全 文 ：[ 2] 罗明标.多孔中空纤维液相微萃取技术的研究进展 [ J] .分析
化学 , 2007, 35(7):1071-1077.
[ 3] Pedersen-Bjergaard. Liquid-Liquid-Liquid Microextraction for
SamplePreparationofBiologicalFluidsPriortoCapilaryElectro-
phoresis[J].AnalChem, 1999, 71(14):2650-2656.
[ 4] ElefteriaPsilakis, NicolasKalogerakis.Applicationofsolventmi-
croectractiontotheanalysisofnitroaromaticexplosivesinwater
samples[ J] .JChromatogrA, 2001, 907:211-219.
[ 5] ElefteriaPsilakis, NicolasKalogerakis.Holow-fibreliquid-phase
microextractionofphthalateestersfromwater[ J].JChromatogr
A, 2003, 999:145-153.
[ 6] JonLezamiz, JanAkeJonsson.Developmentofasimpleholowfi-
bersupportedliquidmembraneextractionmethodtoextractand
preconcentratedinitrophenolsinenvironmentalsamplesatngL-1
levelbyliquidchromatography[J] .JchromatogrA, 2007,
1152:226-233.
HPLC测定岩白菜及四臣止咳颗粒中岩白菜素的含量
王光发 1 , 廖正根 1＊ , 梁新丽1 , 陈绪龙 1 , 余日跃 2 , 尼玛次仁 3
(1.江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 ,江西 南昌 330004;2.江西中医学院药学院 ,江西 南昌
330004;3.西藏藏医学院 ,西藏 拉萨 850000)
收稿日期:2008-07-21
基金项目:西藏自治区科技计划项目(2007-第 2批-12)
作者简介:王光发(1984-),男 ,硕士研究生 ,从事中药新剂型与新技术的研究。 Tel:(0791)7119011 E-mail:fda5@ 163.com
＊通讯作者:廖正根(1967-),男 ,博士 ,副教授 ,从事药物新剂型与新技术研究。 Tel:(0791)7119011 E-mail:lyzlyg@163.com
关键词:岩白菜素;岩白菜;四臣止咳颗粒;HPLC
中图分类号:R927.2 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2009)11-1799-03
四臣止咳颗粒由岩白菜 ,螃蟹甲 , 甘草 ,猪毛蒿四味药材
经提取加工制备而成。该方中的岩白菜为虎耳草科植物岩
白菜 Bergeriapurpurascens(Hook.f.etThoms.)Engl.的干燥
根茎或全草 , 分布于西藏东部 、四川西南部 、云南西北部。岩
白菜收载于 1977版《中国药典》 [ 1] ,用于清热解毒 , 消肿;主
治瘟病 , 肺热 ,中毒及四肢肿胀等症。 岩白菜根茎含岩白菜
素(bergenin)[ 2] , 岩白菜素具有明显的止咳作用 , 其止咳强
度约相当于磷酸可待因的 1/4 ～ 1/7[ 3] , 《中国药典》 2005版
一部收为镇咳祛痰药 ,用于慢性支气管炎 [ 4] 。岩白菜素为四
臣止咳颗粒镇咳祛痰主要活性成分之一 [ 5] 。 本实验建立
HPLC测定四臣止咳颗粒中岩白菜素含量的方法。 考虑到
现行法定标准未收载岩白菜原药材的含量测定标准 ,为更好
控制岩白菜原药材的质量 , 本试验同时也建立了岩白菜原药
材中岩白菜素的含量测定方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津高效液相色谱仪:LC-10ATvp泵 , SPD-10Avp紫外
检测器;KQ-250VDB型双频数控超声波清洗器(昆山市超声
仪器有限公司);TG328A十万分之一电子天平(德国 Starto-
rius公司)。
1.2 试药
岩白菜素对照品由中国药品生物制品检定所提供 , (批
号:1532 -200202);岩白菜为虎耳草科植物岩白菜 Bergeria
purpurascens(Hook.f.etThoms.)Engl.的干燥根及根茎 , 采
购于西藏自治区 ,经江西中医学院生药学教研室张寿文副教
授鉴定;四臣止咳颗粒剂(本实验室自制);甲醇为色谱纯 ,
水为双蒸水 ,其余试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Symmetry-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动
相:甲醇-水-磷酸(22∶ 78∶0.1);流速:1 mL/min;检测波
长:275nm;柱温:25 ℃ ;进样量:10 μL。 在该色谱条件下 ,
岩白菜素色谱峰与供试品溶液中其他色谱峰达到了基线分
离 ,阴性试验结果表明阴性无干扰 , HPLC色谱图见图 1 ～ 4。
图 1 岩白菜素对照品 HPLC色谱图
1.岩白菜素
图 2 岩白菜药材供试品 HPLC色谱图
1.岩白菜素
1799
2009年 11月
第 31卷 第 11期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
November2009
Vol.31 No.11
图 3 四臣止咳颗粒供试品 HPLC色谱图
1.岩白菜素
图 4 缺岩白菜阴性样品 HPLC色谱图
2.2 对照品溶液的制备
精密称取岩白菜素对照品 5.86 mg,置 50 mL量瓶中 , 加
甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀。得浓度为 117.2 μg/mL的标
准品贮备液。
2.3 岩白菜药材供试品溶液的制备
取本品粉末(过四号筛)约 0.2g, 精密称定 , 置具塞锥形
瓶中 , 精密加入 95%乙醇 50 mL, 称定重量 , 超声(250 W, 45
kHz)60 min, 放冷 , 再称定重量 , 用 95%乙醇补足减失的重
量 , 摇匀 ,滤过 , 精密量取续滤液 1 mL, 置 10 mL量瓶中 , 加
流动相至刻度 , 摇匀 ,即得。
2.4 四臣止咳颗粒供试品溶液的制备
取本品粉末(过四号筛)约 0.4 g, 精密称定 , 置具塞锥
形瓶中 , 精密加入甲醇 50 mL, 称定重量 , 超声(250 W, 45
kHz)30 min,放冷 , 再称定重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇
匀 , 滤过 ,精密量取续滤液 1 mL, 置 5 mL量瓶中 , 加流动相
至刻度 , 摇匀 ,即得。
2.5 标准曲线及线性范围
分别精密吸取上述标准品贮备液 0.5、1.0、2.0、4.0、5.0
mL置 10 mL量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 , 摇匀 , 即得。分
别进样 20μL, 以进样浓度为横坐标(X), 峰面积为纵坐标
(Y),绘制标准曲线。结果表明岩白菜素在 5.86 μg/mL～
58.6 μg/mL范围内呈良好线性关系 , 回归方程为 Y=
11 808X-1 657.4(r=0.999 9)。
2.6 精密度试验
精密吸取对照品溶液 10 μL, 重复进样 6次 , 测得峰面
积积分值 , 计算得 RSD为 0.27%,表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性试验
取岩白菜药材粉末(过四号筛), 按 2.3项下方法制备
供试品溶液 , 精密吸取岩白菜药材供试品溶液 10 μL, 分别
于第 0、2、4、8 h进样 , 测得峰面积积分值 , 计算岩白菜素含
量 , 得到 RSD为 1.14%。结果表明岩白菜药材供试品溶液
在 8 h内稳定。取四臣止咳颗粒剂粉末(过四号筛), 按 2.4
项下方法制备供试品溶液 , 精密吸取供试品溶液 10 μL, 分
别于第 0、 2、4、8 h进样 , 测得峰面积积分值 , 计算岩白菜素
含量 ,得到 RSD为 0.02%。结果表明四臣止咳颗粒供试品
溶液在 8h内稳定。
2.8 重复性试验
取岩白菜药材粉末(过四号筛), 按 2.3项下方法平行
制备岩白菜药材供试品溶液 5份 ,进样测定 , 结果岩白菜素
平均含量为 8.17%, RSD为 1.14%, 重复性良好。取四臣止
咳颗粒剂粉末(过四号筛), 按 2.4项下方法平行制备供试
品溶液 5份 ,进样测定 , 结果岩白菜素平均含量为 22.38 mg/
g, RSD=0.14%,重复性良好。
2.9 加样回收率试验
取约 0.1g已知含量的岩白菜药材粉末(过四号筛)9
份 ,精密称定 , 分别加入精密称定的岩白菜素对照品适量 ,按
2.3项下方法制备岩白菜药材供试品溶液 , 测定 , 结果见表
1。取约 0.2 g已知含量的四臣止咳颗粒粉末(过四号筛)9
份 ,精密称定 , 分别加入精密称定的岩白菜素对照品适量 ,按
2.4项下方法制备四臣止咳颗粒试品溶液 , 测定。结果见表
2。
表 1 岩白菜药材加样回收率试验
取样量
/g
样品含
量 /mg
对照品
量 /mg
实测量
/mg
加样回收
率 /%
平均加样
回收率 /%
RSD
/%
0.096 3 7.87 6.49 14.17 97.08
0.098 2 8.02 6.49 14.44 98.89
0.096 5 7.88 6.47 14.19 97.43
0.098 0 8.01 7.96 16.01 100.60
0.095 1 7.77 8.06 15.53 96.36 98.79 1.74
0.096 5 7.88 7.91 15.77 99.66
0.101 4 8.28 10.00 18.22 99.35
0.095 3 7.79 9.52 17.13 98.11
0.099 4 8.12 9.59 17.87 101.65
表 2 四臣止咳颗粒加样回收率试验
取样量
/g
样品含
量 /mg
对照品
量 /mg
实测量
/mg
加样回收
率 /%
平均加样
回收率 /%
RSD
/%
0.201 1 4.50 3.62 8.15 100.82
0.201 0 4.50 3.61 8.19 102.23
0.200 3 4.48 3.62 8.22 103.32
0.201 6 4.51 4.51 9.24 104.78
0.200 5 4.49 4.57 9.18 102.68 102.41 1.32
0.200 7 4.49 4.55 9.20 103.45
0.193 2 4.32 5.19 9.57 101.13
0.194 3 4.35 5.22 9.60 100.71
0.195 2 4.37 5.24 9.74 102.53
2.10 样品测定
取 3批岩白菜药材粉末(过四号筛), 按 2.3项下方法制
备供试品溶液。 分别精密吸取供试品溶液 、对照品溶液各
10 μL, 注入高效液相色谱仪 , 测定 , 计算 , 结果见表 3。取四
臣止咳颗粒加粉末(过四号筛), 按 2.4项下方法制备供试
品溶液。分别精密吸取供试品溶液 、对照品溶液各 10 μL,
注入高效液相色谱仪 ,测定 ,计算 , 结果见表 3。
1800
2009年 11月
第 31卷 第 11期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
November2009
Vol.31 No.11
表 3 岩白菜药材 、四臣止咳颗粒中岩白菜素的
含量测定结果
岩白菜
批号
岩白菜素的含量 /%
(x±s, n=2)
四臣止咳
颗粒批号
岩白菜素的含量 /(mg/包)
(x±s, n=2)
01 8.18±0.05 01 146.06±0.07
02 7.82±0.07 02 138.45±0.04
03 6.53±0.10 03 115.64±0.04
3 讨论
在选择岩白菜药材供试品溶液的制备方法时 ,比较了回
流提取与超声提取两种提取方式并考察了提取时间 ,结果表
明超声提取 60min就能把岩白菜素提取较完全。提取溶剂
的选择时考察了水 、甲醇 、 50%甲醇 、 95%乙醇 、 50%乙醇 5
种溶剂 , 结果表明 95%乙醇更有利于岩白菜素的提取。
在选择四臣止咳颗粒供试品的制备方法时 ,比较了回流
提取与超声提取两种提取方式并考察了提取时间 ,结果表明
超声提取 30 min可使岩白菜素提取较完全 , 而且比回流提
取操作简便 ,因此我们确定超声提取 30 min。提取溶剂的选
择时考察了水 、甲醇 、50%甲醇 、 95%乙醇 4种溶剂 , 结果表
明甲醇溶剂更有利于岩白菜素的提取。
参考文献:
[ 1] 中国药典 [ S] .一部.1977:345.
[ 2] 奥田拓男.中国产药用植物的及有关多元酚类的研究-岩白菜
的多元酚 [ J] .国外医学-中医中药分册 , 1987, 9(2):58.
[ 3] 湖南医学院药理研究组.岩白菜素的止咳作用 [ J] .中华医学
杂志 , 1973, 53(12):706.
[ 4] 中国药典 [ S] .一部.2005:278.
[ 5] 李文春 , 郭凤根 , 张丽梅 , 等.岩白菜研究现状与展望 [ J].
云南农业大学学报 , 2006, 21(6):845-850.
救尔心胶囊质量标准研究
韦文俊 , 罗 远
(广西中医学院 ,广西 南宁 530001)
收稿日期:2009-02-02
作者简介:韦文俊(1952-), 男(壮族),副教授 , 硕士生导师 , 研究方向:中药新剂型 、新制剂研究与开发。 Tel:13517689667 E-mail:
wwj5101@hotmail.com
关键词:救尔心胶囊;TLC;HPLC
中图分类号:R927.2 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2009)11-1801-03
救尔心胶囊是临床常用的中成药之一 , 收载于 《中华人
民共和国卫生部药品标准 》(中药成方制剂 第八册), 由三
七 、川芎 、红花 、丹参 、泽泻 、刺五加浸膏粉六味药组成 ,具有
活血通脉 , 化瘀生新之功效。用于冠心病 , 心绞痛。原标准
中仅建立三七的薄层鉴别。本试验对其质量标准进行研究 ,
建立了川芎 、丹参的 TLC鉴别方法及三七中的活性成分三
七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、Rb1含量的 HPLC测定方法。
1 仪器与试药
1.1 实验仪器 美国 AgilentHP1100高效液相色谱仪 , 包
括 1100系列四元泵 , 自动进样器 , 柱温箱及可变波长检测
器 , 色谱柱:KromasilC18(5 μm, 4.6 mm×250 mm);SB3200-
T超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。纯水装置:美
国 MILLIPORE公司 Simplicity185超纯水系统。
1.2 药品与试剂 本实验所用的对照品均由中国药品生物
制品检定所提供。乙腈为色谱纯;其余试剂为分析纯。 救尔
心胶囊(吉林百姓堂药业有限公司 , 批号 050726、 050727、
050728,规格 0.45 g/粒)。
2 薄层鉴别
2.1 川芎的薄层鉴别 [ 1] 称取救尔心胶囊的内容物 2 g,加
甲醇 20 mL, 超声提取 15 min,滤过 , 滤液挥干 ,残渣加甲醇 1
mL溶解 , 作为供试品。取川芎标准对照药材 1.0 g,加甲醇 5
mL, 超声提取 10 min, 滤过 , 滤液作为对照品溶液。分别吸
取对照品溶液和供试品溶液 10 μL,分别点于同一硅胶 G薄
层板上 ,以石油醚(60 ～ 90 ℃)-三氯甲烷(9∶1)为展开剂 ,
展开 , 取出 , 晾干 , 置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色
谱中 ,在与对照品相应的的位置上 ,显相同颜色荧光的斑点 ,
阴性对照品无相应斑点。
2.2 丹参的薄层鉴别 [ 2 , 3] 称取救尔心胶囊的内容物 2 g,
加甲醇 20 mL, 超声提取 15 min, 滤过 , 滤液挥干 , 残渣加甲
醇 1mL溶解 , 作为供试品。取原儿茶醛对照品适量 ,加甲醇
制成每 1mL含 0.5mg的溶液 , 作为对照品溶液。吸取对照
品溶液和供试品溶液各 10 μL,分别点于同一硅胶 G薄层板
上 ,以苯-醋酸乙酯-甲酸(10∶6∶0.5)为展开剂 , 展开 , 取
出 ,晾干 , 喷以 2%三氯化铁溶液 , 供试品色谱中 , 在与对照
品相应的的位置上 , 显相同颜色的斑点 , 阴性对照品无相应
斑点。
1801
2009年 11月
第 31卷 第 11期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
November2009
Vol.31 No.11