全 文 ：第 34卷第 2期
2011年 4月
云南中医学院学报
JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine
Vol. 34No. 2
4.2011
岩白菜中岩白菜素的纯化及提取工艺研究＊
刘海周 , 孙海林 , 李文军 , 梁晓原■
(云南中医学院 , 云南昆明　650500)
[摘　要 ] 目的:优选岩白菜中岩白菜素最佳提取工艺并考察其纯化方法。方法:用紫外 -可见分光光度计
测定岩白菜素的含量为指标 , 考察了影响大孔吸附树脂纯化及醇提工艺的主要因素。结果:确定岩白菜的最佳
提取工艺条件为 10倍量 50%的乙醇 , 回流提取 3次 , 每次 0.5h, 最佳的纯化条件为每克 D-101树脂 (干重)
最大上样量 2.5g原生药材 , 上样静置吸附 30min后用 6倍柱床体积 20%的乙醇洗脱。结论:在该提取及纯化的
最佳参数组合下 , 岩白菜素的含量达 14.023%, 结果可靠。
[关键词 ] 岩白菜;岩白菜素;提取纯化工艺
中图分类号:R241　　文献标志码:A　　文章编号:1000— 2723(2011)02— 0022— 04
岩白菜为虎耳草科岩白菜属植物岩白菜 Berga-
mapurpurascens(Hook.f.etThoms.)Engl.的干
燥根茎 , 主要分布于滇西北 、 滇中 、滇东北各地 ,
四川西部 、 西藏东南部也有分布 , 最早载于清
《分类草药性 》, 具有滋补强壮 、 止血 、 止咳等功
效 [ 1-2] 。岩白菜主要有效成分岩白菜素属于异香豆
精类化合物 , 具有良好的镇咳 、 祛痰 、 抗炎 、 护
肝 、抗病毒和神经保护等作用 , 现已广泛应用于临
床 , 主要用于慢性支气管炎的治疗 [ 3] 。本文考察
了岩白菜中岩白菜素用大孔吸附树脂纯化的条件及
最佳提取工艺条件 , 预期为岩白菜资源的充分利用
提供理论及技术支持 , 为岩白菜这一重要民族药开
发实现经济效益的最大化 。
1　仪器与材料
1.1　仪器
UV-2450紫外 -可见分光光度仪 (岛津);
PercisaXS-125A型电子分析天平 (瑞士产);BU-
CHI-R-200旋转蒸发仪 (瑞士产)等 。
1.2　材料
甲醇 、 乙醇 (均为分析纯), 水 (去离子水),
D-101大孔吸附树脂 (天津农药股份有限公司树
脂分公司生产)。岩白菜样品 (同一批次)由本院
杨树德副教授鉴定为虎耳草科岩白菜属植物岩白菜
Bergamapurpurascens(Hook.f.etThoms.)Engl.
的干燥根茎 , 粉碎过 40目筛 , 置于阴凉处备用。岩
白菜素对照品 (供含量测定用 , 批号:111532—
200202)购于中国药品生物制品检定所。
2　试验方法与结果
2.1　岩白菜素的纯化方法考察
根据预实验采用萃取法纯化岩白菜素难以实
现 , 故用大孔吸附树脂进行纯化 , 主要考察了洗脱
剂的浓度 、洗脱剂的用量 、 树脂的最大吸附量及最
佳吸附时间等因素 。
2.1.1　岩白菜素粗提取物的制备
称取岩白菜粗粉 10.0g, 加 60%乙醇 100mL,
回流提取两次 , 第 1次 1h, 第 2次 0.5h, 合并所
得滤液 , 低温减压浓缩至干 , 备用。
2.1.2　洗脱剂浓度的选择
取 2.1.1项下岩白菜提取物适量 , 加水定容至
10mL转移至大孔吸附树脂柱中 , 静置吸附后用水
洗脱至流出液无色 , 弃去水洗部分 , 分别用 10%,
20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%,
95%的乙醇液进行洗脱 , 收集各洗脱液浓缩作为供
试品溶液 。另取岩白菜素对照品溶液 , 照薄层色谱
法实验 , 吸取上述各溶液 5μL, 分别点于同一硅胶
G薄层板上 , 以氯仿∶乙酸乙酯∶甲酸 (5∶4∶2)为
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＊收稿日期:2010— 04— 30　　修回日期:2010— 12— 07
作者简介:刘海周 (1982 ～ ), 男 , 云南曲靖人 , 2008级硕士研究生 , 从事超临界二氧化碳流体萃取中药中有效成分
及中药质量控制研究工作。 Δ通讯作者:梁晓原 , E-mail:liangxiaoyuan169@163.com
第 2期 刘海周 , 等:岩白菜中岩白菜素的纯化及提取工艺研究　　　　　　　　　 　　　
展开剂展开 , 取出 , 晾干 , 置紫外光灯 (254nm)
下检视 。结果见表 1所示 , 结合紫外测定得最佳洗
脱剂浓度为 20%乙醇。
表 1　洗脱溶剂极性的考察
洗脱溶剂 洗脱溶剂量/BV
与对照品相应
位置处有无斑点
水 6 无
10% 6 有 , 明显
20% 6 有 , 明显
30% 6 无
40% 6 无
50% 6 无
60% 6 无
70% 6 无
80% 6 无
95% 6 无
　　注:BV为柱床体积 =πr2×h≈50mL
2.1.3　洗脱溶剂用量的考察选择
取 2.1.1项下岩白菜提取物适量 , 加水定容至
10mL转移至大孔吸附树脂柱中 , 静置吸附后用水
洗脱至流出液无色 , 弃去水洗部分 , 接着分别收集
0 ～ 3BV、 3 ～ 4BV、 4 ～ 5BV、 5 ～ 6BV、 6 ～ 7BV的
20%乙醇洗脱液。取各部分洗脱液 0.1mL置 10mL
容量瓶中稀释摇匀 , 并定容至刻度 , 于波长 274nm
处测定吸收度 , 计算出岩白菜素的含量。结果第 6
～ 7BV洗脱液经紫外和薄层色谱鉴别不含岩白菜
素 , 紫外结果见表 2所示 , 最佳洗脱溶剂用量为柱
床体积的 6倍。
表 2　最佳洗脱溶剂用量的考察
洗脱溶剂
用量 /BV 吸收值 浓度 /μg/mL 含量 /g
0 ～ 3 0.403 17.973 0.270
3 ～ 4 0.148 6.725 0.036
4 ～ 5 0.023 1.211 0.006
5 ～ 6 0.004 0.018 0.0001
6 ～ 7 0 0 0
2.1.4　最大吸附量的考察
将浓度为 C0 (0.2g/mL)的岩白菜样品液适
量通过树脂柱 (树脂干重 M为 10g), 使其充分吸
附至饱和后 , 结果测定残留液中岩白菜素的浓度
C1为 0.137g/mL, 所用样品液体积 V为 400mL。
根据吸附量 (g/g) =(C0 -C1)×V/M计算得到
最大吸附量为 2.5g生药 /g干树脂。
2.1.5　最佳吸附时间的考察
取 2.1.1项下岩白菜提取物适量 , 加水定容至
10mL转移至大孔吸附树脂柱中 , 静止吸附后用水
洗脱至流出液无色 , 弃去水洗部分 , 分别静止吸附
20min, 30min, 40min, 50min, 60min, 70min后用
水洗脱至流出液无色 , 弃去水洗部分 , 再用 20%乙醇
洗脱 , 收集洗脱液 300mL, 取出 0.1mL置 10mL容
量瓶中稀释摇匀 , 并定容至刻度 , 于波长 274nm
处测定吸收度 , 计算出岩白菜素的含量 。结果见表
3所示 , 最佳吸附时间为 30min。
表 3　最佳吸附时间的考察
编号 1 2 3 4 5 6
吸附时间 /min 20 30 40 50 60 70
吸收值 0.475 0.539 0.511 0.467 0.433 0.538
2.2　岩白菜醇提工艺的考察
2.2.1　岩白菜素含量测定方法学考察
2.2.1.1　标准曲线的绘制
精密称量 3.0mg岩白菜素对照品置于 50mL容
量瓶中 , 加甲醇溶解 , 并定容至刻度 , 得到 60μg/
mL的岩白菜素对照品溶液 。精密量取 1.0mL置
10mL容量瓶中 , 加甲醇定容至刻度 , 摇匀。以甲
醇为空白 , 在 200 ～ 500nm波长段扫描 , 结果岩白
菜素在 274nm处有较好吸收 , 故选 274nm作为岩
白菜素的测定波长 。如图 1所示。
图 1　岩白菜素紫外扫描图
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2011年 云南中医学院学报 第 34卷
精密量取上述对照品溶液 1.5mL、 2.0mL、
3.0mL、 4.0mL、 5.0mL、 5.5mL分别置 10mL容量
瓶中 , 用甲醇摇匀 , 定容至刻度。分别以甲醇为空
白对照 (如图 1所示), 在 274nm波长处测定吸收
度 。以纵坐标作为吸收度 , 以横坐标作为浓度 , 制
定标准曲线 , 得到标准曲线为 y=0.02267c-
0.00445 (r=0.99986)。结果表明岩白菜素对照品
在 9.0μg/mL～ 33.0μg/mL范围内线性关系良好。
2.2.1.2　供试样品溶液的制备
取岩白菜粉末 (40目)9份 , 每份 5.0g, 分
别按照正交试验设计项下条件进行提取 , 合并提取
液 , 回收溶剂 , 用蒸馏水定容到 10mL, 转移至大
孔吸附树脂柱中 , 使其静止 30min后用 300mL去
离子水洗脱至流出液无色 , 弃去水洗部分 , 再用
20%乙醇洗脱 , 收集洗脱液 300mL, 取洗脱液
0.1mL置 10mL容量瓶中稀释摇匀 , 并定容至刻
度 , 于波长 274nm处测定吸收度 , 计算出岩白菜
素的含量。
2.2.1.3　正交设计
采用 L9 (34)进行正交设计 , 以岩白菜素含
量作为指标 , 对乙醇浓度 、乙醇用量 、 提取时间 、
提取次数等四个因素进行实验 (每组平行 3次),
优选较佳工艺 , 因素水平表见表 4, L9 (34)正交
试验结果见表 5, 方差分析见表 6。
表 4　正交实验因素水平表
水平
因　　素
A乙醇
浓度 /%
B乙醇
量 /倍
C提取
时间 /h
D提取
次数
1 40 6 0.5 1
2 50 8 1.0 2
3 60 10 1.5 3
由岩白菜素提取率的正交试验直观分析及方差
分析可以得知 , 提取次数有较显著性影响 , 而乙醇
浓度 、 乙醇用量及提取时间影响不显著 , 因素的影
响顺序为:提取次数 >乙醇浓度 >溶媒量 >提取时
间 。结合直观分析结果 , 岩白菜较佳提取工艺为:
A2B3C1D3 , 即 10倍量 50%的乙醇 , 回流提取 3
次 , 每次 0.5h。
2.2.2　优选工艺的验证实验
为进一步考察上述优选工艺的可行性 , 按上述
最佳工艺条件进行验证实验 , 岩白菜素的含量分别
为: 13.82%, 13.79%, 14.25%, 14.31%,
13.97%, RSD为 1.35%, 证明该工艺可行。
表 5　岩白菜正交试验结果
试验
编号
因　　素
A B C D
岩白菜
素平均
得率 /%
1 1 1 1 1 9.10
2 1 2 2 2 12.83
3 1 3 3 3 12.86
4 2 1 2 3 13.20
5 2 2 3 1 10.50
6 2 3 1 2 13.80
7 3 1 3 2 11.60
8 3 2 1 3 12.90
9 3 3 2 1 9.70
k1 11.597 11.300 11.933 9.767
k2 12.500 12.077 11.910 12.743
k3 11.400 12.120 11.653 12.987
R 1.100 0.820 0.280 3.220
表 6　方差分析表
方差
来源
离均差
平方和 自由度 方差 F值 P 显著性
A 2.065 2 1.0325 14.241 >0.05
B 1.277 2 0.6385 8.807 >0.05
C 0.145 2 0.0725 1 >0.05
D 19.288 2 9.644 133.021 <0.01 ＊＊＊
误差SS 0.14 2 0.0725 1
F0.05(2 , 2)=19　F0.025(2, 2)=39.00　F0.01(2, 2)=99
3　结果与讨论
本实验考察出了大孔吸附树脂纯化岩白菜中岩
白菜素的条件 , 并在该条件下对正交试验中所得提
取物进行纯化 , 采用紫外可见分光光度计法进行含
量粗控 , 优选出最佳的乙醇提取岩白菜中岩白菜素
工艺条件为 10倍量 50%的乙醇 , 回流提取 3次 ,
每次 0.5h。
2010版中华人民共和国药典 [ 3] 仍采用紫外可
见分光光度计法测定岩白菜素的含量 , 该方法具有
操作简单 、 使用方便 、 价格便宜 、 重现性好等特
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第 2期 刘海周 , 等:岩白菜中岩白菜素的纯化及提取工艺研究　　　　　　　　　 　　　
点 , 能够较好的初步控制岩白菜及其提取物的
质量。
未见采用大孔吸附树脂纯化岩白菜中岩白菜素
的报道 , 相关文献 [ 4] 也未对纯化用洗脱剂浓度及
用量 、 吸附时间等主要因素进行考察 。笔者通过用
大孔吸附树脂纯化岩白菜素 , 发现该方法效果较
好 , 用紫外测定岩白菜素的相关文献 [ 5]岩白菜素
的提取率 仅为 4.38%, 而 本实 验提取 率达
14.023%, 是其 3倍多 , 这可能是与大孔吸附树脂
纯化后得到的是一类以岩白菜素为主的有效部位及
采用大孔吸附树脂纯化岩白菜素损失较少等因素有
关 。该方法值得进一步研究 , 有望实现工业化
生产 。
[参考文献 ]
[ 1] 云南药物研究所.云南重要天然药物 [ M] .昆明:
云南科技出版社 , 2006:276-283.
[ 2] 吕修梅 , 王军宪.岩白菜属植物的研究进展 [ J] .中
药材 , 2003, 26 (1):58-60.
[ 3] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典 [ S] .一
部.北京:中国医药科技出版社 , 2010:384.
[ 4] 胡文杰.朱砂根岩白菜素纯化条件优化 [ J] .林业科
技开发 , 2008, 22 (4):76-78.
[ 5] 彭永芳 , 熊杰.岩白菜素提取工艺的改进 [ J] .昆明
师专学报 , 1996, 11 (1):46-49.
(编辑:迟　越)
StudyonthePurificationandExtractionTechnologyofBergenin
fromtheBergamapurpurascens(Hook.f.etThoms.)Engl
LIUHai-zhou, SUNHai-lin, LIWen-jun, LIANGXiao-yuan■
(YunnanUniversityofTCM, KunmingYunnan650500, China)
[ ABSTRACT] Objective:TooptimizethebestExtractionprocessandtoinvestigateitsPurificationTechnol-
ogyofBergeninfromtheBergamapurpurascens(Hook.f.etThoms.)Engl.Methods:TodetermineBergenin
contentwithUV-visiblespectrophotometerasanindicatortostudythemainefectfactorsofinfluencingmacro-
reticularresinpurificationandethanolextracttechnology.Results:Havingdeterminedtheoptimalextraction
procesofBergamapurpurascens(Hook.f.etThoms.)Engl., whichincludeextractionBergamapurpurascens
(Hook.f.etThoms.)Engl.withtenfold50% ethanolthreetimes, 0.5 hourpertime, andbestpurification
conditionisthatloading2.5 gramsnetrawmedicinalmaterialsatmostintoD-101 resineachgramandabsorb
30minsandtheprocedureofelutionis6 times20% ethanolthevolumeofcolume.Conclusion:thecontentof
Bergeninreached14.023%, whichbasedonThebestparametersofpurificationandextraction, theresultsarere-
liable.
[ KEYWORDS] Bergeniapurpurascens(Hook.f.etThoms.)Engl.;Bergenin;extractionandpurifica-
tiontechnology
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