全 文 ：d ib le fu n g i2010（4）
新疆橙黄疣柄牛肝菌分离培养研究
贺亚玲 1 刘红玲 2 陆 爽 1 李 邦 1 张 霞 1 王绍明 1*
（1 石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832003；2 石河子大学师范学院，石河子 832003）
摘 要 研究以橙黄疣柄牛肝菌的子实体作为分离材料，采用
组织分离方法，在不同配方的培养基上培养，筛选出适合橙黄疣
柄牛肝菌菌丝生长的基础培养基， 其中菌盖和菌柄两者交接处
的分离成功率达 60%以上。 以菌丝生长速度、生长状况为参照
标准，对橙黄疣柄牛肝菌的生物学特性进行研究，确定其最适生
长温度、pH 值、葡萄糖含量以及氮源。 结果表明，橙黄疣柄牛肝
菌为中温型菌根真菌，在 25℃下长势良好，最佳 pH 值为 6，最
佳葡萄糖含量为 0.5%，最佳氮源为蛋白胨。
关键词 橙黄疣柄牛肝菌 分离培养 培养条件
文章编号 1000-8357（2010）04-0017-03
收稿日期：2010-01-18 一稿；2010-02-05 修改稿。
基金项目： 国家重大基础研究发展计划课题（2009CB825101）
资助。
* 通讯作者： e-mail:westwild@vip.sina.com
橙黄疣柄牛肝菌 [Leccinum aurantiacum （Bull.） Gray]，是
一种高等担子菌，隶属于真菌门（Eumycota）担子菌亚门（Ba-
sidiomycotina）、层菌纲（Hymenomycetes）、伞菌目（Agaricases）、
牛肝菌科（Boletaceae）、疣柄牛肝菌属（Leccinum Gray），一般
与乔松桦、山杨等树木形成外生菌根 [1]，在我国主要分布于河
北、陕西、四川、黑龙江、吉林、青海、新疆、辽宁、云南、西藏等
地，在新疆主要分布于额尔齐斯河两岸、天山、阿勒泰山等地，
可食用，且味道鲜美，富含蛋白质和脂肪以及人体所需的多种
氨基酸、维生素以及微量元素，具有极强的保健作用。 目前还
不能人工栽培。国内外对橙黄疣柄牛肝菌研究的报道较少，在
新疆这种干旱、半干旱、绿洲与沙漠并存的特殊地理环境下，
对橙黄疣柄牛肝菌的研究及开发工作不仅具有潜在的经济效
益，而且具有一定的生态意义。研究借鉴前人对其它牛肝菌分
离培养的方法， 筛选出适合新疆橙黄疣柄牛肝菌菌丝生长的
基础培养基， 并通过改变菌丝培养条件和培养基营养成分对
该菌的生物学特性进行初步研究， 为进一步开发利用以及人
工栽培这一珍贵的真菌资源提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 材 料
1.1.1 采样地点 橙黄疣柄牛肝菌子实体于 2008 年 9 月 11
日采自新疆阿勒泰地区北屯市郊的额尔齐斯河沿岸， 北纬
47°21′7.5″，东经 87°52′52.6″。 该地平均海拔 504 m，气候特点
是冬季严寒，春旱多风，冬长夏短，年平均气温 3.6~3.9℃，年
降水量 87 mm~l88.6 mm，蒸发量为 1 900 mm~2 300 mm[2]。 共
生植物为银白杨（Populus alba L.）。
1.1.2 培养基 ①MMN 培养基 [3]（Modified Melin-Norkrans
Medium）。②MM 培养基[4]（Modified Moser Medium）。③改良的
PDA 培养基 [5]。 ④PDA 和胡萝卜综合培养基 ：马铃薯鲜重
200 g，胡萝卜 100 g，葡萄糖 10 g，酵母精（浸）粉 6 g，KH2PO4
0.6 g，MgSO4·7H2O 0.5 g， 琼脂 15 g， 蒸馏水 1 000 mL，pH 自
然。 ⑤菌根菌培养基[6]。
1.1.3 主要药品及仪器 琼脂粉购自新疆沃尔森生物技术有
限公司，其它各种药品均为国产分析纯。 主要仪器为 LDZX-
4OBI 型立式自动电热压力蒸汽灭菌器、HWS 恒温恒湿培养
箱、SW-CJ-ICU 双人单面净化工作台。
1.2 试验方法
1.2.1 组织分离 取当日或采集后 4 d 以内的新鲜幼嫩、健
康无虫害的橙黄疣柄牛肝菌子实体，用自来水冲洗表面泥土，
经 75%乙醇表面消毒 30 s，再用无菌水冲洗，无菌滤纸吸干，
置于无菌培养皿中， 用经高温灭菌的脱脂棉放入 75%乙醇，
擦洗手指，然后从基部沿菌柄处掰开菌体，再用已经酒精灯火
焰上灭菌处理的解剖刀，在掰开的子实体内部切取 5 mm～8 mm
大小的菌盖、菌柄以及两者交接处不同部位的菌块，用无菌镊
子或解剖针迅速将其放入供试 5 种斜面培养基上。 各分离 25
支斜面培养基试管，封好，置于暗室内培养，待菌种萌发后挑
取目的菌丝进行转接培养，经 3 次纯化后即可获得纯菌种。
1.2.2 基础培养基筛选试验 取一定量长势良好的纯菌种接
种于 5 种培养基平板上，置于 25℃的暗室中根据菌丝生长情
况培养 30 d，每隔 2 d 沿垂直两个方向测一次菌落直径，取其
平均值，以菌落直径为指标，筛选最适合橙黄疣柄牛肝菌菌丝
生长的基础培养基。 每个处理 5 个重复。
1.2.3 温度试验 待平板基础培养基中菌落直径长到 5~
6 cm 时，在菌落尖端菌丝生长旺盛的区域用灭过菌的打孔器
打出内径 0.8 cm 的菌块，接种到基础培养基平板中，分别置
于 22、25、28、31℃恒温条件下培养 20 d，每隔 2 d 测量菌落直
径，测量方法同上，计算菌丝生长速度，以菌丝密度、菌落边缘
整齐度、菌丝长势、菌丝颜色作为菌丝生长状况的主要评价指
标。 每个处理 5 个重复，
1.2.4 pH 值试验 采用 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 将基础培养
基的初始 pH 值调节为 5、6、7、8， 接种后置于 25℃下培养
20 d，菌丝测量评价方法同 1.2.3。 每个处理 5 个重复。
1.2.5 葡萄糖含量试验 由于外生菌根菌缺乏专一性降解
酶，不能分解和利用木质素及纤维素，但是对于单糖尤其是葡
萄糖有较好的利用能力 [7]，所以研究中只考虑改变葡萄糖的含
量， 培养基中加入葡萄糖的含量分别为 0.2%，0.5%，0.8%，
1.1%，接种后的平板置于 25℃下培养 20 d，菌丝测量评价方
法同 1.2.3。 每个处理 5 个重复。
1.2.6 氮源试验 以基础培养基中的蛋白胨作为对照， 分别
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注：+ + +，长势强； ++，长势较强； +，长势弱；-，长势极弱，以下同。
用牛肉膏、磷酸氢二氨、酵母浸粉代替其氮源，接种好的平板
置于 25℃下培养 20 d，菌丝测量评价方法同 1.2.3。 每个处理
5 个重复。
2 结果与分析
2.1 橙黄疣柄牛肝菌分离的成活情况 从表 1 可以看出：5
种培养基中，菌盖、菌柄及两者交接处都能够分离成功，3d 左
右萌发出洁白的绒毛状菌丝。培养基⑤效果最好，两者交接处
分离成功率达 60%以上；培养基④上菌丝萌发率最低，菌盖
分离成功率仅有 10%；培养基①和②上菌丝随着培养时间的
延长，变成黄色；培养基③和④上菌丝洁白，但是培养基⑤上
菌落直径比培养基③上的大。
2.2 橙黄疣柄牛肝菌在五种培养基上的菌落直径 从图 1
可以看出：5 种培养基上菌丝均能生长， 但生长速度有差异
性，培养基①及②上菌丝生长速度基本一致。培养基③较培养
基①和②上菌丝生长速度快，培养基④上菌丝生长速度最慢，
且菌落呈黄色。培养基⑤最适合菌丝生长，30 d 菌落直径长至
58 mm，菌丝洁白。
2.3 橙黄疣柄牛肝菌菌丝在不同温度条件下生长状况 从
表 2 可以看出：橙黄疣柄牛肝菌属于典型的中温型菌根真菌，
在 25℃长势最好，菌丝洁白，菌落完整，生长速度较快。 虽然
在高温下菌丝生长速度更快，但是菌丝稀疏且颜色变黄；同时
在低温下菌丝虽然也洁白，但是生长速度相对较慢。
2.4 橙黄疣柄牛肝菌菌丝在不同 pH 条件下生长状况 从
表 3 可以看出： 橙黄疣柄牛肝菌在 4 个 pH 处理培养基上均
能生长， 但在 pH 为 7 及 pH 8 的培养基上菌丝颜色变黄，且
菌落不完整，最适宜 pH 为 6，此时菌丝生长的各项指标均为
最佳，说明橙黄疣柄牛肝菌喜微酸性环境。
2.5 橙黄疣柄牛肝菌菌丝在不同葡萄糖含量下生长状况 从
表 4 可以看出： 橙黄疣柄牛肝菌在培养基中葡萄糖含量为
0.2%，0.5%，0.8%时，菌丝生长速度差别不大，菌丝洁白，菌
落完整。 但是在葡萄糖含量为 1.1%时，菌丝生长较慢，且菌
丝长势弱，颜色发黄，说明培养基中碳氮比例过高，不利于菌
丝生长。
2.6 橙黄疣柄牛肝菌菌丝在不同氮源下生长状况 从表 5
可以看出： 橙黄疣柄牛肝菌在含有机氮源的培养基中表现出
生长旺盛、菌丝生长迅速、菌落完整且菌丝颜色洁白的特点。
说明菌丝能够更好的吸收利用有机氮源。 菌丝在含有 3 种有
机氮的培养基上生长速度比较： 蛋白胨＞牛肉膏＞酵母浸粉。
在无机氮源培养基上生长缓慢、长势弱。可能是基础培养基中
已含有无机氮源硝酸钙，不能利用更多的无机氮源。
3 讨论与结论
橙黄疣柄牛肝菌的菌盖、 菌柄及两者交接处均能分离出
菌丝，另外采集与分离间隔时间越短，分离成功率越高，这与
栾庆书 [8]等研究外生菌根菌证实的结果一致。 研究证实两者
交接处分离成功率较菌盖及菌柄高， 这与其它食用菌分离成
活率规律相一致。
关于基础培养基的筛选方面，有的学者认为，天然基质组
成的培养基因其含有淀粉和丰富的维生素比人工合成的培养
基更有利于外生菌根真菌的生长，如田春杰[9]等人对几种外生
菌根真菌的培养特性进行研究， 结果表明，PDMA 和 PDA 培
表 1 橙黄疣柄牛肝菌的分离成功率（％）
培养基编号
分离材料
菌盖 菌柄 两者交接处
① 20 30 40
② 15 25 40
③ 20 30 50
④ 10 20 30
⑤ 20 40 60
70
60
50
40
30
20
10
0
5 10 15 20 25 30
培养时间/d
菌
落
直
径
/m
m
图 1 橙黄疣柄牛肝菌在 5 种培养基上的菌落直径
表 2 橙黄疣柄牛肝菌菌丝在不同温度条件下生长状况
温度
/℃
菌丝生长速度
20 d 平均值/（mm·d-1）
菌丝
密度
菌落边缘
整齐度
菌丝
长势
菌丝
颜色
22.5 1.51 较致密 整齐 ++ 洁白
25 1.93 致密 整齐 +++ 洁白
27.5 2.10 稀疏 不整齐 ++ 淡黄色
30 2.14 稀疏 不整齐 ++ 淡黄褐色
表 3 橙黄疣柄牛肝菌菌丝在不同 pH条件下生长状况
培养基
pH值
菌丝生长速度
20 d 平均值/（mm·d-1）
菌丝
密度
菌落边缘
整齐度
菌丝
长势
菌丝
颜色
5 1.95 较致密 不整齐 ++ 洁白
6 2.12 致密 整齐 +++ 洁白
7 1.91 较致密 不整齐 ++ 淡黄色
8 1.89 较致密 不整齐 ++ 淡黄色
表 4 橙黄疣柄牛肝菌菌丝在不同葡萄糖含量下生长状况
葡萄糖
/%
菌丝生长速度
20 d 平均值/（mm·d-1）
菌丝
密度
菌落边缘
整齐度
菌丝
长势
菌丝
颜色
0.2 2.04 致密 整齐 +++ 洁白
0.5 2.15 致密 整齐 +++ 洁白
0.8 2.18 致密 整齐 +++ 洁白
1.1 1.97 稀疏 不整齐 + 淡黄色
表 5 橙黄疣柄牛肝菌菌丝在不同氮源下生长状况
氮 源
菌丝生长速度
20d平均值/（mm·d-1）
菌丝
密度
菌落边缘
整齐度
菌丝
长势
菌丝
颜色
蛋白胨 2.15 致密 整齐 +++ 洁白
牛肉膏 2.12 致密 整齐 +++ 洁白
磷酸氢二氨 1.93 稀疏 不整齐 ++ 洁白
酵母浸粉 2.01 较致密 整齐 +++ 洁白
①
②
③
④
⑤
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为响应党中央建设社会主义新农村的号召， 发挥中国农
业科学院蔬菜花卉研究所公益型研究所的作用， 结合蔬菜所
菜病综防课题组承担的相关科研项目， 特向全国食用菌、蔬
菜、花卉、瓜类主产区免费提供病害诊断、防治技术服务。
主诊专家 李宝聚， 中国农业科学院蔬菜花卉研究所研
究员，博士，博士生导师（植物病理学、农药学 、农业微生物
学），国家蔬菜现代产业技术体系岗位专家（病害诊断与综合
防治）。
咨询方式 由于受人力限制， 仅接受送样与寄样病害诊
断及防治指导工作，原则上不接受电话咨询诊断工作，也不接
受明显是生理性病害的样品。对于邮寄的所有样品，诊断结果
和防治技术给予电话回复。对于地区性严重危害病害，根据专
家的工作安排，可以现场诊断，指导防治。
寄、 送样方式 可将发病部位制成半干样品用 “特快专
递”寄至本课题组。 具体方法：将食用菌子实体置于阴凉处晾
干，再用多层旧报纸包裹寄出。 蔬菜茎、叶部发病，可将病茎、
叶置于强日照下暴晒，任其失水半天左右；也可将其放在热锅
盖上烘烤，使其快速失水，半干后夹于旧报纸国寄出（叶片之
间也用报纸隔离）。 果实发病，可将病果或切开晾干的病斑部
位包裹于多层报纸中寄出。花和小苗等幼嫩多汁的样品，可夹
在多层报纸或卫生纸中压制寄出。 切记不要用塑料袋直接装
样品，那样容易腐烂。寄样品时请标明详细的采集时间、地点、
蔬菜种类及品种。 亦可将病样直接送至中国农业科学院蔬菜
花卉研究所菜病综防组。
地址：北京市海淀区中关村南大街 12 号
中国农业科学院蔬菜花卉研究所菜病综防组
邮编：100081 电话：010-89119659 联系人：石延霞
免费食用菌、蔬菜、花卉、瓜类病害诊断、防治咨询
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养基是培养外生菌根真菌较适合的培养基。 但是 Meyer [10]和
Richards[11]称外生菌根菌由于缺乏水解纤维素、胶质和其它复
杂有机化合物的酶而需要吸收根系分泌物里的简单有机化合
物。通常情况下，外生菌根真菌在生长过程中分泌胞外酶的能
力较弱，对天然培养基中的大分子营养物质利用较差，而较易
利用合成培养基中的小分子营养物质。 因此在合成培养基上
长势较好。 研究表明合成培养基即菌根菌培养基最适宜橙黄
疣柄牛肝菌菌丝生长。 另外研究中所用的菌根菌培养基未见
在其它牛肝菌分离培养中使用， 其适用的范围有待于今后做
进一步的研究。
研究中橙黄疣柄牛肝菌菌丝生长的最适温度为 25℃，属
于中温型菌根真菌，这与宋微 [12]等研究的同属不同种的褐疣
柄牛肝菌（Leccinum scabrum） 结果不一致，研究发现褐疣柄
牛肝菌为高温型菌根真菌，在 30℃下菌丝生长非常迅速，4～6 d
即长满整个培养皿。 研究中虽然也发现菌丝在 30℃下生长速
度最快，但是培养出的菌丝稀疏且颜色发黄，不利于进一步的
的扩繁培养。 笔者认为同一属的不同种菌丝生长最适温度有
差异，可能是地理位置及气候条件造成的。橙黄疣柄牛肝菌菌
丝生长的最适 pH 为 6，在 pH 为 7 或 8 时，菌丝变淡黄色，这
与 Laiho[13]等研究证实的结果一致，即在培养环境的 pH 接近
中性或碱性的条件下， 有些外生菌根菌在生长过程中会积累
色素。 培养基营养成分对橙黄疣柄牛肝菌菌丝的生长起着关
键的作用，橙黄疣柄牛肝菌能比较好的利用葡萄糖，并在葡萄
糖含量为 0.8%的培养基上菌丝生长最好， 但是在生产应用
中，为降低生产成本，以 0.5%葡萄糖含量的单糖作碳源培养
较好。有机氮可促进橙黄疣柄牛肝菌菌丝快速生长，但是该菌
不能很好的利用氨态氮及硝态氮，最佳有机氮源为蛋白胨，牛
肉膏、酵母浸粉次之。
研究仅对橙黄疣柄牛肝菌分离和培养进行初步研究，但
是关于菌根菌培养基应用的广泛性以及人工驯化栽培方面还
有待于进一步研究， 以期合理开发利用这一珍贵的外生菌根
菌资源。
致谢： 感谢石河子大学生命科学学院阎平教授对银白杨的鉴定
以及中科院昆明植物研究所杨祝良研究员对橙黄疣柄牛肝菌的鉴
定。
参考文献
[ 1 ] 卯晓岚.中国大型真菌[M].河南郑州：河南科学技术出版社，2000.
[ 2 ] 北屯概况和自然气候[EBOL]. http：//www.baidu.com.
[ 3 ] 梁 军，贾秀贞，王 媛，等. 2 种牛肝菌的生理学特性及抗盐
碱性[J].林业科学，2004，40（6）：115-120.
[ 4 ] 刘文科，冯 固，李晓林. 4 种菌根真菌对五氯酚耐受性及其生
理基础研究[J].农业环境科学学报，2004，23（4）：801-805.
[ 5 ] 于富强，纪大干，刘培贵.云南松外生菌根真菌分离培养研究[J].
植物研究，2003，23（1）：66-71.
[ 6 ] 陈士瑜.食用菌生产大全［M］.北京：农业出版社，1988：66-67.
[ 7 ] 佟丽华.乳牛肝菌菌种的分离、鉴定及培养[D].江苏南京：南京
师范大学，2006.
[ 8 ] 栾庆书，王淑清，韩瑞兴，等. 外生菌根菌的采集分离与培养初
探[J].辽宁林业科技，1998（2）：43-45.
[ 9 ] 田春杰，何兴元.几种外生菌根真菌培养特性的研究[J].微生物
学杂志，2000（20）：9-11.
[10] Meyer F H，Physiology of mycorrhiza [J].Annu Rev Plant Physiol，
1974（25）：567-582.
[11] Richards B N，Introduction to the soil ecosystem [J].Longman Essex
UK：Longman Group.Limited，l974，266.
[12] 宋 微，吴小芹. 12 种林木外生菌根真菌的培养条件[J].南京林
业大学学报（自然科学版），2007，31（3）：133-135.
[13] Laiho O，Paxillus involutus as a mycorrhizal symbiont of forest trees
[J].Acta For Fenn，1970（106）：45-72.
育 种 驯 化
19