物体系中的还
原能力 ,实验以 VC作为阳性对照 ,结果如表 3所示。
抗氧化能力从强到弱的排序依次为 VC>枝提取物 >
叶提取物 >皮提取物。
表 3　杨梅叶 、枝 、树皮提取物总抗氧化能力
MLE MBR MBA VC
64.39±0.36c 71.82±0.62b 45.6±1.29d 98.88±3.23a
注:同一行中不同字母表示 Ducan s多重差异检测在 p=0.05
水平上差异显著。
3　结论
采用 DPPH·和 ABTS+·清除法研究杨梅叶 、枝
199　
和树皮提取物的抗氧化能力 ,是一种快速 、简便 、灵
敏可行的方法。杨梅叶 、枝和树皮提取物具有较好
的清除 DPPH·和 ABTS+·的作用 ,明显强于阳性对
照芦丁 , 且随着化合物浓度的增加 , 对 DPPH·和
ABTS+·的清除作用逐渐增强 ,表明提取物剂量与清
除自由基的能力间存在量效关系 。其中以杨梅枝提
取物清除 DPPH·能力最强 ,叶次之 ,皮最弱;杨梅叶
提取物清除 ABTS+·能力最强 ,枝次之 ,皮最弱。
杨梅叶 、枝和树皮提取物在山茶油中均有较强
的抗氧化活性 ,在一定添加剂量范围内 ,其抗氧化活
性与添加量存在量效关系 ,且 0.05%提取物的效果
优于 0.02%TBHQ;在 0.02%添加剂量下 ,各种提取物
对山茶油的抗氧化能力表现为 TBHQ>皮提取物 >
叶提取物 >枝提取物 >VE。在全血体系下的抗氧化
评价实验能更加真实反映提取物的抗氧化能力 ,结
果显示其抗氧化能力从强到弱的排序依次为 VC>枝
提取物 >叶提取物 >皮提取物 。
本研究结果表明 ,杨梅叶 、枝和树皮提取物含有
较好的清除自由基 ,抗山茶油氧化及全血抗氧化能
力 ,是一种极有潜力的天然抗氧化剂资源 , 其在食
品 、化妆品及药品方面的研究将成为今后的工作
重点。
参考文献
[ 1]周志宏 , 杨崇仁 .矮杨梅鲜叶的酚性化学成分 [ J] .云南植
物研究 , 2000, 22(2):219-224.
[ 2]何新华 , 陈力耕 ,陈怡 , 等 .中国杨梅资源及利用评述 [ J] .
果树学报 , 2004, 21(5):467-471.
[ 3]江苏新医学院 .中药大辞典(上册)[ M] .上海:上海科学
技术出版社 , 2000:1042.
[ 4] CaiY Z, LuoQ, SunM, etal.Antioxidantactivityand
Phenoliccompoundsof112 traditionalChinesemedicinalplants
associatedwithanticancer[ J] .LifeScience, 2004, 74:2157
-2184.
[ 5] SunA L, SunQH, LiuR M.Preparativeisolationand
purificationofflavonecompoundsfrom SophorajaponicaL.by
highspeed counter-currentchromatographycombined with
macroporousresincolumnsperation[ J] .JournalofSeparation
Science, 2007, 30:1013-1018.
[ 6] BaoJS, CaiYZ, SunM, etal.Anthocyanins, flavonols, and
freeradicalscavengingactivityofChinesebayberryectractsand
theircolorpropertiesandstability[ J] .AgriculturalandFood
Chemistry, 2005, 53:2327-2332.
[ 7] ReR, PelegriniN.Antioxidantactivityapplyinganimproved
ABTSradicalcationdecolorizationassay[ J] .FreeRadicalBiology
andMedicine, 1999, 26:1231-1237.
[ 8] AruomaoI.Methodologicalconsiderationsforcharacterizing
potentialantioxidantactionsofbioactivecomponentsinplant
foods[ J] .MutationResearch, 2003, 523-524:9-20.
[ 9] XuGuihua, YeXingqianChen, Jianchu, etal.Effectofheat
treatmentonthephenoliccompoundsandantioxidantcapacity
ofcitruspeelextract[ J] .JournalofAgriculturalandFood
Chemistry, 2007, 55(2):330-335.
[ 10]付陈梅 , 焦必宁 ,阚建全 .果蔬总抗氧化能力间接测定法
及其影响因素 [ J] .食品科学 , 2008, 29(4):457-460.
(上接第 195页)
图 6　FLJ、VC、BHT对油脂氧化的抑制作用
POV值明显比 BHT和 VC处理的油脂 POV值低 。因
此 , FLJ对抑制油脂氧化具有良好的效果 。
3　结论
体外抗氧化实验结果表明 , FLJ有一定的的清除
羟基自由基 、超氧阴离子自由基作用;具有较强的清
除烷基自由基以及抑制油脂过氧化的能力;FLJ作为
抗氧化功能因子在保健功能食品中的应用前景
　　　　　
广阔 。
参考文献
[ 1]高荫榆 ,洪雪娥 , 罗丽萍 ,等 .甘薯叶柄藤类黄酮的体外抗
氧化作用研究 [ J] .食品科学 , 2006, 27(7):103-106.
[ 2]严建刚 ,张名位 , 杨公明 ,等 .芹菜黄酮的提取条件及抗氧
化活性研究 [ J] .西北农业科技大学学报:自然科学版 , 2005,
33(1):32-36.
[ 3]张勇 ,王纯钢 , 冯冲 , 等 .红三叶黄酮抗氧化性研究 [ J] .食
品科技 , 2006(4):78-81.
[ 4]王绍美 .茶多酚与 VC对猪油乳化体系协同抗氧化性研究
[ J] .食品工业科技 , 2000, 21(6):24-27.
[ 5]许宗运 .七种植物提取物对猪油的抗氧化性研究 [ J] .塔里
木农垦大学学报 , 2003, 15(4):1-5.
[ 6]赵声兰 .核桃油自氧化及其抗氧化的实验研究 [ J] .食品工
业科技 , 2001, 22(2):27-29.