全 文 ：药学学报 A c t a P h a rm a c e u t ic a S in io拜 工9 5 8 , 2 3 ( , 7 ) : 6 0 6、 6 0 9
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落新妇和岩首蒲中岩白菜素的
`高效液相色谱测定法
陈文斗 聂明华
(贵州省遵义地区药品检验所 , 遵义 )
提要 本文报道用高效液相色谱法侧定落新妇和岩曹蒲中岩白湃素的含量 。 样品用 甲醇以超 ·
声波法提取 , 通过 YW G 一 C , . H : ,键合相柱 , 用甲醇一乙醚一乙腊一水 ( 30 : 2 : 3 : 65) 为流动相、在 275
n m 波长检测 , 用对氨基苯磺酸为内标 , 峰面积内标法定量 。 方法简便 、 快速 , 结果较好 、
关锐词 落新妇 ; 岩曹蒲 ; 岩白菜素 ; 高效液相色谱法 、 ` -
落新妇 A。 “ l b o c h `, 。 。 {。 ( M a x i m · )
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· 的根茎 , 为常用中草药 , 主要有效成分为岩白菜素 ( b e r g e n i n ) “ ’ ,
其含量测定 , 先以甲醇提取 , 硅胶 G薄层层析或纸层析分离后 , 用紫外分光光 度法 (2 , “ ) 、 比
色法“ 叫 ’测定 , 操作繁杂费时 , 误差较大 。 为了开发利用资源和改进生产工艺 、 控制产品质
量 , 本文对分析测定方法作了研究 , 用高效液相色谱法进籽分离 , 内标祛定量 , 方法灵敏 、
快速 , 结果较好 。
实 验 部 分
一 仪器 、 试剂
高效液相色谱仪 L C 一“ A , 紫处检测器 s P D 一“ A M , `数据处理机 C 一 R 3 A (日本岛津 ) , 超声
波振荡器 H 6 6 O2 5 (T 无锡超声波电子设备厂 ) ; 微量注射器 10 川 (上海注射器三厂 ) ; 不锈
钢柱 2 50 、 必4 . 6m m , 固定相 Y w G 一 lC sH如 粒度 10 拜m (天津化学试 剂二厂 ) , 高压 匀浆充
填 。
岩白菜素标准品 , 供测定 E值用 (云南省药品检验所 ) ; 无水对氨基苯磺酸 , 基准试剂 (北
京化工厂 ) ; 其余试剂为分析纯 。
二 , 实验条件
(一 ) 仪器参数 紫外检测波长 2 7 5 n m , 灵敏度 0 . 3 2 A U F S , 流动相流速 o . 7m l / m i n ,
纸速 I c m / m in , 柱温 室温 。
(二 ) 分离条件 选用多种流动相试验 , 结果以甲醇一乙醚一乙精一水 ( 30 : 2 : 3 : 65 )分离
效果较好 , 峰形对称 , 在 s m in 内完成分离 。 落新妇 、 岩营蒲提取液加内标的分 离结果见图
1
。
(三 ) 校正因子 选用无水对氨基苯磺酸为内标物 , 精密称取适量 , 加 25 % 甲醇溶解 并稀
释成每 m l约 1 0 拼g , 备用 。 然后准确量取本液与岩白菜素标淮溶液 (约 70 拼g /m l) 各 5 m l ,
混匀 , 进样 6 川 , 按上述色谱条件测定 , 以峰面积计算相对校正因子 。
(四 ) 生药提取
本文于 通95 7年 5 月 4 日收到 .
药学学报 A e t a P h a r m a e e u ti e a S i n i e a 1 988 , 2 3 ( g ) : 60 6、 60 9 60 7
1
. 溶剂选择 精密称取已干燥的生药粉 ( 3号筛 ) 0 . 5 9 , 于 10 m l量瓶中 , 分别加人 30 %
甲醇 、 甲醇 、 乙醇 、 氯仿 、 丙酮 、 二氯乙烷至刻度 , 浸泡 s h过滤 。 分别取滤液 2 m l挥干 , 残
留物用 30 % 甲醇溶解并稀释至 25 m l , 用微量注射器吸取 2川作高效液相色谱分离 , 比 较其
峰面积 。 结果氯仿 、 丙酮 、 二氯乙烷的提取效果较差 , 乙醇 、 30 % 甲醇提取液的颜色较深 ,
杂质较多 , 而以甲醇为提取溶剂较好 。
2
. 提取时间 精密称取已干燥的生药粉 0 . 4 9 , 置 25 m l量瓶中 ,分别用 5 , 10 , 巧 , 20
m l甲醇浸泡 o . s h ,并分别以超声波助溶提取 1 0 , 2 0 , 3 0 , 4 0 , 5 0 , 6 o m i n , 冷至室温 ,加甲
醇至刻度 , 过滤 , 取续滤液 2 m l , 加 30 % 甲醇稀释至 25 m l使与流动相中的甲醇浓度相似 ,
进样 6拜 1测定含量 , 结果用甲醇 5 m l提取 2次 , 每次提取 40 m in , 与甲醇 15 m l提取 1次 , 无
甚差异 。 为简便操作和保证提取完全 ,采取甲醇用量 20 m l , 提取 50 m in 为宜 , 见图 2 。
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. 方法比较 精密称取已干燥的生药粉 0 . 4 9 , 分别用以下提取方法 : ( 1) 加甲醇 20 m l
浸泡 24 h ; ( 2 ) 水洛加热回流提取 3 h ; ( 3) 超声波助溶提取 50 m in 。将提取液置 25 m l量瓶
中定容 , 过滤 , 取续滤液 2 m l , 加 30 % 甲醇稀释至 25 m l , 进样 6 川测定 。 结果上述三种方
法的提取效果基本一致 , 但以超声波法较为简便省时 。
(五 ) 线性关系 取岩白菜素标准溶液 l , 2 , 3 , 4 , 5 m l于 10 m l量瓶中 , 加内标溶液 3
m l
, 加 30 % 甲醇至刻度 , 混匀 , 进样 8 川 , 在选定的色谱条件下分离 , 以岩 白菜素与内标峰
面积之比 ( y) 对样品浓度 ( x) 作图 , 得通过原点的直线 , 其线性范围为 0 . 0 6 2 3 5~ 0 . 3 1 1 8 拼g , 回
归方程 : y 二 2 . 0 2 8 1 x 一 0 . 0 6 1 8 , r = 。 . 9 9 9 2 。
(六 ) 回收率试验 精密称取已测含量的生药样品粉约 。 . 2 9 ,加入岩白菜素约 20 m g , 按
以上超声波法提取 , 测定前加人内标溶液等量 , 进样 4娜 1 , 测定回收率 , 结果见表 1 。
(七 ) 样品分析 精密称取生药粉 0 . 4 9 , 置 25 m l量瓶中 ,加甲醇 2’0 m l , 浸泡 o . s h , 以
超声波提取 50 m in , 冷却 , 加甲醇至刻度 , 迅速过滤 , 取续滤液2 m l , 加 30 % 甲醇稀释至 25
m l
。 于测定前加内标溶液等量 (各 . 5 m l ) , 混匀 , 进样 5 川 , 按选定的色谱条件测定 , 并与薄
药学学报 A c t a p h a r m a c e u t i c “ s in i c a 1 9 8 8 ; 2 3 ( 8 ) 16 0 6~ 6 0 9
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讨 论
一 新落妇和岩曹蒲用乙醇加热回流提取及用超声波法提取 , 杂质较多 , 尚须进一步净
化处理 , 特别是新落妇提取液的杂质较多 。 用 甲醇浸渍提取时间较长 , 采用超声波法提取 ,
其溶出有效物的量高且完全 , 不仅提取时间短而且杂质大为减少 , 过滤后可不经其它净化处
理直接进样 , 简化了操作 , 加快了样品分析速度 。
二 . 在选用 25 ~ 30 % 甲醇为流动相时 , 样品中的岩白菜素分离较好 , 但内标物与杂质
峰呈现部分重叠 , 分离不好 。 为了改善这一状况 , 曾分别加入乙醚 、 乙腊 、 丙酮扩 醋酸以及
磷酸盐缓冲液等 , 结果均不满意 。 但在 甲醇液中加入 1~ 2%乙醚和 2~ 3% 乙睛制 成的 混合
溶剂 , 可提高分离效果而且峰形变窄 , 结果较好 。
三 . 本法操作简便 、 快速 , 检测灵敏 , 适用于新落妇 、 岩葺蒲生药样品 , 亦可用于复方
岩自菜素片剂和冲剂的定量分析 。 关于测定中分离得的杂质峰为何物 , 尚有待进一步探讨 。
致谢 贵州省遵义市制药厂 、 云南省大理州制药厂提供药材样品 ; 贵州省药品脸验所 中药 室林 开中同
志鉴定生药植物学名。
参 考 文 献
1
· 件启寿塾著:哗笋成分化学 :芋一版 1 北京 : 科学出版社 , 1 97 7 : “ ” 4 ·2 . 甲华人民共和因药典 · 1 9 7 7 年版一部 . 北京 : 人民卫生出版社 , 1 9 7 8
3
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4
. 曾纪淡 、 沙世炎 . 矮地茶中岩白菜素的测定 . 中草药通讯 19 7氏 lo :
5
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. 徐礼桑 , 等编著 . 中草药有效成分分析法 . 下册 . 北京: 人民卫生出版 ,
3 4 6
.
科学任嘶社 , 19 8 `峥3 , 8 , 5 7 6
3 89
.
1 98 4
:
3 5 8
,
3 7 3
药学学报 A e飞a P h a r m a e e u t i e a S i n i e a 1988 ; 2 3 ( 8 ) : 60 6、 6 0 9 60 9
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q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s o f b e r g e n i n i n L u o X i n F u 〔A s t云lb e e h云。 e n s i s ( M a x i m . ) F r a n e h
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《 新药评价概论 》 秦伯益主编 。 32 开 , 3 69 千字 , 2 64 页 , 平装 . 估价 : 3 . 90 元 。
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