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收稿日期:2003-04-30
青风藤及青藤碱对吗啡依赖小鼠位置偏爱效应及 cAMP水平的影响
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30271610)
作者简介:莫志贤(1958-),女(汉族),广西平南县人 ,博士 ,副教授 ,硕士生导师。 E-mail:cherrymo@fimmu.edu.cn
莫志贤1 ,梁荣能2 ,王彩云1(1.第一军医大学中医系 ,广东　广州 510515;2.香港浸会大学中医药学院 ,香港九龙塘)
摘要:目的　观察中药青风藤及其有效成分青藤碱对吗啡诱导的小鼠位置偏爱效应的影响及其与中枢 cAMP 水平的关系 。方
法　连续给予吗啡(9mg/kg , 1次/ d , sc)5d , 引起小鼠产生显著的条件性位置偏爱效应。用两种方式给予青风藤醇提液(5 ,
10g/ kg , ig)和青藤碱(60mg/ kg , ig), 即在训练阶段每天 sc吗啡前 45min 给予和在 d 6 测定位置偏爱前 45min仅给药一次 。大
脑皮层 cAMP含量采用放射免疫法测定。结果　吗啡对照组小鼠在伴药箱中停留的时间明显延长 , 小鼠脑组织的 cAMP水平
亦显著升高。青风藤或青藤碱连续用药可显著抑制吗啡引起的小鼠位置偏爱的形成 ,对小鼠已形成的条件性位置偏爱效应也
具有一定的抑制作用。并能降低脑内 cAMP 含量。结论　青风藤及青藤碱能消除吗啡产生的条件性位置偏爱 , 其作用机制与
降低中枢 cAMP水平有关。
关键词:青风藤;青藤碱;吗啡;条件性位置偏爱;cAMP;精神依赖
中图分类号:R285.5;R749.611　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-7693(2004)02-0087-04
Effects of Caulis Sinomenii and sinomenine on morphine-induced place preference and cyclic AMP level in mice
MO Zhi-xian1 , LIANG Rong-neng2 ,WANG Cai-yun1(1.Department of Traditional Chinese Medicine , First Military Medical University ,
Guangzhou 510515 , China;2.School of Chinese Medicine , Hong Kong Baptist University , Kowloon Tong , Hong Kong , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To explore the effects of Caulis Sinomenii and sinomenine on the conditioned place preference induced by mor-
phine in mice and its relation to cAMP level of the brain.METHOD　Morphine was injected(9mg/kg , one time/ day , sc)to mice for 5
days.The strong place preference was observed in mice.Mice were pretreated 45 min before each injection of morphine during 5 d training
phase and treated only once 45 min before the testing phase at d 6 with Caulis Sinomenii(5 , 10g/kg , ig)and sinomenine(60mg/kg , ig), re-
spectively.Cyclic AMP content in the brain cortex of mice was measured by RIA.RESULTS　The time of staying in morphine-paired com-
partment and the cAMP level in brain of mice in morphine group were significantly increased.After treatment with Caulis Sinomenii and
sinomenine, the time of staying in morphine-paired compartment and the cAMP level in mice were significantly reduced.CONCLUSION　
Caulis Sinomenii and sinomenine could suppress the acquisition and expression of place preference induced by morphine.Their mechanism may
be related to decrease of cAMP level in the brain.
KEY WORDS:Caulis Sinomenii;sinomenine;morphine;conditioned place preference;cyclic AMP;psychic dependence
　　药物依赖包括生理性依赖和精神性依赖两个方面 ,后者 是导致复吸的主要因素。目前临床使用的戒毒药物 , 主要针
·87·中国现代应用药学杂志 2004年 4月第 21卷第 2期　　　　　　　　　　　　　　　Chin JMAP ,2004 Apri l ,Vol.21 No.2
DOI :10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2004.02.002
对性治疗生理性依赖 ,帮助成瘾者解除急性戒断症状。而用
于治疗精神依赖的药物甚少 ,且疗效不佳。从中药中寻找防
治毒品精神依赖的有效方剂或有效成分 , 是当前中药戒毒
领域的迫切任务。我们在多年中药戒毒的临床和实验研究
中发现 ,中药青风藤及其生物碱类活性成分对阿片类依赖的
戒断症状及焦虑状态具有较好的疗效[ 1, 2] 。本实验通过小鼠
条件性位置偏爱试验 ,观察青风藤及青藤碱(sinomenine)对吗
啡精神依赖的影响 ,并通过脑内 cAMP水平检测 , 探讨药物的
作用机制。为药物治疗毒品的精神依赖提供药理学依据 , 并
为新型抗复吸中药的筛选和戒毒机制的探讨提供科学的依
据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　动物:昆明种小鼠 , ♂, 体重(20.6±3.5)g , 由第一军
医大学实验动物中心提供 , 合格证号:粤检证字第 2001A058
号。
1.1.2　药物:青风藤 , 广东省药材公司提供 , 经本校中药鉴
定室鉴定为防己科植物青藤[ Sinomenium acutum (Thunb)Re-
hd.et Wils] 的干燥藤茎。青风藤醇提液的制备方法是:取
500g青风藤用 80%乙醇回流提取 2 h , 共提取 2 次。合并两
次药液。回收乙醇后过滤 ,浓缩至 1g(生药)/mL ,置 4℃冰箱
备用。使用时用蒸馏水配成所需浓度。盐酸青藤碱 , 广州白
云山制药总厂提供 , 批号:000822 , 用蒸馏水溶解后配制成所
需浓度。盐酸吗啡(粉剂), 解放军总后勤部药品供应站提
供 ,用蒸馏水配制成所需浓度。 3H-cAMP放射免疫测定试剂
盒 ,北京中国原子能科学研究院提供。
1.1.3　器材:条件性位置偏爱箱仿文献制作[ 3] ,箱体由黑白
两个的正方体(15cm×15cm×15cm)组成 , 中间有一可活动
的隔板 , 将隔板抽起后 , 小鼠可在两个箱体之间自由活动。
LS6500 闪烁计数仪 ,美国 Beckman公司产品。
1.2　方法
1.2.1　动物预处理:将位置偏爱箱箱体的隔板抽出 , 把小鼠
逐只放入箱体中间 , 观察 15 min , 以小鼠的头部为准记录小
鼠在各箱体停留时间。观察过程在隔音条件下进行。剔除
对箱体某一侧有显著偏爱的小鼠 , 以排除非条件性位置偏
爱对实验结果的影响。结果显示 , 几乎所有小鼠偏爱黑箱。
由此 ,将白箱作为非偏爱侧。
1.2.2　吗啡诱导的位置偏爱效应的训练及测定:将达到实
验条件的小鼠随机分为正常对照组 、吗啡对照组(9mg/kg)、
青风藤醇提液 5g(生药)/ kg 加吗啡(9mg/ kg)组 、青风藤醇提
液10g(生药)/ kg 加吗啡(9mg/kg)组和盐酸青藤碱 60mg/ kg
加吗啡(9mg/kg)组 , 每组10 只动物。除盐水对照组两次均 sc
生理盐水外 ,其余各组小鼠每天分别 sc盐酸吗啡和生理盐水
各一次 ,两次给药间隔 8h(8∶00 , 16∶00)。小鼠注射盐酸吗啡
后置于非偏爱侧白色箱体 ,注射生理盐水后置于偏爱侧黑色
箱体 。小鼠在箱内逗留时间为 40min。共训练 5d , 小鼠即形
成条件性位置偏爱。在最后一次注射吗啡 24 h 后进行位置
偏爱检测。将偏爱箱隔板抽出 , 把小鼠逐只放入箱体中间 ,
观察 15min ,以小鼠的头部为准记录小鼠在各箱体的停留时
间。
1.2.3　受试药物的给予:分如下两种方法给药:(A)为观察
药物对吗啡引起的位置偏爱效应形成的影响 , 给药组小鼠在
每次注射吗啡前45min分别 ig青风藤醇提液和盐酸青藤碱 ,
正常对照组及吗啡对照组 ig 相同容积的生理盐水。连续给
药 5d。(B)为观察药物对已形成的小鼠位置偏爱的影响 , 在
吗啡诱导位置偏爱的 5d 内均不给药 , 仅在 d6 测试前 45min
给药一次(ig)。
1.2.4　小鼠大脑皮层 cAMP 的提取及含量测定:在进行位置
偏爱时间测定完成后 ,将小鼠断头处死 , 迅速取出脑组织 , 称
取同一部位大脑皮层 , 加入预冷的 6%三氯醋酸 , 冰浴中匀
浆 ,于 4℃ 3000 r/ min 离心 15min。上清用 5 倍体积的水饱和
乙醚洗提 4 次 , 水相在 70 ～ 75℃水浴上蒸干后放入冰箱备
用。采用竞争性蛋白结合分析法测定脑组织样本中的 cAMP
含量。实验方法按试剂盒说明书方法进行。
1.2.5　统计学处理:实验数据以( x ±s)表示 , 应用 SPSS
10.0 统计软件进行单因素设计的方差分析。
2　结果
2.1　青风藤及青藤碱对吗啡引起的位置偏爱形成及大脑
cAMP水平的影响
吗啡对照组与盐水对照组比较 , 小鼠在白色箱体中停留
时间显著延长(P < 0.01), 显示小鼠产生了明显的位置偏
爱。同时 ,小鼠大脑皮层 cAMP 水平也较盐水对照组明显升
高。青风藤醇提液 5 , 10g/kg +吗啡的两个剂量组小鼠在伴
药箱中滞留时间与给药前相比 ,无显著性差异(P>0.05);与
吗啡对照组比较 ,则明显缩短((P< 0.01)。青藤碱 60mg/ kg
+吗啡组与吗啡对照组相比 , 差异非常显著((P < 0.01)。
青风藤醇提液 10g/kg +吗啡组和青藤碱 60mg/ kg +吗啡组
小鼠大脑皮层 cAMP 含量明显下降 , 与吗啡对照组比有明显
差异 ,见表 1。
表 1　青风藤及青藤碱对小鼠位置偏爱形成和大脑皮层 cAMP含量的影响(n =10)
Tab 1　Effect of Caulis Sinomenii and sinomenine on acquisition of place preference and cAMP lever of the brain in mice(n=10)
组　　别 小鼠在伴药箱(白箱)侧的逗留时间/ s给药前 给药后
cAMP 含量
(pmol/ g 脑组织)
盐水对照组 303.5±83.2 308.8±89.9 0.736±0.195
吗啡对照组 312.4±83.3 460.3±35.32) 1.572±0.4412)
青风藤 5g/ kg +吗啡 316.9±100.7 359.7±72.94) 1.236±0.3882)
青风藤 10g/ kg +吗啡 305.6±80.1 323.6±139.74) 1.046±0.3171 ,4)
青藤碱 60mg/ kg +吗啡 294.5±77.4 344.0±94.94) 1.119±0.3632 ,3)
·88· Chin JMAP , 2004 April ,Vol.21 No.2　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2004年 4月第 21卷第 2期
注:与盐水对照组比较:1)P< 0.05 , 2)P< 0.01 ,与吗啡对照组比较:3)P< 0.05 , 4)P< 0.01
Note:1)P< 0.05 , 2)P< 0.01, vs saline control group;3)P< 0.05 , 4)P< 0.01, vs morphine control group
2.2　青风藤及青藤碱对吗啡引起的位置偏爱效应表达的影
响
在吗啡诱导小鼠位置偏爱形成后用药的结果表明 ,青风
藤醇提液 10g/kg 组小鼠在伴药箱中滞留时间与吗啡对照组
比较 ,明显缩短(P<0.01)。青风藤醇提液 5mg/ kg组及青藤
碱60mg/ kg组与吗啡对照组相比 , 无显著差别(P >0.05)。
三个给药组给药前后对比 ,亦无显著性差异(P>0.05)。 青
风藤醇提液 10g/kg +吗啡组小鼠大脑皮层 cAMP 含量明显
下降 ,与吗啡对照组比有明显差异。其它两个给药组脑组织
中 cAMP含量有所降低 , 但与吗啡对照组比 , 差异不显著(P
>0.05),见表 2。
表 2　青风藤及青藤碱对小鼠位置偏爱效应表达和大脑皮层 cAMP含量的的影响(n =10)
Tab 2　Effect of Caulis Sinomenii and sinomenine on expression of place preference and cAMP lever of the brain in mice(n=10)
组　　别 小鼠在伴药箱(白箱)侧的逗留时间/ s给药前 给药后
cAMP 含量
(pmol/ g 脑组织)
盐水对照组 303.5±83.2 308.8±89.9 0.736±0.195
吗啡对照组 312.4±83.3 460.3±35.32) 1.572±0.4412)
青风藤 5g/ kg +吗啡 324.5±93.4 385.3±97.9 1.395±0.3472)
青风藤 10g/ kg +吗啡 319.6±101.0 343.4±86.24) 1.161±0.4042 ,3)
青藤碱 60mg/ kg +吗啡 330.1±86.2 391.5±90.3 1.425±0.3762)
注:与盐水对照组比较:1)P< 0.05 , 2)P< 0.01 ,与吗啡对照组比较:3)P< 0.05 , 4)P< 0.01
Note:1)P< 0.05 , 2)P< 0.01, vs saline control group;3)P< 0.05 , 4)P< 0.01, vs morphine control group
3　讨论
条件性位置偏爱试验是20世纪 80年代发展起来的一项
检测药物奖赏特性的行为药理学方法 , 作为评价药物精神依
赖性潜力的简单有效方法而被广泛采用[ 4] 。本实验记录吗
啡诱导的位置偏爱小鼠在伴药箱的停留时间可较好地反应
小鼠的精神依赖情况。结果表明 ,青风藤及其有效成分青藤
碱均能明显抑制吗啡诱导的条件性位置偏爱的形成 , 对已形
成的位置偏爱在高剂量时亦有一定程度的拮抗作用。
中药青风藤的主要成分是青藤碱。我们的结果表明 , 青
藤碱对小鼠条件性位置偏爱的影响与青风藤相似 , 均表现明
显的抑制吗啡诱导位置偏爱效应的作用。青藤碱可能是青
风藤防治阿片类依赖的天然有效成分。 青藤碱的化学名为
7 , 8-didehydro-4-hydroxy-3 , 7-dimethoxy -17-methyl-(9α, 13α, 14α)
-morphinan-6-one。从化学结构上看 , 青藤碱由氢菲核和乙胺
桥组成 , 母核为吗啡烷 , 结构类似吗啡 , 但本身并无成瘾
性[ 5] 。我们以前的研究已发现 ,青风藤及青藤碱能够抑制豚
鼠回肠的戒断性收缩 , 并对吗啡依赖大 、小鼠的戒断症状有
抑制作用[ 2 , 6 , 7] 。从本实验结果看 , 青风藤醇提取液的作用较
青藤碱明显 ,表明青风藤中可能还有其它成分在起作用或协
同作用 ,但青风藤中其它有效成分的作用尚有待进一步分
析。
cAMP作为细胞第二信号的信使在阿片类依赖的形成和
维持中起着重要作用[ 5] 。腺苷酸环化酶(AC)和 cAMP 途径
的异常增强与阿片类戒断反应和精神依赖的维持有着密切
的联系[ 6] 。阿片类药物依赖的形成过程伴随有细胞内 AC-
cAMP信号转导过程的变化 , 吗啡长时间作用可使其脑内
cAMP水平含量明显升高[ 7] 。因此认为 AC-cAMP 的改变可能
是产生吗啡依赖的生化基础之一。本研究发现 , 连续给予吗
啡 5d , 小鼠在产生条件性位置偏爱的同时 ,大脑皮层的 cAMP
含量也明显升高。青风藤提取液及青藤碱连续应用或单次
用药均可使小鼠脑内 cAMP 含量明显下降。青风藤及青藤碱
抑制小鼠对吗啡诱导的条件性位置偏爱的行为与皮层组织
cAMP水平变化基本一致 , 提示对脑内 cAMP的抑制可能是青
风藤及青藤碱消除吗啡的条件性位置偏爱的机制之一。
本次实验结果表明青风藤及其有效成分对吗啡所致的
精神依赖具有拮抗作用 ,为青风藤及青藤碱用于干预阿片类
药物依赖的觅药行为提供了研究线索 , 也为该药的临床应用
提供理论依据。但药物的作用机制仍有待深入研究。
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收稿日期:2003-04-25
益母草治疗痛经机制探索
作者简介:金若敏 ,女 , 53岁 , 1975年毕业于原上海第一医学院药学专业 ,现为上海中医药大学中药新药药理毒理研究中心主任 ,教授 , 博
士生导师。主要从事中药新药药理毒理工作。
金若敏 ,陈兆善 ,陈长勋 ,张海桂(上海中医药大学 ,上海 201203)
摘要:目的　探讨益母草治疗痛经的药理作用及机制。方法　经十二指肠给予益母草水提液 , 观察豚鼠在体子宫收缩频率及
幅度的变化。分别采用由缩宫素及 15甲基-PGF2α所致的子宫痉挛模型 ,观察小鼠口服益母草提取液后的作用。采用二甲苯致
小鼠耳廓肿胀及实验性大鼠子宫炎症模型 ,分别观察小鼠 、大鼠口服益母草提取液的抗炎作用。用放射免疫法及化学分析法
分别检测大鼠口服益母草水提液后血液雌 、孕激素及子宫平滑肌PGF2α及 PGE2含量的变化。结果　益母草水提液能增强未孕
正常豚鼠在体子宫的收缩。益母草能在一定程度上缓解由 15M-PGF2α及缩宫素所致的小鼠子宫痉挛 , 能减轻二甲苯所致的小
鼠耳廓肿胀的程度 , 改善实验性子宫炎症状况 , 且能降低子宫炎症时其平滑肌上 PGE2 的含量 , 亦能降低大鼠子宫平滑肌上
PGF2α的含量。益母草水提液能升高血液孕激素的水平 ,而对雌激素却无明显影响。 结论　益母草对子宫具有比较广泛的药
理作用 ,可能通过抑制痉挛子宫的活动 、抗炎 、降低子宫平滑肌上 PGF2α, PGE2 的含量及升高体内孕激素水平等多种途径缓解
痛经症状。
关键词:益母草;子宫;痛经;PGF2α;PGE2
中图分类号:R285.5;R711.51　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-7693(2004)02-0090-04
Effects of motherwort on dysmenorrhea
JIN Ruo-min ,CHEN Zhao-shan ,CHEN Chang-xun ,ZHANG Hai-gui(Shanghai University of Traditional Chinese Medicine , Shang-
hai 201203 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To investigate the pharmacological actions and mechanisms of motherwort on dysmenorrhea.METHOD　In vi-
vo , the effects of motherwort on uterine constriction were observed after giving the decoction via duodenum in guinea pigs.Effect on alleviating
pain was measured in mice treated with i.p.administration of oxytocin and 15M-PGF2αrespectively.Anti-inflammatory action was examined
with the models of auricular swelling in mice induced by dimethyl benzene , and of the experimental inflammatory uteri in rats.The influence on
the concentrations of PGF2α, PGE2 in the uterine smooth muscle was measured.The levels of serum estradiol , progesterone in rats were deter-
mined by radioimmunoassay.RESULTS　The data showed that the motherwort decoction increased the constrictive force of normal uterus in
guinea pigs in vivo.It obviously reduced the twisting reaction of mice induced by oxytocin or 15M-PGF2α.The decoction could alleviate the au-
ricular edema in mice and inflammation of uterus in rats.It reduced PGF2αand PGE2 concentrations in uterine smooth muscle of rats.The moth-
erwort decoction increased serum progesterone level in rats , but had no significant effect on estradiol level.CONCLUSION　Motherwort has
intensive pharmacological effects on uteri.It had the effects on relaxing uterus spasm , anti-inflammation , reducing PGF2αand PGE2 concentra-
tions in uterus smooth muscle , increasing the serum progesterone level.These effects may play important roles in treating dysmenorrhea.
KEY WORDS:motherwort;uterus;dysmenorrhea;PGF2α;PGE2
　　益母草(Leonurus artemisia)为中医妇科要药 ,用于月经不
调 ,痛经 , 经闭 , 恶露不尽等。益母草治疗痛经具有确切的临
床疗效。但至今 ,益母草对子宫的药理研究仅限于发现有增
加子宫的收缩频率及幅度的作用[ 1] , 益母草的兴奋子宫作用
较难用来阐明其治疗痛经的机制。故本课题旨在通过益母
草水提液对子宫药理作用的研究 ,探明这一传统良药用于治
疗痛经的机制。为临床上更好地使用该药提供一定的实验
依据。
1　实验材料
1.1　受试药
益母草由上海中医药大学药用植物教研室周秀佳教授
鉴定为 Leonurus artemisia , 制备成水提液(以下简称 YMC), 浓
·90· Chin JMAP , 2004 April ,Vol.21 No.2　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2004年 4月第 21卷第 2期