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新疆紫草中紫草素提取方法研究



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原酸报道[8]。绿原酸具有多种活性,是药品、保健品
原料。根据药材中绿原酸含量高低可基本确定药材
品质和疗效。
用本法测定蒙古山萝卜中的绿原酸含量,其特点
是样品预处理简单,回收率稳定,重复性好,可作为药
材的质量评价方法。
参考文献:
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(收稿日期:2014-05-23)
新疆紫草中紫草素提取方法研究
张继业1,杜 蕊2,刘婷婷1,杨范莉1,童 华3*(1.西安交通大学药学院,西安 710061,2.陕西省眼科研究所,西安市眼
科医院,西安市第一医院,西安 710002;3.西安交通大学第一附属医院,西安 710061)
摘要:目的 采用石油醚、乙醇、氯仿、碱液4种溶剂提取紫草素,选出最优提取方法。方法 紫草质量与提取溶剂体积比为
1∶9,室温下搅拌浸提2次,用高效液相色谱梯度洗脱测定提取物中紫草素的含量,以紫草素提取率对提取方法进行评价。
结果 新疆紫草4种溶剂中紫草素含量高低顺序依次为碱液、乙醇、氯仿、石油醚提取物。结论 碱液提取可提高提取物中紫草
素的含量,并可减少有机溶剂的用量,经济、环保、实用。
关键词:新疆紫草;紫草素;提取方法
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2014.06.006
中图分类号:R282   文献标志码:A   文章编号:1004-2407(2014)06-0566-03
Study on shikonin extraction fromArnebia euchroma
ZHANG Jiye1,DU Rui 2,LIU Tingting1,YANG Fanli 1,TONG Hua3*(1.School of Pharmacy,Xi′an Jiaotong University,Xi′an
710061,China;2.Shaanxi Institute of Ophthalmology,Xi′an Hospital of Ophthalmology,the First Hospital of Xi′an,Xi′an
710002,China;3.the First Affiliated Hospital of Xi′an Jiaotong University,Xi′an 710061,China)
Abstract:Objective To optimize the extraction of shikonin fromArnebia euchroma with solvent extraction in four solvents.Meth-
ods The extractions were carried out in petroleum ether,ethanol,chloroform,and 10g·L-1 NaOH solution with stirring at
25℃,solvent extraction time of 30min,and solid to liquid ratio 1∶9.The extraction process was conducted in duplicate.The
shikonin content in extracts were measured by HPLC with gradient elution.Extraction methods were evaluated by extraction
yield.Results The yield of shikonin extraction differed in four solvents(10g·L-1 NaOH solution>ethanol>chloroform>petro-
leum ether).Conclusion The shikonin extraction in NaOH solution provides higher extraction yield and significantly reduces the
amount of organic solvent.This economic and environmental method is suitable for shikonin extraction fromArnebia enchroma.
Key words:Arnebia euchroma;shikonin;extraction methods
基金项目:陕西省自然科学基金项目(编号:2012JQ4025)
作者简介:张继业,男,讲师
*通信作者:童华,男,主治医师
  新疆紫草(Arnebia euchroma (Royle)Johnst)
是紫草科软紫草属植物,也称新疆软紫草。作为传统
中药,新疆紫草具有多种生物学活性,如抑菌、伤口愈
合、抗病毒、抗炎、抗癌、抗肿瘤等[1-2],在临床上应用
广泛。从紫草中分离提取出以紫草素为代表的萘醌
类成分为其主要活性成分。同时紫草素也是良好的
天然色素,已广泛用于食品和化妆品中。
目前报道的紫草素提取方法有溶剂萃取法、减压
蒸馏法、超声提取法、微波提取法、超临界萃取法
等[3-5]。但受成本和设备限制,可应用于大量生产的
最优提取方法仍是传统的溶剂萃取法。而有研究发
现,采用不同的溶剂提取紫草素会使得紫草提取物中
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紫草素含量差别较大,紫草素含量差异直接导致药理
活性不同[6]。本文以紫草素的提取率为评价指标,选
用4种常用的提取溶剂(石油醚、乙醇、氯仿、碱液)提
取新疆紫草,筛选出最佳的紫草素提取方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 AY120电子分析天平(日本岛津公司);
LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津公司);HWS-5A
恒温水浴锅(上海百典仪器有限公司);GENIUS 16K
台式高速离心机(长沙市鑫奥仪器仪表有限公司)。
1.2 试药 左旋紫草素对照品,购自南京狄尔格医
药科技有限公司;紫草饮片购自同仁堂陕西分公司,
并由西安交通大学药学院牛晓峰教授鉴定为新疆紫
草;石油醚、氯仿、乙醇、氢氧化钠、盐酸、甲酸均为分
析纯;乙腈为色谱纯(天津市科密欧试剂有限公司)。
2 方法与结果
2.1 提取液的制备 取已干燥至恒质量的新疆紫
草,粉碎过筛,精密称取5.0g,分别用45mL石油
醚、氯仿、乙醇、10g·L-1氢氧化钠碱液浸渍,在室温
避光条件下,搅拌30min,过滤,药材残渣重复提取
1次,合并两次滤液,得提取液,避光冷藏保存,待用。
2.2 色谱条件 Waters XTerra○RRP18色谱柱(150mm
×4.6mm,5μm);流动相采用二元体系,A 为含
0.5mL·L-1甲酸水溶液,B为乙腈,梯度洗脱,洗脱
程序为:0min时 A相为95%,30min时B相升至
100%,并维持10min;流速为1.0mL·min-1;检测
波长为276nm;柱温为30℃;进样量为50μL。
2.3 对照品储备液制备 精密称取左旋紫草素对照
品5.0mg,置于25mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至
刻度,摇匀,即得200μg·mL
-1紫草素对照品储备液。
2.4 供试品溶液制备 精密量取1.0mL紫草素提
取液(石油醚提取液、氯仿提取液、乙醇提取液),用乙
醇稀释至15mL,以12 000r·min-1离心10min,取
上清液作为供试品溶液。精密量取碱液提取液
1.0mL,加入1mol·L-1盐酸溶液1.0mL,待沉淀
析出完全,加乙醇稀释至15mL,以12 000r·min-1
离心10min,取上清液作为供试品溶液。
2.5 专属性 取提取物样品按2.2项下色谱条件进
行分析,记录色谱图,见图1,紫草素色谱峰峰形良
好,无杂峰干扰,保留时间为19.63min,该方法具有
良好的专属性。
2.6 标准曲线 精密量取相应体积紫草素对照品储
备液,置于量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,配制质
量浓度为12,10,8,6,4,2和0.2μg·mL
-1对照品溶
液。分别取上述溶液,按2.2项下色谱条件进行分
析。以各对照品质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐
标,绘制标准曲线并进行回归计算,得紫草素标准曲
图1 HPLC图
A.左旋紫草素对照品;B.石油醚提取样品;C.乙醇提取样品;
D.氯仿提取样品;E.碱液提取样品;1.紫草素
Fig.1HPLC chromatograms
A.shikonin reference substance;B.petroleum ether;C.ethanol;
D.chloroform;E.10g·L-1 NaOH solution.;1.shikonin
线方程:Y=75 870.975 2 X+2 564.526 7,相关系数
r=0.999 6。表明紫草素在0.2~12μg·mL
-1范围
内线性良好。
2.7 精密度 精密量取6μg·mL
-1对照品溶液
50μL,按2.2项下色谱条件,连续进样6次,测定峰面
积。结果紫草素RSD为1.82%,表明本法精密度良好。
2.8 稳定性 精密量取1mL紫草素乙醇提取液,
乙醇稀释至10mL作为供试品溶液,将供试品溶液
置于室温(25℃)条件下不避光保存。分别于0,2,4,
6,8,10和12h进样50μL进行分析,紫草素峰面积
RSD为8.51%,表明在室温不避光条件下,测定方法
稳定性不能满足要求。将同一供试品溶液避光冷藏
条件下保存,按上述方法测定,结果紫草素峰面积RSD
为2.93%。证明在避光冷藏下,紫草素的测定结果稳
定性良好,故在测定过程中样品应注意避光和冷藏。
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2.9 含量测定 按2.4项下的方法制备4种提取液
供试品溶液,按2.2项下色谱条件测定峰面积,用标
准曲线计算紫草素的含量后换算成提取率。紫草素
在碱液、氯仿、乙醇和石油醚中的提取率分别为
0.996%±0.07%,0.785%±0.065%,0.982%±
0.061%和0.568%±0.054%(n=3)。
3 讨论
实验结果显示,在3种有机溶剂中紫草素提取率
差别较大(乙醇>氯仿>石油醚),原因在于紫草素在
3种有机溶剂中的溶解度不同。在室温条件下,在该
投料量与溶剂比下,紫草素在乙醇中的溶解度最大,
提取量最大。
4种提取溶剂碱液提取紫草素提取率最大。紫
草中萘醌类成分虽为脂溶性成分,但紫草素及其衍生
物可在碱液中成盐,溶解度增加,利于萘醌类成分的
提取。碱液提取与有机溶剂提取相比,碱液提取时,
提取物中强极性杂质成分较多,而酸沉再经乙醇萃取
后,可去除一些强极性杂质,提取物中杂质含量减少。
有研究表明,紫草素具有光不稳定性,同时由于
萘醌类结构中羟基存在使得紫草素也易被氧化。通
过预实验获知,长时间置于空气中,紫草素的含量会
下降。本实验在避光条件下,选择相对较短的提取时
间(30min)重复2次提取进行分析。
综上所述,碱提酸沉后经乙醇萃取为最适的提取
方法,能够在提高提取物中紫草素含量的同时,降低
提取物中杂质的含量。采用碱液提取能够有效节省
有机溶剂的用量,减少成本,同时降低环境污染。
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(收稿日期:2014-05-20)
桔梗中总黄酮的提取工艺优化
谭玲玲1,王 忠1,胡正海2*(1.青岛农业大学生命科学学院/山东省高校植物生物技术重点实验室,青岛 266109;2.西北
大学生命科学学院,西安 710069)
摘要:目的 优选从桔梗根、茎、叶中提取总黄酮的最佳工艺,并在最佳提取条件下测定桔梗根、茎、叶中总黄酮的含量。
方法 以总黄酮含量为指标,采用正交实验,考察了乙醇体积分数、超声时间和超声次数对总黄酮得率的影响。结果 提取总黄
酮的最佳工艺为A3B3C3,即乙醇体积分数70%,超声时间50min,超声次数3次。在最佳实验条件下,分别测得桔梗根、茎及叶
中总黄酮的含量分别为0.027%,0.039%和0.26%。结论 该工艺简单可行,是提取桔梗中总黄酮的有效途径。
关键词:桔梗;总黄酮;提取工艺;正交实验;含量测定
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2014.06.007
中图分类号:R284.2   文献标志码:A   文章编号:1004-2407(2014)06-0568-03
Optimization of the extraction procedure of total flavonoids fromPlatycodon
grandiflorum (Jacq.)A.DC.
TAN Lingling1,WANG Zhong1,HU Zhenghai 2*(1.Colege of Life Science,Qingdao Agricultural University/Key Lab of Plant
Biotechnology in Universities of Shandong Province,Qingdao 266109,China;2.Colege of Life Science,Northwest University,
Xi′an 710069,China)
Abstract:Objective The research aims to optimize the extraction technology of total flavonoids and to determine the contents of to-
tal flavonoids under the optimal extraction conditions from roots,stems and leaves of Platycodon grandiflorum (Jacq.)A.DC.
Methods In the experiment,total flavonoids were used as an indicator by using the orthogonal test to explore the effects of ethanol
concentration,ultrasonic time and ultrasonic frequency on the yield of total flavonoids.Results The results showed that the opti-
mal extraction conditions were as folows:extraction solvent was ethanol of 70%,ultrasonic time was 50min and ultrasonic fre-
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