全 文 ：云南民族大学学报:自然科学版，2015，24(2):112 － 114 CN 53 － 1192 /N ISSN 1672 － 8513
doi:12． 3969 / j． issn． 1672 － 8513． 2015． 02． 007 http:/ / xb. ynni. edu. cn
收稿日期:2014 － 12 － 02．
基金项目:民族药资源化学国家民委 －教育部重点实验室开放基金(MZY1405)．
作者简介:张虹(1962 －)，女，教授．主要研究方向:生物技术．
通信作者:郭俊明(1962 －)，男，硕士，教授，硕士生导师．主要研究方向:无机非金属及生物化学．
显脉旋覆花根中总黄酮提取方法的研究
张 虹1，李树伟1，李春燕1，袁 寒1，白红丽2，郭俊明2
(1. 红河学院 云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室，云南 蒙自 661100;
2. 云南民族大学 民族药资源化学国家民委 －教育部重点实验室，云南 昆明 650500)
摘要:以显脉旋覆花根为试验材料，用乙醇和甲醇为提取剂，采用浸提法分别对显脉旋覆花根中
总黄酮进行提取，并用紫外分光光度法进行了测定．结果表明:乙醇 70%，甲醇体积分数 50%，浸
提时间均为 24 h时，总黄酮的提取效果较好，乙醇和甲醇提取的总黄酮得率分别为 2. 33%和
1. 84%，乙醇的提取效果优于甲醇，总黄酮测定方法平均回收率为 99. 89 %，相对标准偏差 ＲSD
为 0. 89%，结果可靠．
关键词:显脉旋覆花根;总黄酮;提取
中图分类号:Ｒ284. 2 文献标志码:A 文章编号:1672 － 8513(2015)02 － 0112 － 03
显脉旋覆花(inula nervosa wall)，又称小黑药，云威灵仙，草威灵，黑威灵等，哈尼语为 Ciqnav(迟那)［1，2］．
为菊科多年生草本植物，高 30 ～ 50 cm，根茎短，茎圆柱形，淡红色或红褐色，密生锈色柔毛，产于四川、广西、
贵州、云南，越南、缅甸、泰国等，在主要云南主要分布省红河、玉溪、昆明、丽江等地，生于海拔 1 500 ～ 2 000
m的山坡草丛、灌木丛中．主要以根入药，秋季采收，其性平，味微苦，有滋补的作用，功能为祛风除湿、活络止
痛，健胃消食等［3 － 4］．是一种药食两用的保健食品，显脉旋覆花炖肉是人们青睐的美食
赵丽等［3］研究了显脉旋覆花的化学成分，显脉旋覆花含有 50多种化学成分，主要有百里香酚、异丁酸百里
香酯、戊酸百里香酯等，这些成分具有杀菌、防腐的功能等．目前国内尚未见有显脉旋覆花黄酮类物质的研究的
报道，而黄酮类化合物具有多种生物活性和药理作用，无毒副作用，有显著的的清除人体内清除自由基［5 － 6］，增
强心血管功能，抗氧化，增强免疫力降血糖和血脂、降低心肌耗氧量、软化血管、抗心律不齐、使冠脉和脑血管流
量增加等功能等功能，在防癌和脂肪酶等方面有明显的效果，并且具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用［7 － 12］．
本试验以显脉旋覆花根为试验材料，用不同浓度乙醇、甲醇为总黄酮提取剂，采用浸提法，提取显脉旋覆
花根中的总黄酮，并用紫外分光光度法进行了测定，为显脉旋覆花根的药用研究提供一定依据．
1 材料与方法
1. 1 试验材料
新鲜显脉旋覆花根购于蒙自市草药市场．
1. 2 仪器及主要试剂
紫外分光光度仪(UV －4802S型紫外 －可见分光光度计，上海尤尼柯仪器有限公司)．
试剂:芦丁标准品，氢氧化钠，甲醇、乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠等均为分析纯试剂．
1. 3 试验方法
将新鲜显脉旋覆花根洗净，晒干后，剪成小段，置于高速粉碎机中粉碎，过 0. 441 nm筛，备用．
1. 3. 1 配制标准品溶液及标准测定
准确称取干燥的芦丁标准品 20 mg，置 100 mL容量瓶中，加入适量 60 ℃的 70%乙醇或甲醇使其溶解，冷
却后分别用 70%乙醇或甲醇稀释至刻度，摇匀．标准溶液质量浓度为 0. 20 mg /mL．精确吸取标准溶液 0，1，
2，4，6，8，10 mL分置于 25 mL容量瓶中;加 5%亚硝酸钠溶液 0. 3 mL，混匀，放置 6 min;再加 10%硝酸铝溶液
0. 3 mL，混匀，放置 6 min;加 4%氢氧化钠溶液 4. 0 mL，加 30%乙醇或甲醇分别定容至刻度，摇匀，放置 16
min．以试剂空白为参比，在 510 nm波长处测定溶液的吸光度［13］．
以吸光度 A为纵坐标，质量浓度 C为横坐标，绘制标准曲线，分别得到线性回归方程:甲醇:A = 10. 354C
－ 0. 005 9，Ｒ2 = 0. 999 1．乙醇:A = 9. 892 9C － 0. 000 9，Ｒ2 = 0. 999 4．
1. 3. 2 样品提取液的制备
分别称取 4 g 显脉旋覆花根干粉置于 100 mL 带塞三角瓶中，分别加入 50 mL 30%、50%、70%、80%、
95%的乙醇或甲醇溶液，在室温下，浸泡 12、24、36 h后过滤，滤液用相应体积分数的乙醇或甲醇定溶到 100
mL的容量瓶中，为样品提取液．
1. 3. 3 显脉旋覆花根总黄酮含量的测定
准确吸取 2 mL提取液，置于 25 mL容量瓶中，按 1. 3. 1 节的方法操作，在 510 nm下平行测定 3 次．根据
回归方程，计算总黄酮的浓度．总黄酮得率% =［提取液浓度 ×稀释倍数 ×体积 /样品干重 × 1000］× 100% ．
1. 3. 4 稳定性试验
准确吸取 2. 0 mL 70%乙醇的提取液于 25 mL容量瓶中，按 1. 3. 1 节方法操作，放置 1 h，每隔 10 min 测
定一次吸光度．
1. 3. 5 加样回收率试验
取 70%乙醇提取液 2. 0 mL置于 25 mL容量瓶中，加入芦丁标准 1. 0 mg，余下部分按 1. 3. 1 节方法操作，
平行测定 5 次，计算加标回收率．
2 结果与分析
表 1 乙醇提取显脉旋覆花根总黄酮得率 %
浸泡
时间 /h
乙醇体积分数
30% 50% 70% 80%
12 1. 21 1. 47 2. 22 1. 95
24 1. 54 2. 08 2. 33 2. 32
36 1. 13 1. 75 1. 82 1. 76
表 2 甲醇提取显脉旋覆花根总黄酮得率 %
浸泡
时间 /h
乙醇体积分数
30% 50% 70% 80%
12 1. 01 1. 80 1. 50 1. 50
24 1. 49 1. 84 1. 55 1. 71
36 1. 22 1. 79 1. 50 1. 61
由表 1 ～ 2 可知，显脉旋覆花根以乙醇和甲醇为
总黄酮提取剂时，在相同体积分数下，均表现出在浸
提时间 24 h时总黄酮得率最高，乙醇在 36 h最低，甲
醇在 12 h时最低．
在相同浸提时间内，随体积分数的增加总黄酮得
率也不同，乙醇在 70% 时的总黄酮得率最高，与
80%时总黄酮得率相比最高相差 0. 27%，以 50%时
的总黄酮得率相比最高相差 0. 75%，而甲醇在 50%
时的总黄酮得率最高，甲醇 80%次之，乙醇和甲醇均
以 30%时的总黄酮得率最低．
以乙醇和甲醇为显脉旋覆花根总黄酮提取剂时，
在相同体积分数下，乙醇的提取效果比甲醇好，乙醇
总黄酮的最高得率与甲醇总黄酮的最高得率相比相
差 0. 49% ．
2. 1 稳定性试验
结果表明，1 h内显脉旋覆花根总黄酮提取液的稳定性良好，ＲSD为 0. 90% ．
2. 2 加样回收率试验
显脉旋覆花根中总黄酮提取方法的加样平均回收率为 99. 89%，相对标准偏差 ＲSD 为 0. 89%，表明测
定结果准确可靠，符合测定要求．
3 结论与讨论
本试验采用 30%、50%、70%、80%乙醇和甲醇为显脉旋覆花根中总黄铜的提取剂，乙醇体积分数 70%
和甲醇体积分数 50%时，浸提时间为 24 h 时的总黄酮得率最高分别为 2. 33%和 1. 84%，乙醇体积分数为
311第 2 期 张 虹，李树伟，李春燕，等:显脉旋覆花根中总黄酮提取方法的研究
30%时，乙醇浸提时间为 36h时的总黄酮得率最低为 1. 13% . 甲醇体积分数均为 30%时，浸提时间为 12 h
总黄酮得率最低为 1. 01%. 乙醇的提取效果好于甲醇．
黄酮类化合物广泛存在于植物各个部分，一般是以甙的形式存在，高体积分数的乙醇适宜于提取黄酮甙
元，60%左右体积分数的乙醇适宜于提取黄酮甙类［14 － 16］．而本试验在甲醇 50%和乙醇 70%时显脉旋覆花根
的总黄酮得率最高，说明显脉旋覆花根中黄酮类物质可能与黄酮甙类物质有关．
参考文献:
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Study on the extraction method of the total flavonoids
in the roots of Inula nervosa
ZHANG Hong1，LI Shu-wei1，LI Chun-yan，YUAN Han，BAI Hong-li2，GUO Jun-ming2
(1． Key Laboratory of Crops with High － quality and Efficient Cultivation and Security Control of Yunnan Higher Education Institutions，
Honghe University，Mengzi 661100，China;2． Key Laboratory of Chemistry in Ethnic Medicinal Ｒesources，State Ethnic Affairs
Commission and Ministry of Education of China，Yunnan Minzu University，Kunming 650031，China)
Abstract:In this test，the roots of Inula nervosa were used as the test materials，and their total flavonoids were ex-
tracted by alcohol － and methanol － based cold － maceration． The content of the extracted total flavonoids was de-
termined with UV spectrophotometer． The results were the following:while alcohol was 70% and methanol 50%，
and the extracting time was 24 h，the extraction of the total flavonoids had a good effect． The extraction rate of alco-
hol and methanol was 2． 33% and 1． 84% respectively． Alcohol had a better effect than methanol． The average re-
covery of this method was 99． 89%，and the relative standard deviation(ＲSD)of the method was 0． 89% ． Its re-
sults are reliable．
Key words:roots of Inula nervosa;total flavonoids;extraction
(责任编辑 庄红林)
411 云南民族大学学报(自然科学版) 第 24 卷